帕菲特非同一性问题的再审视——以人类生殖系基因编辑为例

非同一性问题是指当某个行为是个体存在的肇始原因时,尽管该行为对这些个体造成不可避免的伤害,但他们仍然不能抱怨受到不公正待遇。根据这一观点,部分学者认为,生殖系基因编辑并没有对被编辑个体及其由此发育而来的未来后代造成伤害。然而,由于这一论证过程存在理论适用错误及其逻辑谬误,非同一性问题无法否认生殖系基因编辑对未来后代造成的潜在伤害,因此,在实施该技术时,应该把为未来后代纳入当代人的伦理考虑范围之内。

人类生殖系基因编辑技术合理应用的证成逻辑与制度调适

人类生殖系基因编辑技术飞速发展,为我国罕见病患者基因治疗带来了机遇.由于其自身安全、技术伦理、技术滥用、生物安全等风险,立法明令禁止该技术的医疗应用,致使罕见病患者无法借助这一技术治愈自身疾病.为促进技术合理发展、保障少数群体基本权利、实现正义价值,生殖系基因编辑技术应从禁止应用转向合理应用.技术的合理应用应遵循例外允许、必要性、风险评估、后世代利益持续保护原则.为了更好落实这些原则,应匹配技术合理应用的分类规制规则、严格准入规则、审慎监管规则.人类生殖系基因编辑技术合理应用的制度调适,既能防范技术应用的潜在风险,又能促进技术在人类生命与健康发展中尽其所长,进而提升人类的共同福祉.

人类生殖相关新基因的定位和组织表达

基因定位对研究基因之间以及基因与疾病之间的相互关系具有重要意义。应用辐射杂种细胞系技术(RH)对我们克隆的人类新基因HBRP(HumanBSP RelatedProtein)进行了染色体定位,结果将该基因定位于19q13.2～13.3,同时应用生物信息学方法在人类基因组重叠片段数据库进行该基因的定位,结果相吻合。研究证明,RH技术具有快速、精确、简便等优点,是基因定位研究中一强有力的技术。同时通过RT PCR方法研究了HBRP基因在人体各组织中的表达分布,结果显示该基因在睾丸、肠、肾、肝、脾、胃、胰腺组织有较高的表达,而在检测的脑、肺、骨骼肌、心肌组织中表达较弱。

孕鼠暴露双酚A对仔鼠存活率、生殖激素及相关基因的影响

为了研究孕鼠在孕期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对仔鼠生殖激素及相关基因的影响,试验将40只昆明孕鼠随机分为A、B、C、D共4组,每组10只。其中A组为对照组,饲喂普通鼠粮;B、C、D组孕鼠整个妊娠期(妊娠1d至分娩)分别按每只鼠每天50、500、2 500mg/kg体重给予BPA,待孕鼠自然分娩,观察记录仔鼠死亡情况。至仔鼠性成熟(56日龄)剖杀仔鼠,摘取睾丸或卵巢称重并计算脏器指数,HE染色观察卵巢或睾丸组织结构的变化,ELISA试剂盒分析仔鼠血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)及雌二醇(E2)水平,免疫组织化学方法检测仔鼠睾丸或卵巢Bax、Bcl-2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测仔鼠睾丸StAR、CYP11a或卵巢AMH、Kitlg mRNA表达。结果显示,孕鼠暴露BPA极显著增加了仔鼠死亡率(P<0.01),显著降低了仔鼠睾丸重(P<0.05)。ELISA检测结果表明,孕鼠暴露BPA极显著降低了仔鼠T(♂)及FSH(♀)含量(P<0.01),极显著升高了仔鼠(♀)E2水平(P<0.01)。HE染色结果显示,随BPA剂量增加,仔鼠睾丸组织损伤严重,间质细胞减少;卵巢组织结构随BPA剂量增大,空泡逐渐增多,黄体颗粒数量逐渐减少。免疫组化结果显示,孕鼠暴露BPA增加了仔鼠睾丸或卵巢组织中Bax阳性蛋白表达,减少了Bcl-2阳性蛋白表达,显著降低了雄性仔鼠StAR mRNA表达量(P<0.05);B、D组雄性仔鼠CYP11amRNA表达量极显著降低(P<0.01),而C组CYP11amRNA表达量极显著升高(P<0.01);C、D组雌鼠Kitlg mRNA表达极显著降低(P<0.01),AMH mRNA表达量显著升高(P<0.05)。本试验结果表明,孕鼠妊娠期暴露不同剂量BPA增加了仔鼠死亡率,扰乱了生殖激素平衡和睾丸/卵巢中相关凋亡蛋白及生殖基因表达。

论生殖系基因编辑的规范与监管——基于“基因编辑婴儿”事件的分析

“基因编辑婴儿”事件引发了生殖系基因编辑的科学研究在技术和伦理层面的巨大争议。我国在生殖系基因编辑问题上,既面临个体权利与社会利益的价值冲突、科研自由缺乏明确的法律底线、受试者及出生婴儿的权利亟待保护三重法理困境;又存在法律规定分散、难以实操和监管羸弱两大缺陷。应当参考生殖系基因编辑的实践经验,以及科学界对其达成的规范共识,在分类限定治疗型生殖系基因编辑的前提下,以加强生殖系基因编辑的监管制度、完善受试者和已出生婴儿权利保护为进路,强化生殖系基因编辑的规范与监管。

非法植入基因编辑、克隆胚胎罪的解释学审视——对立法批判论的回应

非法植入基因编辑、克隆胚胎罪设立后,学界存有部分反对观点认为本罪分则位置及实行行为的规定存在问题。基于解释论的立场,本罪保护法益为基因库安全、人性尊严以及公共卫生管理秩序,立法通过对形式法益的保护一并实现了对实质法益的保护,且公共卫生管理秩序是主要法益,故本罪在刑法分则中的体系位置无可厚非。因为“植入人或动物子宫”的行为是实现生殖系基因编辑或生殖性克隆目的的必经阶段,所以本罪实行行为的规定在技术层面上彻底断绝了被基因编辑、克隆的细胞发育成存活个体的机会,从而达到了对该犯罪行为规制的立法目的。

雷公藤多苷诱导小鼠睾丸生殖相关基因异常表达及补肾中药的干预作用

目的:探讨雷公藤多苷诱导小鼠睾丸生殖相关基因的表达及补肾中药的干预作用。方法:成年Balb/C雄性小鼠,以雷公藤多甙30 mg/(kg.d)灌胃3周,造成生殖减退模型。随后,分别予生理盐水0.25 ml/d、雷公藤多甙30 mg/(kg.d)、肉苁蓉煎液[相当于生药10 g/(kg.d)]、熟地煎液[相当于生药10 g/(kg.d)]、肉苁蓉、熟地等比例的煎液[相当于生药20 g/(kg.d)]每日1次灌胃进行干预;另设肉苁蓉预处理组持续给予雷公藤多甙30 mg/(kg.d)和肉苁蓉煎液[相当于生药10 g/(kg.d)],每日1次灌胃,灌胃3周。检测各组睾丸生殖相关基因Dzip1、Fas、c-jun、Wnt4的表达量的变化。结果:雷公藤模型小鼠Y染色体微缺失相关基因Dzip1表达下调,生殖细胞凋亡相关基因Fas表达上调,原癌基因c-jun表达上调,信号转导相关基因Wnt4表达上调,补肾中药干预后均有不同程度改善,其中以补益肾阳药物肉苁蓉与补益肾阴药物熟地联合应用效果最显著。结论:雷公藤多苷对生殖相关基因的表达有影响;补益肾阳药物肉苁蓉能够部分拮抗雷公藤生殖毒性,补益肾阴药物熟地亦表现出一定的拮抗雷公藤生殖毒性作用,联合应用肉苁蓉和熟地则加强了拮抗雷公藤生殖毒性的作用,揭示了阴中求阳、阴阳互根互用的现代药理基础。肉苁蓉有一定的预防雷公藤生殖毒性的作用。

GnIH多肽对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)下丘脑生殖相关基因表达的影响

本研究首次通过下丘脑离体孵育的方法研究促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)多肽对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)下丘脑中生殖相关基因的表达调控。研究结果显示,tsGnIH-1促进了gnrh2和gnih的表达,对gnrh3和kiss2的表达无影响;tsGnIH-2抑制了gnrh3的表达,对gnrh2、kiss2和gnih的表达无影响。GnIH多肽对生殖相关基因的不同调控表明同一前体蛋白编码的不同GnIH多肽在生殖调控中的作用不尽相同。本研究结果增加了对GnIH参与鱼类生殖调控机制的认识,为深入研究奠定了基础。

Figla基因过表达促进小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化

生殖系a因子(Figla)是最早表达的生殖细胞特异性转录因子之一,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用.Figla基因异常会引起卵巢早衰的发生.本研究通过PCR自小鼠基因组中扩增出Figla基因,将其克隆到真核报告载体pDsRed1-N1,构建了携带609 bp的Figla重组载体pDsRed1-N1-Figla.用该载体转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)系J1、小鼠成纤维细胞系NIH-3T3、小鼠畸胎瘤细胞P19和小鼠精原细胞系GC1,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白(RFP)在细胞中的表达,同时检测转染细胞中Figla基因及其它生殖细胞特异性基因的表达.结果显示,转染2 d,mESCs内Figla总表达量明显增加,且内源性表达量亦有所提高,即转入的外源性Figla基因可以促进内源性Figla的启动和表达.免疫荧光染色显示,表达RFP的细胞同时表达生殖特异性基因Vasa,减数分裂特异性基因Stra8、Scp3及卵母细胞标志基因Zp3.通过QRT-PCR检测发现,在转染3 d的细胞中,Vasa、Scp3和Zp1的表达较对照组均有明显上调,而Oct4和Stra8的表达量下降.研究表明,Figla基因对生殖特异性基因的表达具有调控作用,可以激活雌性生殖基因表达,为更清楚地了解Figla基因在生殖细胞生长发育过程中的调控机制,以及发现该基因在生殖细胞中的新功能奠定了基础.

略论水稻生殖发育基因研究的相关应用目标

从水稻遗传育种学角度探讨了研究水稻生殖发育基因的重大意义。

人类生殖细胞基因编辑的伦理问题及其消解

人类生殖细胞的基因编辑导致人生命自然属性的减弱和“技术一社会”属性的增强,关于其伦理正当性问题的相关论争正在持续发酵。进行人类生殖细胞基因编辑的伦理风险主要包括:生命个体遭遇安全风险,将给整个人类群体的基因安全性造成不可估量的风险;基因编辑对人类生命的筛选、编辑、修改,使生命的进化过程俨然变成一个技术选择过程,这种人工改造对人类的生命尊严形成新的挑战;技术与资本的结合,使基因编辑扮演了将生命价值商业化的不光彩角色。人类生殖细胞基因编辑增强技术的广泛使用,带来的将是基因层面的社会阶层化,并形成新的优生学和另外一种形式的价值偏差。通过更迭伦理观念,重新抉择价值顺序,将相关伦理规范法制化,并强化科研共同体道德责任培育,可对因人类生殖细胞的基因编辑产生的伦理风险进行消解。

生殖系基因治疗的技术和伦理问题

生殖系基因治疗是通过对生殖系细胞的基因修饰，给该细胞发育而来的整个有机体及其后代带来永久性的遗传纠正。本文着重对生殖系治疗的现有技术条件、存在技术问题及各种观点作一归纳，主要试图反映生殖系基因治疗的科学背景及当代人的思考，希望有助于人们的思考。

不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响

目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。

基因-生殖工程应用中的风险问题与伦理治理——以生殖系基因编辑为例

生物风险已成为基因-生殖工程技术应用需要考虑的现实关切和重要议题。就目前而言,技术风险、社会风险与道德风险是评估基因-生殖工程运用的基本要素、伦理限度与根本条件,其中道德风险尤其关乎人的尊严和个体的自我认同。推进基因-生殖技术的研究开展,加强其伦理治理,必须注重培育科研工作者的责任伦理意识,推进机构伦理委员会的建设与制度完善。公众参与能为基因-生殖工程等现代公共议题提供公众话语,拓展和丰富其复合型决策的理论框架。

生殖细胞系基因编辑的伦理审视——基于生物物种和自然类的视角

基因编辑技术CRISPR-Cas9最近被用于人类生殖细胞系基因修饰,并在根除遗传疾病、防治传染疾病以及理解人类发育和疾病起源等方面显示出巨大的医学潜力。同时,生殖细胞系的基因修饰也存在着安全风险,损害后代的知情同意和自主性以及用于人类增强等负面后果,因而遭到伦理上的反对。但是,这些反对意见实际上并不充分。本文试图从生物物种和自然类的角度指出,生殖细胞系基因编辑可能破坏人类作为一个物种的本性,危及人性观念和人的尊严,同时威胁自然界固有的自然秩序。

生殖系基因编辑技术的刑法规制

“基因编辑婴儿”案件的发生表明生殖系基因编辑技术谬用行为刑法规制的必要性。生殖系基因编辑技术的人类临床应用存在安全风险、社会管理失序风险和伦理风险三大风险。面对这些风险,刑法应当禁止对生命健康法益造成侵害的生殖系基因编辑技术的应用行为,有选择性地规制危害社会管理秩序的生殖系基因编辑技术的应用,并慎重回应生殖系基因编辑技术所涉伦理问题。为应对基因编辑技术带来的挑战,刑法应当在兼顾谦抑性的同时,设计相关罪名,对犯罪行为进行打击。

生殖系基因治疗技术的伦理论争及其核心问题

目前关于生殖系基因治疗技术的伦理争论仍然十分激烈。这些争论的核心环节在于"父母生育一个健康血缘后代的需要"如何获得道德合理性论证,而目前很多研究在某种程度上忽视了这一问题,因而既不能解释这些伦理争论产生的原因,也不能为解决这一问题提供有效的指导。

环状RNA_0003028靶向微小RNA-498调控生殖器形成抑制基因-1/p53信号通路对人肝癌细胞系Huh7的影响

目的探讨环状RNA(circ)_0003028对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法人肝癌细胞系Huh7分为小干扰RNA(si)-NC组、si-circ_0003028组、微小RNA(miR)-NC组、miR-498模似物(mimics)组、si-circ_0003028+anti-miR-NC组、si-circ_0003028+anti-miR-498组;Real-time PCR检测肝癌组织及各组细胞中circ_0003028和miR-498表达水平;MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭数;Western blotting检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0003028和miR-498的靶向调控关系。结果肝癌组织中circ_0003028表达水平升高(0.98±0.02 vs 1.36±0.01),miR-498表达水平降低(0.98±0.02 vs 0.63±0.02)(P<0.05)。抑制circ_0003028表达或miR-498过表达后,Huh7细胞中Ki-67(0.85±0.02 vs 0.41±0.02或0.95±0.11 vs 0.37±0.02)、基质金属蛋白酶(MMP)-2(0.71±0.02 vs 0.43±0.03或0.83±0.02 vs 0.41±0.03)、MMP-9(0.74±0.02 vs 0.37±0.02或0.78±0.02 vs 0.39±0.02)蛋白表达水平降低,细胞活性(1.53±0.03 vs 1.05±0.02或1.68±0.02 vs 1.11±0.02)降低;迁移(111.40±2.12 vs 77.22±2.38或108.90±2.30 vs 78.44±1.46)和侵袭(87.89±2.18 vs 49.78±1.98或80.22±1.79 vs 38.22±1.52)细胞数减少,生殖器形成抑制基因-1(SMG-1)(0.76±0.02 vs 1.39±0.02或0.79±0.02 vs 1.39±0.02)、p53(0.77±0.02 vs 1.24±0.03或0.82±0.03 vs 1.45±0.03)、p53-ser15(0.78±0.03 vs 1.50±0.02或0.82±0.02 vs 1.49±0.04)蛋白表达水平升高(P<0.05)。Circ_0003028靶向调控miR-498,沉默miR-498逆转了抑制circ_0003028表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论抑制circ_0003028表达通过靶向miR-498影响SMG-1/p53信号通路而抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。