猪生殖-呼吸道综合征病毒的分子生物学研究现状

:猪生殖 -呼吸道综合征病毒 (PRRSV)是近几年发现的一种新病毒 ,就该病毒的生物学特性、基因组结构、病毒蛋白。

PRRSV核衣壳蛋白基因在杆状病毒中的表达

根据已发表的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) CH-1 a分离株核衣壳 ( N)蛋白基因核苷酸序列和杆状病毒转移载体 p Blue-Bac-His B多角体蛋白阅读框架 ,设计合成了 1对特异性引物 P7S1 /P7R1。应用PCR对重组质粒 p UC1 8-ORF7扩增 ,获得了 CH-1 a株 N基因的片段。经 Hind 和 Bgl 双酶切 ,将其定向克隆到同样双酶切的 p Blue-Bac-His B的 PH启动子下游 ,获得转移载体 p Blue-Bac-His B-ORF7。将转移载体p Blue-Bac His B-ORF7与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒 ( Ac MNPV,简称杆状病毒 )线性化 DNA ( Bac-N-Blue TMDNA)共转染 Sf9细胞 ,经过蓝斑筛选和蚀斑纯化 ,获得重组病毒 r Bac7。经用引物 P7S1 /P7R1和杆状病毒多角体蛋白基因通用引物 PCR鉴定 ,证明目的基因已插入到杆状病毒中。将重组病毒接种于对数生长期的 Sf9细胞 ,分别于感染后 2 4、4 8、72、96、1 2 0 h收集感染细胞 ,经 SDS-PAGE和 Western blot分析 ,结果表明 ,细胞接种重组病毒 2 4 h即开始表达重组蛋白 ,至 96h达到峰值 ,占整个细胞蛋白的 8.4 % ,此后开始下降。表达产物为融合蛋白 ,大小约 2 0 0 0 0。将重组病毒感染的 Sf9细胞用抗 PRRSV N蛋白的单克隆抗体SDOW-1 7进行间接免疫荧光试验 。

哈兽研所PRRSV分子生物学研究简况

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)是新发现的猪生殖-呼吸道综合征(PRRS)的病原。PRRSV为最新成立的动脉炎病毒科(Ateriviridae)的成员,系单链正股RNA病毒,其基因组具有8个开放阅读框架(ORF),即LRFla、ORFlb和ORF2-7,分别编码病毒复制酶和结构蛋白。自1996年下半年起,哈兽研所兽医生物技术国家重点实验室仇华吉、童光志对国内分离的第一株PRRSV—CH-1a株开展了分子生物学方面的研究,目前取得一定的进展。