杜仲内生真菌的分离鉴定及其对异甜菊醇的生物转化研究

目的:从植物杜仲的根、茎、叶中分离内生真菌并进行初步鉴定,并研究获得的杜仲内生真菌对异甜菊醇的生物转化活性。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,并对其进行异甜菊醇生物转化活性筛选实验。结果:从健康杜仲的根、茎、叶中分离获得52株内生真菌,属于2纲,2目,4科,10属。其中有4株内生真菌对异甜菊醇具有生物转化活性,分别为交链孢霉Alternaria sp.EL3、瘤座霉Tubercularia sp.ER3、镰孢霉Fusarium sp.EL7及青霉Penicillium sp.ES2。结论:杜仲内生真菌多样性丰富,部分内生真菌对异甜菊醇具有生物转化活性,具有很好的研究和应用价值。

异甜菊醇衍生物的合成及抗肿瘤活性

对异甜菊醇C-环、D-环进行结构修饰与改造,同时将其C_（19）-COOH成酯,设计并合成了9个未见文献报道的新化合物（5~13）,所有目标化合物的结构均经ESI-MS,IR,~1H NMR确定。采用MTT法测试了目标化合物对HCT116,Huh7,SW620及Hep G2等细胞的抗肿瘤活性。初步研究结果表明,化合物13表现出对人结肠癌HCT116细胞具有选择性抑制作用（IC_（50）=3.57μmol/L）,与阳性对照舒尼替尼（sunitininb）（IC_（50）=5.62μmol/L）活性相当,化合物10对HCT116,Huh7,SW620均有较强抑制作用。

异甜菊醇对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的在大鼠在体心肌缺血再灌注模型上进一步证实异甜菊醇对缺血再灌损伤心肌的保护作用。方法麻醉大鼠结扎左冠状动脉30min后再灌注90min。结扎前10min静脉注射异甜菊醇。心电图连续观察大鼠心室纤颤(VF)和室性心动过速(VT)的发生率;全自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性;测定心肌梗死范围;光学显微镜和电镜观察心肌组织学和超微结构改变。结果异甜菊醇0.5～2.0mg·kg-1有效减少大鼠心肌缺血再灌期VF和VT发生率,减少心肌梗死范围,降低血清LDH和CK活性。光镜及电镜观察可见异甜菊醇处理组心肌组织形态学及超微结构损伤明显轻于缺血再灌对照组。结论异甜菊醇对大鼠缺血再灌注损伤心肌有保护作用。

异甜菊醇抗麻醉大鼠心肌缺血复灌损伤的作用机制

目的研究双萜类化合物异甜菊醇抗心肌缺血复灌损伤作用与线粒体ATP敏感性钾通道(m itoKATP)开放的关系。方法用经典的大鼠冠状动脉结扎30 m in,再通90 m in,形成心肌缺血复灌模型。造模前iv异甜菊醇1.0 m.gkg-1和/或选择性m itoKATP关闭剂5-羟基癸酸(5-HD)10 m.gkg-1预处理,以血流动力学、心肌梗死面积、血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶的活性、心肌丙二醛含量、SOD、GSH-PX活性和心肌组织病理学检查,评价异甜菊醇抗心肌缺血复灌损伤的作用与m itoKATP的关系。结果异甜菊醇具有改善大鼠缺血复灌引起的心功能和组织损伤,降低心肌活性氧含量,但此作用可被预先给予的5-HD减弱。结论异甜菊醇抗心肌缺血复灌损伤的作用可能与m itoKATP的开放和活性氧减少有关。

异甜菊醇在大鼠离体肝灌流中的药代动力学研究

目的研究异甜菊醇在大鼠肝脏内的代谢情况。方法给予SD大鼠离体肝灌流（112）行异甜菊醇的初步药动学研究（体外试验）。分离5只大鼠肝脏然后用含有异甜菊醇的介质进行循环灌流，在时间为0、1、3、5、10、15、20、25、30、40、50、60rain时收集灌流液样品，每间隔10min收集胆汁样品，样品用HPLC—UV分析。尿液（前面实验收集）、灌流液和胆汁样品用β-葡萄糖醛酸酶（1-3U／μL）培养再进行HPLC—UV分析。结果40～50min后的灌流液中，HPLC法检测不到异甜菊醇，而胆汁中完全没有检测到。灌流液和胆汁分别经过β-葡萄糖醛酸酶／硫酸根培养后，色谱方法与灌流液的一样保持不变，胆汁样品中得到了明显的异甜菊醇峰。60min中的药动学参数正T1/2、AUClast、Vz（ods）、CLH、EH（肝脏提取率）和回收率（R0-60代谢率）分别为：（17．82±2．5）min、（258．18±33．2）min·μg／mL、（425．35±32．1）mL、（17．7±2．2）mL／min、（0．59±0．07）和（18．08±2．5）。结论经过40—50min灌流后异甜菊醇主要在肝脏中积累，以葡萄苷酸化形式从胆汁排泄，很可能大部分经过胆汁排泄慢慢的消除到粪便中。

甜菊醇和异甜菊醇与DNA作用方式的研究

甜菊醇是新型甜味剂甜菊糖在人体内的代谢产物,在酸性环境中可重排成异甜菊醇,它们都是重要的药物合成中间体。研究甜菊醇和异甜菊醇与DNA的作用方式有助于理解其药理或细胞毒性。以小牛胸腺DNA(CT-DNA)为模板,通过考察甜菊醇和异甜菊醇对CT-DNA熔点和粘度的影响,以及甜菊醇和异甜菊醇与CT-DNA体系紫外吸收的变迁,初步推断甜菊醇和异甜菊醇都是以沟槽方式与CT-DNA结合;异甜菊醇与CT-DNA的作用比甜菊醇与CT-DNA作用强。

异甜菊醇抗豚鼠离体心脏缺氧复灌损伤作用

目的 拟证实双萜类化合物异甜菊醇抗豚鼠离体心脏缺氧复灌损伤作用及与线粒体ATP敏感性钾通道 (mito KATP)的关系。方法 Langendorff装置逆向心脏灌注。预先灌注异甜菊醇 1,5和 10μmol·L- 1,5min ,流速约为 9.5mL·min- 1,全心停灌 30min ,复灌 2 0min ,观察心脏舒缩功能、冠脉流出液酶学和心肌组织学改变。结果异甜菊醇预处理有效减轻缺氧复灌引起的左室舒缩功能下降 ,降低冠脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶浓度 ;延迟停灌后心脏出现挛缩的时间。mito KATP关闭剂 5 羟基癸酸 10 0 μmol·L- 1可部分逆转异甜菊醇 10 μmol·L- 1的心肌保护作用。光学和电子显微镜观察结果表明 ,异甜菊醇预处理可减轻缺氧复灌引起的心肌纤维和线粒体损伤。结论 异甜菊醇 1～ 10 μmol·L- 1预灌注可有效减轻豚鼠离体心肌缺氧复灌引起的损伤 ,该作用可能与mito KATP的开放有关。

盐胁迫下异甜菊醇浸种对油菜种子萌发和幼苗生长的影响

【目的】探索异甜菊醇浸种对盐胁迫下油菜种子发芽及幼苗生长的影响。【方法】以秦油2号油菜种子为材料,在盐胁迫下添加不同浓度的异甜菊醇,对其进行浸种处理。统计油菜种子的发芽率、发芽指数和活力指数,测定幼苗苗高、根长、叶绿素含量、根系活力、丙二醛(MDA)含量及抗氧化酶活性等生理指标。【结果】单纯盐胁迫下,油菜种子的发芽力受到抑制,种子发芽指标显著减低,NaCl敏感浓度为140 mmol·L^-1;1×10^-8 mol·L^-1异甜菊醇浸种处理可显著增加盐胁迫下油菜幼苗的根系活力、子叶中叶绿素总量和SOD活性,分别比CK2(去离子水浸种、140 mmol·L^-1NaCl胁迫)增加27.33%、36.94%和83.31%;显著降低幼苗子叶的MDA的含量,比CK2降低32.11%。而1×10^-9 mol·L^-1异甜菊醇浸种处理可显著增加油菜幼苗子叶的POD和CAT活性,分别比CK2增加140.80%和47.25%。异甜菊醇浸种还可显著提高油菜种子的发芽率、发芽指数和活力指数,显著增加幼苗的苗高和根长。【结论】用适宜浓度(1×10^-9~1×10^-8 mol·L^-1)的异甜菊醇浸种可有效增强油菜幼苗的抗盐能力,缓解盐胁迫对种子发芽和幼苗生长造成的伤害。

异甜菊醇衍生物结构修饰及活性研究

异甜菊醇具有抗高血压、降低血糖、抑制癌细胞等药理作用,对近年来关于异甜菊醇研究的反应类型及生物活性进行了初步的综述。

HPLC法检测异甜菊醇钠注射剂中的有关物质

目的建立高效液相色谱法检查异甜菊醇钠注射剂（STVNa注射剂）中的有关物质。方法采用C18（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以水和乙腈为流动相进行线性梯度洗脱,流速为0.8 m L/min,柱温为40℃,检测波长为210 nm。结果空白溶剂及空白辅料均不干扰检测,本方法可将异甜菊醇（ISV）粗品和STVNa注射剂经破坏性试验所得样品中的杂质进行有效分离;重复性考察的RSD值为13%;在0.003~1 mg/m L质量浓度范围内与峰面积响应值呈良好的线性关系,相关系数为0.999 6。结论本方法专属性强、重复性好,可用于STVNa注射剂中有关物质的检查。

异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响

背景与目的:骨肉瘤恶性程度高、发展迅速、易转移且致残致死率高;其常用化疗药物的长期应用不良反应较大,存在着一定的局限性。异甜菊醇具有四环二萜结构,是很多抗癌药的合成起始剂,但其自身的抗癌活性鲜有报道。该研究旨在考察异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过MTT实验检测异甜菊醇对U-2OS细胞生长的影响;分别通过Hoechst 33342和PI染色分析细胞状态,检测细胞活性氧和细胞膜电位;用流式细胞术分析异甜菊醇处理细胞后细胞周期;通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的差异表达。结果:异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制呈现出时间和剂量依赖性;染色和流式细胞术实验显示,异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS作用24 h观察到细胞S期周期阻滞,48 h时观察到细胞凋亡;随着药物浓度升高活性氧显著增多,细胞膜电位逐渐降低,促凋亡相关蛋白Bax的表达上调,抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达下调。结论:异甜菊醇对人骨肉瘤U-2OS细胞有抑制生长作用,其作用机制可能与上调Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达有关。

异甜菊醇及其衍生物的合成与应用研究进展

甜菊糖苷是一种天然甜味剂,在酸性条件下水解为异甜菊醇。异甜菊醇具有降血压、降血糖、抗炎和抗肿瘤等生理活性。本文对异甜菊醇及其衍生物在抗炎、抗肿瘤、手性催化和分子识别方面的应用研究进行了总结。

异甜菊醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心电图影响

目的观察异甜菊醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心电图影响,并探讨它的作用与线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放的关系。方法结扎大鼠冠状动脉30 min,再灌注90min,造成心肌缺血再灌注损伤模型。结扎前静脉注射异甜菊醇和/或选择mitoKATP关闭剂5-羟基癸酸(5-HD)进行预处理,观察各组大鼠在整个缺血再灌注期间心电图ST段和室性心律失常发生情况。结果预先给予异甜菊醇0.5、1.0和2.0mg/kg,能有效降低大鼠心肌缺血再灌注损伤引起的ST段变化和室性心律失常的发生率;但此作用可被预先给予的5-HD减弱。结论异甜菊醇能降低心肌缺血再灌注损伤程度和室性心律失常发生率,其机理可能与mitoKATP的开放有关。*

重要单环倍半萜香料—甜没药烯和甜没药醇合成的进展

甜没药烯(Bisabolene)是杜松烯(Cadinene)和石竹烯(Caryophyllene)以外在自然界中分布最广的一种倍半萜烯。它早先曾由Tucholka从甜没药油(Bisabol myrrh oil或Opoponax Oil)中分离得到。接着Burgess和Page从香柠檬油(Oil of Bergmot)中也得到了同样物质。后来又证实了在其它许多精油中均有存在。甜没药烯是以α-体(Ⅰ),β-体(Ⅱ)和γ-体(Ⅲ)存在的。据报导它具有草香和辛香。

(±)-β-甜没药烯和(±)-α-甜没药醇的全合成

本文报导了一条从异戊二烯(Ⅰ)和甲基乙烯基酮(Ⅱ)出发全合成(±)-β-甜没药烯(Ⅴ)和(±)-α-甜没药醇(Ⅵ)的路线。Ⅰ和Ⅱ经Diels-Alder反应得到酮Ⅲ,Ⅲ和异戊烯氯经烷基化反应得酮Ⅳ。Ⅳ分别经Witting反应和Grignard反应得到Ⅴ和Ⅵ,总得率为15.9%和16.7%。

基于DESI-MSI技术和斑马鱼模式动物研究异甜菊醇类化合物的血脑屏障通透性

目的:本研究利用解析电喷雾电离质谱成像(DESI-MSI)技术和斑马鱼模式动物分析异甜菊醇类化合物的血脑屏障通透性,并分析其对神经细胞的抗缺氧保护作用.方法:以异甜菊醇钠(STVNa)及其衍生物(K-9)为目标小分子化合物,以斑马鱼为实验动物,通过浸泡给药,冷冻切片,利用DESI-MSI技术分析目标化合物在斑马鱼体内的组织分布,研究化合物的入脑情况;用OGD/R细胞模型检测其抗缺氧神经细胞保护活性.结果:质谱成像结果显示STVNa及K-9的离子信号在斑马鱼体内分布不同,前者整体分布较为均匀,后者更集中于眼部、脑部、腹鳍、尾鳍等特定器官或部位.细胞活性结果显示K-9具备不逊于STVNa的抗缺氧再灌注的神经细胞保护活性.结论:利用DESI-MSI技术和斑马鱼模式动物研究异甜菊醇类化合物的血脑屏障通透性,可为中枢神经药物研发初筛提供方法参考.

酱香白酒酿造轮次醇甜典型体基酒风味解析

采用液液萃取法结合气相色谱质谱法,对酱香型白酒酿造轮次醇甜典型体基酒的风味结构进行解析。感官品评分析结果表明,醇甜典型体基酒中除基本的酱香风味外,水果香、花香、甜香也较为突出。同时结合香气活性值(odor activity value,OAV)法分析醇甜典型体基酒的感官属性与特征香气化合物的关系,发现对7个轮次均具有主要贡献的成分主要有:十四酸乙酯、十六酸乙酯、油酸乙酯、糠醇、糠醛、2,6-二甲基吡嗪、2-乙基-6-甲基吡嗪、2,3,5-三甲基吡嗪和3-羟基-2-丁酮,共9种;除基本香气物质外,3-苯丙酸乙酯、苯乙酸乙酯对1、2轮次香气贡献较为突出;对3、4、5轮次中有较大贡献的风味物质不仅包括上述9种,还有戊酸乙酯、乙酸戊酯、辛酸乙酯、2,3-丁二醇、正壬醇、丁酸、异戊酸、苯乙酸乙酯、正己酸乙酯和3-苯丙酸乙酯;苯乙醛、苯乙酸乙酯在6轮次醇甜基酒中OAV较高,贡献较大;7轮次中具有香气贡献的物质以上述9种物质为主,呈焦糊香的吡嗪类物质OAV在7轮次中较高。该研究可丰富酱香白酒风味研究,助推赤水河流域酱香白酒产业基地建设及发展。

终止发酵法酿造“赤霞珠”低醇甜红葡萄酒的工艺

以宁夏贺兰山东麓产区生长的优质"赤霞珠"葡萄为试材,采用终止发酵法,研究了酿造低醇甜红葡萄酒的关键工艺技术。结果表明:酿造低醇甜红葡萄酒,原料达到技术成熟度的含糖量为218.3g·L^(-1),总酸含量为6.6g·L^(-1);酿造最优参数为原料在18℃低温浸渍60h;发酵温度控制在25℃;有效抑制酒精发酵的SO2浓度为200mg·L^(-1),温度降至0℃;明胶澄清葡萄酒的最佳使用量为60mg·L^(-1);葡萄酒感官综合分析平均值87分,B级酒,质量优良。

低醇甜红葡萄酒生产工艺研究

以黑品乐为原料,生产低醇甜红葡萄酒,葡萄原料经破碎,皮渣浸提、分离,发酵。其生产工艺条件:浸提温度为60～65℃,浸提时间30～50min,SO2的添加量为200～250mg/L,葡萄汁发酵温度为25℃;可采用添加200mg/L的SO2和100mg/L的山梨酸来贮存低醇甜红葡萄酒。(孙悟)