不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响

目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。

人胚胎干细胞表达生殖细胞分化相关基因的研究

目的探讨人胚胎干细胞(hES)系H1生殖细胞分化相关基因的表达。方法免疫荧光、碱性磷酸酶检测和核型分析等方法联合鉴定H1的基本生物学特性,RT-PCR方法检测未分化H1的生殖细胞分化相关基因的基本表达模式,分别以人正常睾丸组织和人胚胎成纤维细胞株HFF-1作为阳性和阴性对照组织。结果H1保持正常核型并维持未分化状态。未分化H1表达减数分裂前生殖细胞标志基因STELLAR、DAZL、FRAGILIS、PUM1、PUM2和GDF3;不表达原始生殖细胞(PGCs)标志基因BLIMP-1、减数分裂特异标志基因SCP1、减数分裂启动标志基因STRA8以及生殖细胞分化后期标志基因VASA。结论未分化H1细胞表达生殖细胞减数分裂前标志基因,但不表达分化后期基因,BLIMP-1可能成为区分未分化hES细胞与PGCs的特异性标志基因。

人胚胎干细胞系chHES-20表达生殖细胞分化相关基因

目的探讨人胚胎干细胞系chHES-20能否表达生殖细胞分化相关基因。方法反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测chHES-20细胞系生殖细胞特异基因的表达情况,以人正常睾丸组织作为阳性对照,以人成纤维细胞为阴性对照。结果胚胎干细胞系chHES-20表达全能性相关基因OCT4、NANOG和SOX2,同时表达减数分裂前生殖细胞标志基因DAZL和FRAGILIS;不表达减数分裂特异标志基因联会复合体基因3(SCP3)和生殖细胞分化后期标志基因VASA。结论 chHES-20胚胎干细胞系具有向生殖细胞诱导分化的潜能。

人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因的分子遗传学研究进展

人类睾丸生殖细胞的凋亡是一个多基因参与的复杂的过程 ,Bcl- 2 / Bax基因族、p5 3基因、CREM基因、Fas/ Apo- 1基因、HSP基因族、线粒体相关基因、i NOS基因、TRAIL及其受体基因以及 c- m yc基因等都在人类睾丸生殖细胞的凋亡过程中起到一定的作用。研究人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因对一些临床疾病和抗生育都具有十分重要的意义。

维甲酸和Cyp26基因家族与生殖细胞分化

在哺乳动物胚胎期,成熟分裂首先在雌性生殖细胞启动,雄性生殖细胞则停滞于有丝分裂的G0/G1阶段。在小鼠的研究发现,成熟分裂启动时间很可能决定着生殖细胞的分化方向。另一方面,达到一定阈值浓度的维甲酸(RA)能够启动生殖细胞从有丝分裂到成熟分裂的过渡。体内RA的水平由其合成和降解速率调节,而Cyp26是调节体内RA水平最关键的酶。因此,这种由Cyp26调节的RA水平的变化可能从根本上调控着哺乳动物生殖细胞的分化方向(形成精原细胞或卵原细胞),最终影响性别的分化。本文主要综述RA、Cyp26基因家族在哺乳动物性腺分化过程中的作用,并探讨了低等脊椎动物特别是鱼类成熟分裂启动及生殖细胞分化的分子机制。

资冲颗粒对大鼠间充质干细胞生殖分化相关标记基因表达的影响

目的探讨资冲颗粒(熟地、菟丝子等)诱导大鼠间充质干细胞向生殖细胞分化相关基因表达的影响。方法制备大鼠含资冲颗粒血清及大鼠空白血清对大鼠间充质干细胞进行干预。显微镜观察细胞形态变化情况;实时荧光定量PCR测定干预后细胞内生殖分化相关Oct4、Stra8、Itga6、Itgb1、Scp3、Gdf9、Zp1、Zp3基因的表达;MTT法检测细胞增殖情况;运用统计软件分析两组数据。结果镜下观察72 h干预未发现含药血清和空白血清对细胞形态有明显影响;实时荧光定量PCR测定表明含药血清对Stra8、Scp3、Gdf9基因表达有显著影响(P<0.05),对其它基因表达的影响则不显著(P>0.05);MTT法显示5 d干预两组细胞增殖无差别(P>0.05)。结论资冲颗粒大鼠含药血清具有诱导大鼠间充质干细胞向生殖细胞方向分化的潜力。

血清抗黑色素瘤分化相关基因5阳性皮肌炎胸部CT特征定性及定量分析

目的 定性及定量分析血清抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA-5)抗体阳性的皮肌炎患者胸部CT特征及其与短期预后的关系。资料与方法 回顾性纳入2017年1月—2018年12月中日友好医院收治的67例MDA-5阳性的皮肌炎患者,分析胸部CT特征与短期不良预后的关系。结果 9例患者1年内死亡。死亡组与存活组间质性肺疾病(ILD)影像学类型(χ^(2)=9.964,P=0.025)和肺动脉直径/主动脉直径比值(U=103.0,P=0.004)差异有统计学意义。抗MDA-5抗体阳性的皮肌炎患者合并ILD影像学类型主要为机化性肺炎。弥漫性肺泡损伤的患者死亡率显著高于其他几种类型。Logistic回归分析显示,肺动脉直径/主动脉直径比值(OR 4.208,P=0.002)是抗MDA-5抗体阳性的皮肌炎合并ILD患者发生死亡的强独立危险因素。结论 MDA-5阳性皮肌炎患者大部分伴ILD,其中以机化性肺炎为主要特征。1年内不良预后患者ILD类型不同,但肺动脉直径/主动脉直径比值是MDA-5阳性皮肌炎合并ILD患者发生死亡的独立危险因素。

抗黑色素瘤分化相关基因5抗体阳性的皮肌炎诊疗进展

抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)抗体阳性的皮肌炎是皮肌炎的一种亚型,该类患者易出现间质性肺病,特别是快速进展的间质性肺病(RPILD),发生RPILD后,常对激素和免疫抑制剂治疗产生抵抗,尽管积极治疗,死亡率仍高达70%,严重危害患者生命安全。该文阐述了抗MDA5阳性皮肌炎发病机制、临床特征和治疗进展,还重点介绍了抗MDA5阳性皮肌炎RPILD早期识别和预警方法。

抗黑素瘤分化相关基因5抗体阳性皮肌炎合并快速进展性间质性肺病的临床特征及危险因素

目的:通过分析抗黑素瘤分化相关基因5抗体(MDA5)阳性皮肌炎(DM)患者合并快速进展性间质性肺病(RPILD)和非RPILD的临床特点差异,探讨合并RPILD发生的危险因素。方法:回顾性分析南京医科大学炎性肌病及结缔组织病相关间质性肺病专病联盟组织收集的251例抗MDA5抗体阳性皮肌炎(MDA5+DM)患者临床资料,将其根据有无合并RPILD进行分组,采用t检验、U检验、χ^(2)检验及Logistic回归分析合并RPILD患者的临床特点,探讨RPILD发生的危险因素。结果:将251例患者分为RPILD组(89例)和非RPILD组(162例),2组患者性别、年龄、病程、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗Ro-52抗体阳性、铁蛋白(SF)、抗MDA5抗体滴度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素Logistic回归分析显示年龄、ESR、抗MDA5抗体滴度、性别(男性)、CRP、抗Ro-52抗体均有统计学意义(OR>1,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示性别(男性)、CRP、抗Ro-52抗体有统计学意义(OR>1,P<0.05)。结论:年龄、ESR、抗MDA5抗体滴度可能增加MDA5+DM患者发生RPILD的风险,但不是独立危险因素;性别(男性)、CRP升高、抗Ro-52抗体阳性可能是MDA5+DM患者合并RPILD的独立危险因素,均与RPILD的发生呈正相关。

降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽 (CGRP)对大鼠颅盖骨来源成骨细胞的影响 ,以进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法 利用二次酶消化法培养的成骨细胞 ,加入含不同浓度CGRP的条件培养液 ,2 4小时后通过MTT比色 ,3 H TdR掺入以及细胞内碱性磷酸酶 (ALP)含量的测定来观察CGRP对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 CGRP可以明显促进成骨细胞增殖 ,而且作用呈剂量依赖性。CGRP对细胞内ALP含量无明显影响。结论 CGRP能够直接作用于成骨细胞并通过促进其增殖而有利于骨形成。

1,25-(OH)_2VitD_3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响

目的了解1,25-(OH)2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响。方法采用1,25-(OH)2VitD3作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测1,25-(OH)2VitD3作用不同时间后NDRG1基因的表达。结果1,25-(OH)2-VitD3作用24h～5dNDRG1基因蛋白和mRNA均显著高于对照组水平(P<0.05)。结论1,25-(OH)2VitD3可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1表达,促使其分化。

降钙素基因相关肽对大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞间质转分化的作用及机制

目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)的作用并探讨其机制。方法:实验设Control组、TGF-β1(5 ng/ml)、CGRP(1、10、100 nmol/L)组、CGRP8-37(1μmol/L)+CGRP(100nmol/L)组。每组设9个复孔。细胞分别用CGRP或加CGRP8-37预处理1 h,再用转化生长因子β1(TGF-β1)处理48 h。MTT法检测大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞(RLE-6TN细胞)活性。分别采用Real-time PCR和Western blot检测细胞E-cadherin、α-SMA、e IF3a、Notch1和collagenⅢmRNA及蛋白表达。结果:与TGF-β1(5 ng/ml)相比,不同剂量CGRP(1、10、100 nmol/L)均可明显提高RLE-6TN细胞活性,显著抑制e IF3a、Notch1、α-SMA及collagenⅢ胶原的表达,上调E-cadherin的表达,而CGRP的这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消。结论:CGRP对EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制Notch1、e IF3a表达有关。

慢病毒介导的降钙素基因相关肽转染对大鼠骨髓间充质干细胞内皮分化的影响

目的:研究慢病毒介导的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内皮分化功能的影响。方法:用密度梯度离心结合贴壁法培养大鼠骨髓MSCs,携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs,未转染MSCs作为对照,应用ELISA法检测CGRP蛋白表达;实验分为转染Lenti-CGRP的MSCs(CGRP)组、转染Lenti-CGRP的MSCs+CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)组(CGRP+CGRP8-37)及未经转染的对照组。应用免疫细胞化学检测细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达以鉴定其分化能力;细胞计数法观察转染CGRP后MSCs增殖的影响;Matrigel实验观察转染CGRP对MSCs形成管腔样结构能力的影响。结果:MSCs转染CGRP基因经诱导分化后的CD31和Ⅷ因子相关抗原阳性细胞数量增多,与对照组相比有显著差异(P<0.05);转染CGRP组细胞数量增长较快,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Matrigel实验显示转染CGRP组细胞微血管新生明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而CGRP+CGRP8-37组上述作用明显被抑制。结论:转染CGRP基因能促进MSCs向内皮分化,并能促进内皮细胞增殖,在一定的条件下,可促进微血管新生。

妊娠高血压综合征患者胎盘组织细胞分化相关基因表达的变化

目的观察妊娠高血压综合征患者胎盘组织细胞分化相关基因表达的变化。方法选择重度妊高征患者为研究对象,共6例,正常妊娠者5例作为对照组,取足月孕产妇胎盘组织,Trizol法抽提胎盘组织总RNA并纯化m RNA;应用cDNA阵列细胞分化相关基因表达芯片检测妊高征患者和正常妊娠者胎盘组织中与细胞分化相关的1818个基因表达的变化,通过扫描仪对杂交结束后的膜进行扫描和图像分析,并对差异基因进行分类归纳。结果在1818条细胞分化相关基因中,妊高征患者胎盘组织与正常妊娠者胎盘组织之间存在差异表达基因,有61个基因发生表达变化,60个为已知基因,1个为EST片段,包括上调基因55个,下调基因6个,表达上调的基因中,肾上腺髓质素(adrenomedulin,ADM)、肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasinghormone,CRH)及其结合蛋白(corticotropinreleasinghormone bindingprotein,CRH BP)等基因对妊高征的发生可能有较重要的作用。结论妊高征发病的分子机制可能与细胞分化相关基因表达水平改变有关。

黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24抑制肺癌细胞增殖

目的:探讨黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(mda-7/IL-24)对非小细胞肺癌细胞系H460增殖的影响。方法:将mda-7/IL-24插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达载体pcDNA 3-mda-7/IL-24。按照DNA和脂质体(L ipofectam ine)的不同比例,将重组表达载体瞬时转染H460细胞,用RT-PCR检测mda-7/IL-24在不同转染条件下的表达,用MTT法检测转染重组表达载体后对H460细胞增殖的影响。结果:成功构建了mda-7/IL-24的重组表达载体,用SP6引物和mda-7/IL-24上游引物进行RT-PCR分析,在DNA和L ipofectam ine的比例为1μg∶2μl^1μg∶4μl时有目的基因表达。按照1μg∶2μl的比例瞬时转染重组表达质粒72 h后进行MTT分析,结果表明,与未转染细胞和转染空质粒细胞相比,重组质粒pcDNA3-mda-7/IL-24对肺癌细胞H460的增殖有明显抑制作用,抑制率为18.4%。结论:mda-7/IL-24对非小细胞肺癌细胞系H460增殖具有明显的抑制作用。

补骨脂素可能参与诱导大鼠间充质干细胞向雄性生殖细胞方向分化

目的验证补骨脂素能诱导大鼠间充质干细胞向雄性生殖细胞方向分化的假说。方法使用终浓度为3.0μg/ml的补骨脂素干预大鼠间充质干细胞,显微观察细胞形态变化情况,接着使用MTT法检测细胞增殖变化,最后使用实时荧光定量PCR(Qpcr)测定被干预细胞的七种代表性的生殖分化标记基因的表达变化,七种标记基因分别为:Oct-4、Stra8、RVLG、SCP3、TNP2、Itgb1、Itga6。结果显微观察表明3.0μg/ml的补骨脂素干预72 h后,大鼠间充质干细胞形态变化不显著;MTT法检测表明3.0μg/ml的补骨脂素干预的5 d中,大鼠间充质干细胞增殖情况变化不显著(P>0.05);Qpcr测定表明3.0μg/ml的补骨脂素干预72 h后,显著上调了Oct-4、Stra8、SCP3、Itgb1等基因的表达(P<0.05),而对RVLG、TNP2、Itga6等基因的表达影响不显著(P>0.05)。结论补骨脂素可能参与诱导大鼠间充质干细胞向雄性生殖细胞方向的分化。

小鼠骨髓基质细胞Kusa-A1成骨分化中Notch信号相关基因表达分析

目的:检测骨髓基质细胞系Kusa-A1成骨分化过程中Notch信号相关分子的表达变化,分析Notch信号途径在成骨细胞分化和骨形成中的可能作用.方法:培养小鼠Kusa-A1细胞,在常规培养和诱导培养(添加维生素C和β磷酸甘油)条件下用Real-time PCR方法分别检测Delta1、Jagged1、Notch1、CBF1、HES1基因的表达变化.同时也检测了成骨标志基因骨桥蛋白(OPN)的表达变化.结果:常规培养下Kusa-A1细胞汇片后0～5d,OPN表达有轻微下调,Notch相关分子表达维持不变或有轻微下调.诱导培养条件下细胞汇片后0～5d,OPN表达上调,而Delta1、Jagged1、Notch1、HES1表达大幅度下调,惟有CBF1表达有轻度上调趋势.结论:Notch信号分子表达与Kusa-A1细胞成骨分化负相关,Notch信号对细胞成骨分化可能有抑制作用,而CBF1则可能对成骨细胞分化有正向调节作用.

快速老化小鼠胸腺细胞分化与Notch信号相关基因表达关系的研究

目的研究快速老化小鼠(Senescence-accelerated mice,SAM)增龄过程中胸腺T细胞亚群的变化与Notch1、Prese-nilin1、2(PS1、2)、HES1等Notch信号转导通路相关基因mRNA表达变化及这两种变化的关系。方法选择出生后1～8周龄SAM,采用流式细胞技术检测胸腺细胞亚群变化、用荧光实时定量PCR的方法检测Notch1、PS1、PS2、HES1基因mRNA表达的动态变化。结果SAM出生1～2周,胸腺中CD4+CD8+细胞所占比例较高,4周龄后逐渐降低,各周龄SAMP8与SAMR1之间无显著性差异;在CD4+CD8-细胞比例上,SAM呈增龄性增加,1～6周龄的SAMP8与SAMR1之间无显著性差异,8周龄的SAMP8低于SAMR1;在CD4-CD8+细胞比例上,SAM呈增龄性增加,4周龄后的SAMP8均明显高于SAMR1;Notch1、PS2、HES1基因mR-NA表达量呈增龄性增加,各周龄SAMP8的Notch1基因表达水平高于SAMR1,4周龄后SAMP8的PS2、HES1基因表达水平高于SAMR1;PS1基因mRNA表达量呈增龄性降低,4周龄后的SAMP8低于SAMR1。结论Notch1、PS2、HES1的表达与胸腺CD4-CD8+细胞的分化呈正相关,PS1表达与胸腺CD4-CD8+细胞的分化呈负相关。

人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达

目的:系统研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。方法:应用密度梯度离心法分离hBMSCs,取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定;应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。结果:第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90,具有成脂和成骨分化潜能。成骨相关基因在诱导早期部分表达,中期均有表达,基因表达大部分在14天达高峰,与矿化相关的基因表达在21天达高峰。结论:hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达,其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。

脂肪细胞分化相关基因在大鼠再生肝中表达变化(英文)

肝脏由多种细胞构成,肝再生与细胞分化密切相关,细胞分化受基因转录水平调控。为在基因转录水平了解脂肪细胞分化基因在大鼠肝再生中作用,本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome2302.0芯片检测它们在大鼠肝再生(liver regeneration,LR)中表达情况,将三次检验结果相同或相似、在肝再生中表达变化2倍以上、真手术组和假手术组相比差异显著的基因视为肝再生相关基因。初步证实上述基因中75个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5-4h)、G0/G1过渡(PH后4-6h)、细胞增殖(PH后6-66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168h)等四个阶段起始表达的基因数为44、13、30和1;基因的总表达次数为88、58、302和90。表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调313次、下调167次,分为43种表达方式。表明肝再生中脂肪细胞发生和分化相关基因活动多样和复杂。根据本文研究结果推测,上述基因不仅调节脂肪细胞分化,而且参与肝再生的生理生化活动。