生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法 采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果 显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论 不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞移植瘤作用及原理探讨

目的探讨生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞移植瘤的作用及原理。方法建立人胃癌细胞皮下移植瘤裸鼠模型,随机分为5组:空白对照组、正义链(SODN)对照组和100、200、400nmol/L3种浓度的反义链(ASODN)组。注射相应试剂2d、4d、8d、12d、16d、20d后测定移植瘤体积,计算抑瘤率和肿瘤缩小率,并采用免疫组化二步法检测各组移植瘤中转录激活因子STAT-3蛋白的表达水平。结果空白对照组及SODN对照组在肿瘤体积、抑瘤率及肿瘤缩小率等方面的差异无统计学意义(P>0.05);ASODN组的肿瘤体积随着浓度和时间的增加而减小,肿瘤缩小率则提高,抑瘤率明显高于对照组,呈时间和剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);400nmol/L ASODN组的抑瘤率最大达到94%。ASODN组皮下肿瘤中STAT-3表达水平明显高于对照组,且呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论生存素反义寡核苷酸能够抑制人胃癌细胞移植瘤的生长,且能够通过负反馈调节,增加转录激活因子STAT-3的表达,为胃癌的治疗提供新治疗思路。

生存素反义寡核苷酸诱导膀胱癌细胞凋亡及增强其化疗敏感性

为探讨生存素反义寡核苷酸（生存素-ASODN）对化疗药多西紫杉醇（泰索帝）诱导膀胱癌细胞系BIU87细胞凋亡的影响。将已构建成功的生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-Swas通过脂质体介导转染膀胱癌细胞系BIU87，并筛选转染成功的阳性克隆；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测其生存素mRNA表达；锥虫蓝拒染法观察生存素-ASODN与泰索帝联合应用对BIU87细胞生存的影响；

生存素反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 生存素 (survivin)是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员 ,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此 ,观察生存素反义寡核苷酸转染对肝癌细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)。肝癌细胞株hepG2 分为 6组 :空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、2 0 0、40 0和 6 0 0nmol/LASODN转染组。作用 2 0h后收获各组细胞。倒置显微镜观察细胞形态变化 ,Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况 ,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数 ,MTT法检测 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和顺铂 (DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果 各ASODN转染组细胞生存素表达有不同程度减弱 ,细胞变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等 ,而各对照组细胞生长良好 ;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;各ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;等浓度化疗药物 5 FU和DDP对各ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组(P <0 .0 5 ) ,以 6 0

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞的抑制作用

目的研究生存素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞系HS746T的抑制作用。方法应用SurvivinASODN转染胃癌细胞,设空白、脂质体和正义链对照组,100、200和400nmol/L反义链组。电镜下观察细胞超微结构,流质细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及Westernblot法检测转染后2～48h细胞凋亡指数(AI),生长抑制率(IR),SurvivinmRNA和蛋白表达的变化。结果转染后反义链组均能够下调SurvivinmRNA含量和蛋白表达,凋亡细胞增多。转染后24h100、200和400nmol/L反义链组AI为14.8%、19.4%及53.8%;IR(%)为45.98±2.99、50.96±3.38、72.79±2.48,反义链组高于其他对照组。结论Survivin反义寡核苷酸能够抑制胃癌细胞增殖。

生存素反义寡核苷酸联合P53基因抑制胃癌细胞的生长作用

目的研究生存素(survivin)反义寡核苷酸联合抑癌基因P53对人胃癌细胞系HS-746T的抑制作用及机制。方法用P53基因和设计合成的survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞系HS-746T进行处理,分空白对照组、反义survivin转染组,P53基因组,反义survivin加P53共转染组。采用细胞计数和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力及细胞生长速度,用RT-PCR技术和Western印迹法分析survivinmRNA及蛋白质的表达情况,末端原位标记染色法(TUNEL)分析细胞凋亡指数。结果不同时间反义survivin转染组、P53基因组和共转染组均对胃癌细胞的生长有抑制作用,且能够下调胃癌细胞survivinmRNA和蛋白质的表达,共转染组较单独用药组效应明显增强,共转染组胃癌细胞凋亡指数高于另外两组。结论Survivin反义寡核苷酸联合P53基因抑制人胃癌细胞的生长及诱导凋亡的作用大于单独应用一种药物。