生发中心与非生发中心型弥漫大B细胞淋巴瘤的发病特点及预后因素分析

目的比较生发中心型(GCB)与非生发中心型(non-GCB)弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)发病特点和预后因素,为临床分层诊治和评估预后提供依据。方法回顾性分析西安交通大学医学院第一附属医院血液内科2010年3月至2013年12月期间收治并在病理科经组织学和免疫组化确诊的DLBCL患者168例,按照Hams分型标准,分为GCB和non-GCB两类,比较两组的临床特点、组织学分类;整理追踪其中45例non-GCB和25例GCB患者,分析其发病时临床分期、乳酸脱氢酶(LDH)、Ki67指数与国际预后指数(international prognostic index,IPI)评分关系。结果临床特点为:168例DLBCL患者中non-GCB型126例、GCB型42例,non-GCB型与GCB型在发病年龄和男女比例差异均无统计学意义(P值分别为0.085、0.157);组织学分类为non-GCB型中60例发生于淋巴结节内,66例发生于结外,其中胃肠道25例;GCB型中15例发生于淋巴结节内,27例发生于结外,其中胃肠道15例;GCB型中原发于胃肠道占35.7%,而non-GCB型原发于胃肠道占19.8%,GCB型中原发于胃肠道明显高于non-GCB型(P=0.036);预后分析显示non-GCB型和GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤中,起病时临床分期、LDH水平以及60岁以上(包括60岁)和以下组间差异无统计学意义(P值分别为0.775、0.414、0.863)。而non-GCB型患者IPI评分值(3-5)、Ki67(≥80%)均高于GCB型,具有统计学意义(P值分别为0.031、0.026)。结论 DLBCL中non-GCB型比GCB型更常见,nonGCB型与GCB型发病年龄、男女比例无显著差异;GCB型中原发于胃肠道明显高于non-GCB型;起病时临床分期、LDH水平、以及60岁以上(包括60岁)和以下组在non-GCB型和GCB型中无明显差异,而non-GCB型患者IPI评分值(3-5)、Ki67(≥80%)均高于GCB型,提示non-GCB型DLBCL预后较差,在选择化疗方案时应以二线方案为主。

t(14;18)为具有生发中心B细胞基因表达的弥漫性大B细胞淋巴瘤的一个独特的亚型

t(14;18)在滤泡型淋巴瘤的发病机制中起关键作用,它通过插入免疫球蛋白重链基因增强子而下调抗凋亡基因bc1-2的表达,约有1/3的原发性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)可发现t(14;18)(q32;q21)及bc1-2基因重排。但是,是否t(l4;18)代表了一种新的DLBCL亚型,以及它在DLBCL发病机制中的作用尚不清楚。最近发现2种DLBCL的亚型,一种具有正常B细胞生发中心即生发中心B细胞样(GCBL)表型,另一种具有活化的外周血B细胞表型即活化B细胞样(BCL)表型。作者检查了内布拉斯加州大学等医疗中心DLBCL患者的基因表达,以确定t(14;18)在其发病中的作用。

生发中心中B细胞发育分子机制研究进展

生发中心是一个动态的微环境,涉及到B细胞发育和成熟的诸多环节:抗原激活的B细胞克隆性扩增,Ig可变区基因的体细胞高突变,Ig类型转换,高亲和力B细胞克隆的阳性选择,无关或自身反应性B细胞克隆的阴性选择,最终生成记忆B细胞和浆细胞。在免疫系统中,凋亡是调节B淋巴细胞成熟和稳定的基本机制,凋亡的调控对于B淋巴细胞的生长和分化十分重要。掌握生发中心B细胞凋亡过程中细胞间的相互作用和调控机制,对于全面了解生发中心反应的细胞动力学、分子动力学以及淋巴瘤的发病机制非常重要,这可为淋巴瘤的诊断和治疗提供依据。

生发中心B淋巴细胞活化机制研究进展

B淋巴细胞介导的体液免疫作为机体抵御外界病原微生物的防御机制之一,在维持机体免疫稳态中发挥重要作用。其中,生发中心是体液免疫发生的重要部位,B淋巴细胞在此处的活化受多种因素调控。T细胞的辅助参与、免疫球蛋白的多样性以及充足的能量供应都会影响B淋巴细胞产生特异性抗体的过程以及发挥免疫效应的功能。此外,一些免疫相关疾病也与生发中心B淋巴细胞活化密切相关。本文就B淋巴细胞在生发中心活化的相关机制及其活化异常所导致的相关疾病进行综述。

生发中心B细胞应答异常引起的自身免疫性疾病研究进展

文章综述并深入介绍了参与生发中心反应的相关因子和目前对治疗免疫性疾病的抗体和药物研究的进展,对应用于自身免疫性疾病的研究和治疗进行一定的理论总结,为了解生发中心B细胞的应答过程及其与自身免疫性疾病的联系,掌握相关细胞因子对关节炎等自身免疫性疾病的作用,具有一定的理论和临床意义。

脊髓C6-7弥漫大B细胞淋巴瘤(非生发中心亚型)1例

患者男性,53岁,因1个月前无明显诱因出现右侧腋窝疼痛,初始未予重视,症状一直未好转,半个月前患者出现右半身麻木,于当地医院行颈胸段MRI示脊髓异常信号影(图1),后至上海华山医院行全身PET检查提示:椎管内占位,考虑脊髓内原发恶性病变。患者症状逐渐加重,术前1天出现左臀部及左下肢麻木,于2018年7月1日江苏省盐城市第一人民医院进行手术,术中见肿瘤位于脊髓内背侧,大小1 cm×1 cm,质较软,边界欠清,取少量肿瘤(直径约0.5 cm)送快速病理检查,提示为恶性肿瘤,之后行肿瘤完整切除术,血清学及生化指标检查未见明显异常。

Toll样受体4增强β2糖蛋白1免疫小鼠B细胞的活化

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白Ⅰ(β2GP1)免疫的小鼠中,对B细胞活化过程的影响。方法将C3H/HeN(TLR4正常型)和C3H/HeJ(TLR4缺陷型)2种小鼠随机分为β2GP1免疫组和生理盐水对照组,分别注射β2GP1或等量的生理盐水进行免疫。采用皮下多点注射进行初次免疫,2次腹腔注射加强免疫,最后冲击免疫的方法免疫小鼠。采用间接ELISA检测小鼠血清中抗β2GP1抗体的效价;HE染色观察小鼠脾脏生发中心数量及大小的变化;免疫组织化学法观察脾脏生发中心内的CD40配体(CD40L)表达;流式细胞术检测小鼠脾脏B淋巴细胞中共刺激分子CD80和CD86的水平变化。结果经β2GP1免疫后,2种小鼠血清中均出现高效价的抗β2GP1抗体,且C3H/HeN血清效价高于C3H/HeJ小鼠。与生理盐水对照组相比,2种小鼠经β2GP1刺激后,CD40L、CD19+CD80+细胞和CD19+CD86+细胞的数量均显著增加;但C3H/He J小鼠CD40L,CD19+CD80+细胞和CD19+CD86+细胞的数量低于C3H/He N小鼠。经β2GP1刺激的小鼠脾脏生发中心,比生理盐水组更大更多,C3H/HeN小鼠的生发中心的数量多于C3H/HeJ小鼠。结论 TLR4增强β2GP1免疫小鼠B细胞的活化。

神经递质γ-氨基丁酸对小鼠B淋巴细胞分化和抗体生成的影响

目的 探索神经递质γ-氨基丁酸(GABA)对B细胞分化和抗体生成的影响,为提高疫苗有效性提供新的靶点和策略。方法 流式分选经绵羊红细胞免疫小鼠的脾幼稚B细胞、生发中心B细胞和浆细胞,荧光定量PCR检测GABA A1型受体(Gabra1)和Gabra2、GABA B1型受体(Gabbr1)和Gabbr2、溶质运载蛋白6A家族成员1(Slc6a1)、Slc6a11、Slc6a12和Slc6a13 mRNA表达。建立B细胞体外分化体系,分离小鼠脾B细胞与NB-21饲养层细胞共培养,流式细胞术检测GABA 0.2,1.0和2.0 mmol·L^(-1)对浆细胞分化百分比的影响。每只小鼠ip给予100μg乙酰化4-羟基-3硝基苯基偶联钥孔血蓝蛋白(NP-KLH)和0.1 mL铝佐剂构建经典的抗原免疫小鼠模型,分为免疫+PBS和免疫+GABA组。正常对照组注射0.1 mL双蒸水和0.1 mL铝佐剂。免疫+PBS和免疫+GABA组分别ip给予PBS和GABA 20 mg·kg^(-1),每天1次,共12 d。第13天流式细胞术分析小鼠脾生发中心B细胞、总浆细胞和IgG_(1)^(+)浆细胞百分比,ELISA检测血清中抗原特异性抗体水平;第27天后流式细胞术分析骨髓中抗原特异性浆细胞百分比。结果 绵羊红细胞免疫小鼠幼稚B细胞、生发中心B细胞和浆细胞均表达Gabbr1。在B细胞体外分化过程中,与细胞对照组相比,GABA1.0和2.0 mmol·L^(-1)处理均显著促进幼稚B细胞向CD138^(+)浆细胞分化(P<0.01)。与正常对照组相比,免疫+PBS组小鼠脾生发中心B细胞百分比增加(P<0.01),总浆细胞和IgG_(1)^(+)浆细胞百分比增加(P<0.05,P<0.01);骨髓中抗原特异性浆细胞百分比增加(P<0.01);血清抗原特异性抗体水平升高(P<0.01)。与免疫+PBS组相比,免疫+GABA组总浆细胞(P<0.01)和IgG_(1)^(+)浆细胞百分比(P<0.05)增加,骨髓中抗原特异性浆细胞百分比增加(P<0.05),血清抗原特异性抗体水平升高(P<0.01)。结论 神经递质GABA可促进浆细胞分化和高亲和力抗体生成,其在调控B细胞分化过程中发挥重要作用。

生发中心相关核蛋白研究进展

生发中心相关核蛋白(germinal center-associated nuclear protein,GANP)是一种小分子的编码蛋白,参与构成mRNA输出支架蛋白、影响mRNA核输出、调节DNA的修复、保护细胞延缓衰老、促进B细胞活化、产生高亲和力抗体等一系列生物学过程,涉及细胞生长调控、免疫系统活化及肿瘤调控等领域,影响着人类的健康。

^(18)F-FDG PET/CT Deauville评分及ΔSUV_(max)评估弥漫性大B细胞淋巴瘤化疗中期预后的价值

目的探讨18氟-氟代脱氧葡萄糖正电子发射体层摄影技术/计算机体层摄影技术(^(18)F-FDG PET/CT)显像Deauville评分和最大标准化摄取值的变化(ΔSUV_(max))在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)化疗中期预后评估中的价值。方法回顾性分析78例DLBCL患者化疗中期^(18)F-FDG PET/CT图像资料。对ΔSUV_(max)、ΔSUV_(max)%进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,分别采用ΔSUV_(max)及ΔSUV_(max)%的最佳临界值、Deauville评分分组,并按免疫组化结果分为生发中心(GCB)型和非GCB型。进行Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析,分析Deauville评分法和ΔSUV_(max)法的预后评估能力。结果78例患者分为进展组24例和未进展组54例;进展组ΔSUV_(max)均值为(3.42±9.90),低于未进展组的(8.76±5.58),差异有统计学意义(P<0.05);进展组中位数ΔSUV_(max)%为34.88%,低于未进展组的78.16%,差异有统计学意义(P<0.01)。ΔSUV_(max)及ΔSUV_(max)%的曲线下面积(AUC)分别为0.667、0.882(P<0.01),分别以临界值7.95、67.34%分组,Kaplan-Meier分析显示2年无进展生存期(PFS)的差异有统计学意义(44.4%与82.4%,33.3%与95.6%,P<0.01)。Deauville<4分(PET阴性)组的2年PFS为91.9%,高于Deauville≥4分(PET阳性)组的48.8%,差异有统计学意义(P<0.01)。GCB型2年PFS为90.3%,高于非GCB型的55.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。Cox多因素分析显示ΔSUV_(max)%及免疫组化分型为独立预测因素(P<0.01)。结论Deauville评分法和ΔSUV_(max)法在DLBCL化疗中期预后评估中均有较高的价值,ΔSUV_(max)%及免疫组化分型为PFS的独立预测因素。

弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白基因重排特点及规律研究

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生发中心B细胞型(GCB)及非生发中心B细胞型(non-GCB)中Ig基因重排的特点及规律。方法采用免疫组化法检测46例DLBCL中CD10、BCL-6、MUM1表达,采用Hans免疫分型方法将DLBCL分为GCB和non-GCB;同时提取所有样本基因组DNA,利用BIOMED-2克隆分析系统进行PCR扩增Ig基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排情况,并以15例反应性增生病变作为阴性对照。结果46例DLBCL样本中GCB 12例、non-GCB 34例,其中45例样本扩增出Ig基因的克隆性重排条带,检测敏感性为97.8%,15例反应性增生病变均未检测到重排条带,检测特异性为100.0%。GCB和non-GCB重链IGH重排差异无统计学意义(P>0.05),但轻链IGκ-A、IGκ-B和IGλ重排差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GCB和non-GCB的Ig基因轻链重排条带分布具有显著的特点和规律,可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据。

异位生发中心在干燥综合征靶器官损害中的作用

原发干燥综合征是以自身免疫性上皮炎为病理基础的自身免疫性疾病,异位生发中心与多种自身免疫性疾病的靶器官损伤相关,但在干燥综合征发病机制中的作用尚不明确。本研究从树突细胞呈递抗原,B细胞的募集活化及白细胞介素17等多种炎症因子的参与等方面简述异位生发中心形成及炎症反应在干燥综合征靶器官损伤中的作用。

免疫化疗的弥漫大B细胞淋巴瘤预后因素分析

目的探讨免疫化疗的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的国际预后指数(IPI)、生发中心型(GC型)、非生发中心型(non-GC型)及外周血淋巴细胞绝对计数(ALC)与预后的关系。方法回顾性分析78例免疫化疗的DLBCL患者入院时的IPI评分、ALC和免疫组化检查结果,并结合随访资料,应用统计学软件进行生存分析。结果预后分析显示,IPI评分与3年总生存期(OS)和3年无进展生存期(PFS)有关(P=0.025,0.01);GC型、non-GC型及治疗前ALC高低与预后无明显的相关性。non-GC型的低ALC组DLBCL患者OS(55.3%,P=0.034)和PFS(47.7%,P=0.006)与其他3组比较显著降低。结论 IPI评分与免疫化疗的DLBCL患者的预后相关;治疗前ALC与免疫化疗的DLBCL患者预后无关,但低ALC的non-GC型是行免疫化疗的DLBCL的独立预后不良因素。

USP10在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及生物信息学分析

目的探讨泛素特异性蛋白酶10(ubiquitin-specifi c protease 10,USP10)蛋白及其m RNA在人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)与淋巴结反应性增生(reactive lymph node hyperplasia,RLH)中的表达及其临床意义。方法选取70例人DLBCL及70例RLH组织,采用组织芯片和免疫组织化学染色检测USP10的蛋白表达,分析其与DLBCL分子亚型及DLBCL预后相关分子之间的关系,并采用GEO数据库分析USP10 m RNA表达水平。结果 USP10在DLBCL组织中的阳性表达率显著高于RLH组织的B淋巴细胞,在非生发中心亚型(non-germinal center B-cell-like type,nonGCB)DLBCL组织中的阳性表达率明显高于生发中心亚型(germinal center B-cell-like type,GCB)DLBCL组织;Spearman等级相关分析显示,USP10与DLBCL预后相关分子中的CD5、Bcl-2蛋白表达呈正相关,而与p53,c-Myc及Ki67蛋白表达无相关性;USP10 m RNA在DLBCL组织及RLH组织中的表达差异。结论 USP10在DLBCL组织中的表达明显增加,尤其是在预后较差的non-GCB亚型或CD5阳性或无Bcl-2阳性的DLBCL中,表明该蛋白是DLBCL患者预后不良的分子标记物之一。

SOX11可表达于Cyclin D1阴性母细胞样套细胞淋巴瘤

近期的研究表明SOX11表达有助于套细胞淋巴瘤（MCL）的诊断,包括具有典型形态学改变的cyclin D1阴性MCL。本文作者探讨了SOX11在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）某些亚型中的表达模式及其特异性,并将其作为免疫表型特征分析cyclin D1阴性的母细胞样MCL（该组病例系首次报道）的识别价值。

原发性睾丸DLBCL临床病理特征和免疫表型分析

目的探讨原发性睾丸弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的临床病理和免疫表型特征。方法分析10例原发性睾丸DLBCL的临床病理特点;免疫组织化学检测CD10、Bcl-6、MUM1、Bcl-2和Ki-67的表达,并进一步区分其生发中心B细胞(GCB)或非GCB细胞免疫表型。结果 10例患者平均年龄65岁(51～79岁),Ⅰ～Ⅱ期8例(87.5%)。失访3例,6例患者在发病后5～42月内复发或死亡。CD10、Bcl-6、MUM1、Bcl-2的表达率依次为0,50%,70%,100%。9例显示非GCB细胞免疫表型,1例显示GCB免疫表型。Ki-67平均指数70%。结论原发性睾丸弥漫大B细胞性淋巴瘤显示非GCB细胞免疫表型特征及Bcl-2和Ki-67高表达可能与其不良预后有关。

阿卡替尼增强利妥昔单抗生物类似药HLX01对非GCB型DLBCL耐药细胞株的杀伤效果

目的:探索阿卡替尼(Aca)联合利妥昔单抗(RTX)生物类似药HLX01增强对耐RTX的非生发中心B细胞样(非GCB型)弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株杀伤效果的相关机制。方法:(1)采用RTX浓度梯度递增结合大剂量间断冲击的方法在体外构建耐RTX的人非GCB型DLBCL细胞株NU-DUL-1-R。流式细胞术检测RTX补体依赖的细胞毒性(CDC)及抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)作用下耐药株和亲本株的死亡率,并检测亲本株和耐药株的生长曲线、细胞周期及表面抗原CD20、CD55和CD59表达。(2)用浓度为2.5、5、10、20、40和80μmol/L的单药Aca分别处理NU-DUL-1-R细胞48 h后,采用CCK-8法检测细胞活力抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50)。再以20%新鲜正常人血清为补体来源,羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记肿瘤细胞后建立外周血单个核细胞与肿瘤细胞(效靶比为5∶1)体系,采用7-氨基放线菌素D(7-AAD)流式染色检测Aca联合RTX处理NU-DUL-1-R细胞后CDC及ADCC效应诱导的细胞死亡率,ELISA法检测白细胞介素17(IL-17)的表达,流式细胞术分析Th17细胞的比例。结果:(1)RTX对耐药株的CDC及ADCC效应均减弱;与亲本株相比,耐药株生长速度减慢,细胞周期分布改变,G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05),CD20表达下调(P<0.05),但CD55及CD59表达无显著差异(P>0.05)。(2)Aca对NU-DUL-1-R细胞的IC50为12.51μmol/L;Aca与RTX联用组对NU-DUL-1-R细胞的CDC及ADCC作用均强于单药组(P<0.05)。Aca处理后Th17细胞比例降低,IL-17的分泌减少;与单用RTX组相比,Aca与RTX联用后Th17细胞比例和IL-17分泌水平均显著降低(P<0.05)。结论:耐RTX的人非GCB型DLBCL细胞株NU-DUL-1-R较亲本株生长速度减慢,细胞周期分布改变,表面CD20抗原表达减少;Aca增强了RTX生物类似药HLX01对非GCB型DLBCL耐药细胞株的杀伤作用,其机制可能与Aca减少IL-17的分泌有关。

NF-κB信号传导通路与弥漫性大B细胞淋巴瘤研究进展

根据基因表达谱研究，弥漫性大B细胞淋巴瘤至少可分为三种分子亚型：生发中心B细胞样的弥漫性大B细胞淋巴瘤（GCB—DLBCL），活化性B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤（ABC—DLBCL），原发性纵隔大B细胞淋巴瘤（PMBL）。后两者生长、增殖依赖于NF—κB信号转导通路异常活化和NF—κB靶基因高表达。研究揭示，该信号传导通路可能成为治疗该类DLBCL的潜在靶点。现对NF—κB信号传导通路与弥漫性大B细胞瘤的相关研究进展作一综述。

生发中心的研究进展

生发中心在Ｔ细胞依赖性抗体应答中起了不可忽视的作用，它与Ｂ细胞的克隆扩增、体细胞高度突变、亲和力成熟、凋亡选择以及记忆Ｂ细胞的形成都有着密切的关系，这其中还涉及多种细胞和分子之间的相互作用，因而对生发中心作深入的研究，将使我们更能清晰的了解体液免疫应答的全过程。