血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

抑制髓核细胞Ⅱ型胶原表达的炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α

背景:炎性因子在椎间盘退变中起着重要的作用,其抑制Ⅱ型胶原表达机制尚未完全明确。目的:探讨炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α对髓核细胞Ⅱ型胶原表达的影响及作用机制。方法:成年雄性SD大鼠由新疆医科大学动物实验中心提供,实验方案经新疆医科大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号为IACUC20151203-09)。分离、培养及鉴定SD大鼠髓核细胞,将其随机分为7组:①对照组;②白细胞介素1β(50μg/L)组;③白细胞介素6(100μg/L)组;④肿瘤坏死因子α(20μg/L)组;⑤白细胞介素1β(50μg/L)+740Y-P组(PI3K激活剂);⑥白细胞介素6(100μg/L)+740Y-P组;⑦肿瘤坏死因子α(20μg/L)+740Y-P组;并进行相应干预。48 h后收集髓核细胞进行RT-PCR,Western Blot检测及免疫荧光染色,分别检测白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α对髓核细胞中基质金属蛋白/金属蛋白酶组织抑制因子,炎性因子表达对Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白,聚集蛋白聚糖以及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果与结论:①白细胞介素1β组和肿瘤坏死因子α组中金属蛋白酶组织抑制因子1m RNA表达量明显低于对照组(P <0.05);白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α组中基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶13 mRNA表达量明显高于对照组(P <0.05);所有实验干预组中白细胞介素6 mRNA表达量明显高于对照组(P <0.05);白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α组中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子αm RNA表达量明显高于对照组;白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α组中白细胞介素1ra表达量明显低于对照组(P<0.05);②与对照组相比,白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α组的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达明显降低,而白细胞介素6组的则略有降低;与白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α组相比,对应的给予PI3K激活剂组的表达则明显升高;③结果表明:炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α可能通过抑制PI3K/AKT细胞增殖通路来抑制髓核细胞Ⅱ型胶原的表达。

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对延缓细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB信号轴的关系

目的探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用与去乙酰化酶6/核因子-κB(SIRT6/NF-κB)信号轴的关系。方法免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠干细胞抗原阳性(Sca-1+)HSC/HPC,连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。60Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组,照射对照组;衰老模型组;Rg1治疗衰老组;Rg1预防衰老组。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Rg1体内调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。实时定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果连续移植后受体鼠Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征,随移植代数的增加,Sca-1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1预防衰老组受体鼠Sca-1+HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高;SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显。结论 Rg1可能通过调控SIRT6/NF-κB信号轴发挥其对抗连续移植过程中Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。

SIRT6过表达激活AMPK/Nrf2/HO-1通路抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡

[目的]探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)过表达抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡是否涉及腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(AMPK/Nrf2/HO-1)信号通路的激活。[方法]将实验分为4组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+SIRT6组和AngⅡ+空载体(EV)组,通过RT-PCR检测SIRT6的mRNA水平,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测SIRT6、心肌细胞凋亡相关蛋白(Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2)、DNA损伤相关蛋白(γ-H2AX、p-ATM)及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白(p-AMPK、Nrf2、HO-1)的表达水平,DCFH-DA染色法测定活性氧(ROS)含量,比较各组间上述指标的变化情况。[结果]与对照组相比,AngⅡ组SIRT6的mRNA、蛋白表达水平及细胞活性明显降低,细胞凋亡率增高,Bax、cleaved Caspase-3表达升高,Bcl-2表达降低,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达升高,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达降低,ROS活性增高(均P<0.01)。与AngⅡ+EV组相比,AngⅡ+SIRT6组SIRT6水平及细胞活性增高,细胞凋亡及Bax、cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达降低,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达升高,ROS的活性降低(均P<0.01)。[结论]SIRT6过表达抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡与AMPK/Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。

核因子E2相关因子/血红素加氧酶1及血栓素B2T/6-酮-前列腺素F1α信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制

目的:本研究旨在探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)及血栓素B2(TXB2)/6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制。方法:购买60只4~6周龄裸鼠,体重(180±20)g,随机将60只大鼠分为空白对照组、模型组及深静脉血栓组各20只。其中空白组正常饲养1周;模型组及深静脉血栓组均建立宫颈癌动物模型,模型组造模成功后,正常饲养;深静脉血栓组给予宫颈癌根治术治疗,正常饲养。观察宫颈癌根治术后发生深静脉血栓HE染色切片,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠血管组织内皮细胞凋亡情况,全自动凝血分析仪检测各组大鼠凝血指标,酶联免疫吸附法测定TXB2/6-Keto-PGF1α水平,免疫印迹检测Nrf2/HO-1信号通路。结果:实验过程中,三组大鼠均未出现意外死亡,存活率均为100%。模型组未形成血栓,深静脉血栓组造模后1、3、7、14 d成栓率依次为50.00%(10/20)、95.00%(19/20)、100%(20/20)。大鼠下腔静脉产生的血栓尾部为红色血栓、中间为混合血栓、头部为白色血栓。深静脉血栓组血管内皮凋亡率高于模型组(P<0.05)。深静脉血栓组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于模型组及空白对照组,D-二聚体高于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于空白对照组,D-二聚体高于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于模型组及空白对照组,6-Keto-PGF1α低于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于空白对照组,6-Keto-PGF1α低于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组Nrf2、HO-1低于模型组及空白对照组,模型组Nrf2/HO-1低于空白对照组(均P<0.05)。结论:TXB2/6-Keto-PGF1α、Nrf2/HO-1信号通路在宫颈癌根治术后深静脉血栓大鼠中异常表达,也是宫颈癌根治术后深静脉血栓形成的作用机制之一。

m6A甲基转移酶METTL3通过β‐arrestin 1/p65调控结肠癌细胞增殖

目的探讨m6A甲基转移酶METTL3通过β-arrestin 1/p65在结肠癌细胞中的作用机制。方法使用结肠癌细胞系HCT116,应用荧光定量PCR、Western blot测定结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1及增值蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达水平;利用细胞转染及细胞克隆实验,观察METTL3、β-arres-tin1和p65在结肠癌细胞增殖中的作用。结果METTL3和β-arrestin 1在结肠癌细胞中表达升高(以actin作为内参基因,与正常对照组比较,P<0.05)。结肠癌细胞转染METTL3-shRNA后,转染组灰度(0.36±0.046)较对照组(1.27±0.14)明显减少(P=0.0004);与对照组克隆数(465±42)比较,转染组细胞增殖(85±37)明显减少(P<0.05);细胞增殖蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达也明显减少(分别为P<0.01、0.05、0.01);结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1和p-p65蛋白表达均增高(均为P<0.05)。随后HCT116细胞沉默MET-TL3的表达,发现细胞中β-arrestin 1、p-p65蛋白的表达明显下降(均为P<0.05)。结论METTL3影响结肠癌细胞的增殖可能通过β-arrestin 1/p65调控参与肿瘤的发生发展。

IL-1β和IL-6对椎间盘髓核细胞NGF表达的影响

目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6对体外培养的椎间盘髓核细胞神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:分离培养人腰椎间盘髓核细胞,经过7d的预培养后,实验组分别加IL-1β(10μg/L,50μg/L)和IL-6(10μg/L,50μg/L)进行刺激,对照组加0.3%FBS,48h后应用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blotting检测NGF的表达。结果:培养的椎间盘髓核细胞经鉴定为类软骨细胞。对照组髓核细胞很少表现NGF免疫活性,IL-1β和IL-6刺激组明显上调了髓核细胞NGF mRNA及蛋白质的表达,在相同的浓度下IL-6的上调作用更明显。结论:正常情况下NGF在椎间盘髓核细胞呈低表达状态,IL-1β和IL-6能促进髓核细胞NGF的表达,相同浓度下IL-6刺激髓核细胞分泌NGF的作用更强。

维生素D通过Nrf2/HO-1抑制铁死亡缓解6-羟基多巴胺所致PC12细胞损伤的作用机制研究

目的 探讨维生素D(VD)缓解6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致PC12细胞损伤的作用与铁死亡及Nrf2/HO-1通路激活的关系。方法 利用6-OHDA构建PC12细胞帕金森病(PD)模型,不同浓度的VD分别联合铁死亡激活剂(Erastin)或Nrf2抑制剂(ML385)干预后,CCK-8法检测PC12细胞活力变化。将PC12细胞分成空白对照组(Control)、6-羟基多巴胺组(6-OHDA)、维生素D组(VD)、铁死亡激活剂组(Erastin)、铁死亡激活剂+维生素D组(Erastin+VD)、Nrf2抑制剂组(ML385)、Nrf2抑制剂+维生素D组(ML385+VD),对应干预结束后,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡水平,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)含量,铁离子试剂盒检测铁离子含量,qRT-PCR检测谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、铁蛋白重链多肽1(FTH-1)、胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白(XCT,也称SLC7A11)、转铁蛋白受体(TFR-1)表达,Western blot检测Nrf2/HO-1通路激活情况。结果 与Control组比较,6-OHDA、Erastin、ML385均显著抑制PC12细胞活力(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01);LDH、MDA水平升高(P<0.01), GSH、SOD水平降低(P<0.01),铁离子含量升高(P均<0.01),GPX4、FTH-1、XCT等的表达降低(P均<0.01),TFR-1的表达显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1的表达被显著抑制(P<0.01);与6-OHDA组比较,VD可显著促进PC12细胞活力(P<0.01)、抑制细胞凋亡(P<0.01),降低LDH、MDA水平(P均<0.01),升高GSH、SOD水平(P均<0.01),抑制铁离子沉积(P均<0.01),GPX4、FTH-1、XCT等的表达均显著升高(P均<0.01),TFR-1的表达显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1表达升高(P<0.01);ML385可显著抑制VD对上述指标的调控作用。结论 维生素D可激活Nrf2/HO-1通路,缓解6-OHDA所致PC12细胞铁死亡。

右美托咪定通过沉默信息调节因子1/核转录因子信号通路调控脑梗死大鼠海马组织炎症机制研究

目的:探究右美托咪定(Dex)干预对脑梗死大鼠的治疗效果及潜在治疗机制。方法:将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、右美托咪定低剂量组、右美托咪定高剂量组,每组各12只。除对照组、假手术组外,其余各组选用Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,假手术组仅剥离肌肉血管。Dex治疗组分别腹腔注射盐酸右美托咪定溶液,其余各组注射等量0.9%氯化钠溶液。比较各组大鼠缺血脑组织的沉默信息调节因子1(SIRT1)、核转录因子(NK-κB)信使RNA(mRNA)和蛋白的相对表达水平及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,同时检测各组大鼠海马区炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与对照组大鼠比较,Dex治疗组大鼠SIRT1mRNA和蛋白水平降低、NF-κBmRNA和蛋白水平升高,经Dex治疗后两组大鼠的SIRT1mRNA、蛋白水平升高,且Dex高剂量组更高;同时NF-κBmRNA、蛋白水平下降,且Dex高剂量组低于Dex低剂量组;与对照组、假手术组大鼠比较,其余各组大鼠TNF-α、IL-6、MDA水平升高,SOD水平下降,经Dex治疗后两组大鼠的炎性因子和氧化应激水平降低,且Dex高剂量组TNF-α、IL-6、MDA水平低于Dex低剂量组,同时SOD水平升高,且Dex高剂量组更高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过激活SIRT1/NF-kB信号通路,减轻炎性反应,缓解氧化应激,进而发挥脑保护作用。

Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立

核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO空载体得到重组载体p Lenti6/V5-Nrf2,通过测序、酶切鉴定正确后,扩繁质粒,制备慢病毒并将其感染Hep1-6肝癌细胞,用稻瘟醇胚素筛选、鉴定获得稳定表达Nrf2的细胞株。同时,用Nrf2干扰质粒构建慢病毒感染Hep1-6肝癌细胞,通过嘌呤霉素筛选、鉴定Nrf2敲减的细胞株。Q-PCR检测结果显示,过表达稳转株(p Lenti6/V5-Nrf2)中Nrf2基因的表达量为对照组(p Lenti6/V5-Lac Z)的4倍,敲减稳转株中Nrf2基因的表达量大幅度降低。Western blotting显示过表达稳转株的Nrf2表达量明显高于对照组,敲减稳转株的Nrf2表达量明显低于对照稳转株,此结果与Q-PCR结果一致。所克隆的Nrf2基因和敲减基因在Hep1-6小鼠肝癌细胞中得到了正确转录和翻译,稳转细胞株构建成功。

NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究

目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。

牛磺酸缓解镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1途径

为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)、蛋白质印迹法、荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和免疫荧光染色等方法,从细胞增殖、内质网应激、线粒体凋亡、核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor-erythroid 2 related factor-2/hemeoxygenase-1, Nrf2/HO-1)信号通路等方面研究其作用机制。结果显示,镉导致鸡胚精原细胞发生了氧化损伤。与对照组相比,镉处理组精原细胞出现了细胞核固缩、空泡化和染色质周缘化等变化,且镉处理后的细胞活性和精原细胞数目显著降低,过氧化氢、丙二醛和活性氧水平显著升高,超氧化物歧化酶活性显著降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞显著增多,内质网应激相关基因(GRP78和XBP-1)和凋亡相关基因(Cyt C、p53和caspase 9)mRNA表达水平显著上升,Nrf2、p-Nrf2蛋白的表达和HO-1mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。然而,牛磺酸与镉联合处理后,镉引起的氧化损伤得到明显缓解,鸡胚精原细胞数目和睾丸细胞活性回升,抗氧化水平和内质网应激得到改善,凋亡细胞显著减少,Nrf2蛋白表达和细胞增殖能力趋于正常。以上结果说明,牛磺酸一方面通过恢复氧化系统与抗氧化系统平衡,另一方面通过抑制睾丸细胞凋亡和恢复睾丸细胞增殖,缓解镉引起的生殖毒性。

核受体NR6A1与NDRG1互作促进肝癌进展

核受体在细胞稳态的维持以及疾病的发生发展等方面发挥着重要的作用。为了探究核受体亚家族6A组成员1(nuclear receptor subfamily 6 group A member 1,NR6A1)在肝癌中的作用及机制,首先,分析了癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)等数据库信息,发现NR6A1在肝癌中异常高表达且与患者预后不良有关;然后,通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)、划痕实验发现,干扰NR6A1使肝癌细胞的增殖明显受到抑制但不影响细胞的迁移;其次,通过免疫共沉淀、免疫荧光、RNA干扰和过表达等实验,鉴定出N-myc下游调控基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)是NR6A1在肝癌中的互作蛋白质,二者在肝癌中的表达呈正相关,且NR6A1正调控NDRG1的表达;最后,利用功能拯救实验证实,干扰NDRG1可以抑制NR6A1过表达造成的肝癌细胞增殖增强的现象。综上可知,NR6A1通过与NDRG1相互结合且上调NDRG1的表达来发挥促癌作用。

二十碳五烯酸对脂多糖诱导的人单个核细胞NF-κB活性及细胞因子分泌的影响

目的探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单个核细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性、VEGF、IL-1α和IL-6分泌的影响。方法分离人外周血单个核细胞,将其分为空白对照组、LPS组、0.030g.L-1EPA处理组、0.050g.L-1EPA处理组。LPS组仅加入LPS进行培养(LPS终浓度为10mg.L-1),EPA处理组先加入2种浓度的EPA(EPA终浓度分别为0.030g.L-1和0.050g.L-1)培养1h,再加入LPS进行培养。LPS刺激6h、12h、24h后,收集各组上清液,ELISA检测上清液中VEGF、IL-1α和IL-6的分泌量;LPS刺激24h后的沉淀细胞用Western blot法检测人单个核细胞NF-κB活性。结果 LPS刺激6h后,空白对照组、LPS组、0.030g.L-1EPA处理组、0.050g.L-1EPA处理组VEGF含量(ng.L-1)分别为:22.57±8.86、66.49±4.21、46.18±2.35、45.49±6.61;12h后分别为:18.05±3.18、107.30±5.70、61.29±2.86、54.34±7.41;24h后分别为:20.49±5.92、157.63±5.95、59.54±4.20、53.13±11.42。LPS刺激6h后IL-1α含量(ng.L-1)分别为:15.63±2.98、75.41±4.12、53.60±4.71、31.03±8.49;12h后分别为:40.37±4.51、408.00±47.93、142.80±14.65、99.17±5.86;24h后分别为:63.37±1.99、929.73±27.97、322.03±101.80、161.23±14.59。LPS刺激6h后IL-6含量(ng.L-1)分别为:34.94±2.71、117.60±7.89、82.25±14.56、60.66±2.12;12h后分别为:51.00±6.65、183.60±8.64、127.37±11.48、71.61±8.16;24h后分别为:68.04±21.53、297.50±25.72、132.37±20.87、102.45±21.46。与空白对照组相比,LPS刺激后人单个核细胞NF-κB p65表达和VEGF、IL-1α、IL-6分泌明显升高。EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB p65活性;下调其VEGF、IL-1α和IL-6分泌,与LPS组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 LPS激活人单个核细胞NF-κB,促进其VEGF及细胞因子表达。EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB活性,下调其VEGF及细胞因子表达。这为EPA应用于各种新生血管性疾病和炎症性疾病的防治提供了理论依据。

腰椎间盘突出髓核组织中细胞因子的表达及其意义

目的 探讨细胞因子在腰椎间盘突出症中的表达 ,以阐明腰椎间盘突出症引起坐骨神经痛的原因。方法 对40例腰椎间盘突出症患者手术取出的髓核组织以免疫组织化学方法表达髓核中白细胞介素1α(IL -1α)、白细胞介素1β(IL -1β)、白细胞介素6(IL -6)和肿瘤坏死因子α(TNF -α)。结果 在髓核组织中表达阳性率较高 ,远离神经根和近神经根的髓核表达阳性率有明显差异。结论 创伤性突出髓核组织可产生多种细胞因子 ,它们可能在引起坐骨神经痛中发挥作用。

骨转移瘤核素骨显像与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-α水平关系的研究

目的研究肿瘤患者放射性核素骨显像结果与血清多种细胞因子水平的关系。方法随机选取肺鳞癌、肺腺癌、乳腺浸润性导管癌骨显像示多发骨转移瘤与骨显像正常患者各30例,分别测定其血清中IL-1βI、L-6、TNF-α、TGF-α的含量。结果①肺鳞癌、肺腺癌、乳腺浸润性导管癌多发骨转移瘤组患者血清细胞因子水平明显高于与其对应的骨显像正常组,两者有显著性差异。②肺鳞癌与肺腺癌多发骨转移瘤患者血清细胞因子水平虽然有差异,但无显著性差异。③乳腺浸润性导管癌与肺癌多发骨转移组细胞因子水平无显著性差异。结论血清细胞因子IL-1β、IL-6、TGF-α、TNF-α水平与骨转移发生有一定关系。检测血清细胞因子IL-1β、IL-6、TGF-α、TNF-α水平将有助于骨转移瘤的动态监测。

烧伤患者血清内毒素对外周血单个核细胞中4种细胞因子的影响

目的：探讨烧伤患者血清内毒素对正常机体外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cells， PBMCs）中4种炎性细胞因子的影响。方法以正常人外周血单个核细胞为受试对象，以烧伤患者血清为刺激因素。根据18例烧伤患者与6名健康志愿者血清内毒素水平将其分为对照组（6名健康志愿者，血清内毒素为0 U/mL）、实验组A （6例烧伤患者，血清内毒素为0～0.2 U/mL）、实验组B （6例烧伤患者，血清内毒素为0.2～0.4 U/mL）、实验组C （6例烧伤患者，血清内毒素＞0.4 U/mL）。用4组血清分别刺激正常人PBMCs不同时间后，用放射免疫分析法测定每组细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子（ tumor necrosis factor， TNF）-α、白细胞介素（ interleukin， IL）-1β、 IL-6及IL-12的浓度，并进行数据分析。结果 TNF-α和IL-6在不同时间，被不同浓度血清内毒素刺激后均显著增加；随着刺激时间的延长， IL-1β和IL-12才显著增加。结论 TNF-α和IL-6为内毒素介导的烧伤炎症中重要的炎性介质，其浓度可随着时间的延长或内毒素浓度的升高而增加，但IL-1β和IL-12的浓度不随内毒素剂量的变化而变化，而是随着刺激时间的延长逐渐增加。

二十碳五烯酸对大鼠角膜新生血管核转录因子κB及细胞因子表达的抑制作用

背景角膜新生血管（CNV）是炎症性角膜病变导致视力下降和角膜移植后发生排斥反应的重要原因，其发生机制和治疗一直是国内外角膜病研究的热点。目的探讨二十碳五烯酸（EPA）对碱烧伤大鼠CNV核转录因子KB（NF—KB）、白细胞介素1α（IL一1αt）、IL一6表达的影响及作用机制。方法用浸有1mol／LNaOH的3mm圆形滤纸贴附于72只SD大鼠的右眼角膜中央30s制作角膜碱烧伤模型，用随机数字表法将大鼠随机分为3个组，另6只匹配的正常大鼠作为正常对照组。碱烧伤0．02mgEPA治疗组和碱烧伤0．03mgEPA治疗组大鼠分别于碱烧伤后即刻结膜下注射0．04ml剂量为0．02mg或0．03mgEPA，碱烧伤模型组结膜下注射0．04ml生理盐水，正常对照组大鼠未行结膜下注射。大鼠干预后每天裂隙灯下观察CNV的生长面积和角膜水肿。分别于造模后24h，4、7、14d过量麻醉处死动物后制备角膜标本，采用苏木精一伊红染色法检测各组大鼠角膜的组织病理学变化，免疫组织化学方法检测各组大鼠角膜组织中CD34的表达以计数血管内皮细胞，用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及蛋白印迹法分别检测各组大鼠角膜组织中IL-1α-mRNA和IL．6mRNA的表达及NF—KBp65的蛋白表达。结果裂隙灯下见造模后2～4d，CNV缓慢生长，角膜水肿，上皮缺损；造模后7～10d，CNV面积增加，角膜水肿减轻；造模后14d，CNV面积最大，血管变细。苏木精一伊红染色显示，碱烧伤后7d碱烧伤组角膜上皮部分缺损，基质层水肿明显，可见较多炎性细胞及大量CNV；碱烧伤0．03mgEPA治疗组与碱烧伤0．02mgEPA治疗组均可见角膜上皮修复，基质层水肿减轻，少量炎性细胞，未见CNV。碱烧伤后7d和14d，碱烧伤0．02mgEPA治疗组CNV相对面积分别为（15．80±6．43）％、（11．06±2．14）％，碱烧伤0．03mgEPA治疗组为（16．10±7．41）％、（11．06±2．51）％，均明显小于碱烧伤组的（84．74±7．77）％、（89．63±7．50）％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。碱烧伤后7d，碱烧伤组CD34在CNV的内皮细胞中呈强阳性表达，而在碱烧伤0．02mgEPA治疗组、0．03mgEPA治疗组角膜中未见表达。RT—PCR检测结果表明，碱烧伤后4d，碱烧伤0．02mgEPA治疗组、0．03mgEPA治疗组IL一1α、IL一6mRNA在角膜组织中的表达量明显低于碱烧伤组，蛋白印迹检测证实NF—KBp65蛋白在角膜组织中的表达低于碱烧伤组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论EPA能够抑制NF—KB、IL一1α、IL一6的表达，从而抑制碱烧伤后CNV的生长。

过表达CTRP6通过调控Nrf2/HO-1通路在减轻糖尿病小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨过表达C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-6(CTRP6)通过调控核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路在减轻糖尿病小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法于2021年9月-2022年6月在武汉大学人民医院进行实验,选取清洁级雄性C57BL/6小鼠18只,采用随机数字表法分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(IR)、脑缺血再灌注+CTRP6过表达组(IR+CTRP6),各6只。IR组、IR+CTRP6组连续5 d腹腔注射STZ 50 mg/kg建立小鼠糖尿病模型,IR+CTRP6组在糖尿病模型建立3周后脑室注射腺相关病毒(AAV)-CTRP6,6周后2组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型,Sham组仅行手术操作不作任何处理。再灌注24 h后TTC检测脑梗死面积;Western-blot检测Nrf2、HO-1、NQO-1、p-NF-κB/NF-κB、p-IKK/IKK蛋白水平;WST-1法检测SOD,可见光法检测CAT,TBA法检测MDA,ELISA法检测IL-1β、TNF-α、MCP-1水平;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;原位凋亡荧光素检测细胞凋亡情况。结果与Sham组比较,IR组Nrf2、HO-1、NQO-1、SOD、CAT均降低(P均<0.01),p-NF-κB/NF-κB、p-IKK/IKK、MDA、IL-1β、TNF-α、MCP-1、Caspase-3、Caspase-9、TUNEL阳性细胞升高(P均<0.01);与IR组比较,IR+CTRP6组Nrf2、HO-1、NQO-1、SOD、CAT均升高(P均<0.01),脑梗死面积、p-NF-κB/NF-κB、p-IKK/IKK、MDA、IL-1β、TNF-α、MCP-1、Caspase-3、Caspase-9、TUNEL阳性细胞均降低(P均<0.01)。结论CTRP6通过调控氧化应激、炎性反应、细胞凋亡进而减轻糖尿病小鼠脑缺血再灌注损伤。