固态食醋自然发酵醋醅中生淀粉酶产生菌的筛选及初步应用

从自然发酵固态醋醋醅样本中筛选并鉴定获得能同时产生淀粉酶、蛋白酶的菌株16株,在酸性条件下均有不同程度的生长与产酶性能。其中,中村芽孢杆菌(Bacillus nakamurai)k11在pH 3.0的酸性条件下能生长且能保存80%以上的酶活,用LB培养基培养48 h后,乙偶姻含量为47.71 mg/L。在固态食醋发酵初期接种中村芽孢杆菌k11,所得食醋的总酸、氨氮、不挥发酸含量等均有明显提高。通过3轮重复应用实验,可知食醋出醋率分别提高5.40%、5.05%及8.40%,所得食醋乳酸、苹果酸占比提升,草酸含量降低,游离氨基酸总量提升了71.52%,且半胱氨酸明显提升,食醋中醇类、酯类、酮类、吡嗪类、酚类物质的含量均有明显提升。研究结果表明,将中村芽孢杆菌应用到固态食醋发酵过程中,可提高出醋率,降低生产成本,并在一定程度上提升食醋的口感,对于提升传统发酵调味品的生产效率及产品品质具有重要意义。

黑曲霉AF-1固态发酵生产生淀粉酶的条件优化

为增强黑曲霉AF-1产生生淀粉酶的能力,对其固态发酵产酶条件进行了优化.采用单因素试验分别筛选出马铃薯粉、豆粕粉、FeSO4为最适碳源、氮源和无机盐;通过Plackett-Burman设计对影响产酶条件的12个相关因素进行效应评价,筛选出具有显著效应的培养基豆粕粉、麸皮含量和温度3个因素;利用最陡爬坡试验逼近以上3个因素的最大响应区域,采用响应面中心组合设计对3个因素进行优化,得出培养基豆粕粉含量、麸皮添加量和温度的最佳值分别为11.46%、17.41 g和26.26℃.优化后的酶活力(204 U/mL)比初始酶活力(42 U/mL)提高了3.85倍.

产生淀粉酶菌株的诱变选育及酶学性质研究

以产生淀粉酶菌株Aspergillus niger AF-0为出发菌株,先后经紫外(UV)、亚硝基胍(NTG)诱变,选育得到了一株产酶活性较高的突变株,其所产马铃薯生淀粉酶的酶活力达43.8 U/mL,比原初酶活力19.3 U/mL提高了1.3倍。在此基础上,对该酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的最适反应温度为55℃,在60℃以下稳定;最适反应pH为4.0,在pH3.5～5.0范围内稳定;Mn2+,Fe2+,Zn2+,Mg2+,Ca2+,Ba2+对该酶有一定的激活作用,而Cu2+,K+,Na+则抑制酶的活性;该酶以形成孔洞的方式由外向内作用于马铃薯淀粉颗粒。

嗜热菌来源的生淀粉酶分离纯化及其酶学性质

从嗜热菌库中分离到两株能水解生淀粉的菌株173和174,通过扩增和测定两株菌的16S rDNA序列并进行比对结果表明,所分离两株菌属于Geobacillus属的细菌。液体摇瓶发酵菌株173、174,其产生的生淀粉酶(简称RSDE173、RSDE174)活力分别达14.5 U/mL和12.9 U/mL。通过生淀粉吸附-熟淀粉洗脱系统和TOYOPEARL HW-55F系统进行分离纯化,得到纯化的RSDE173和RSDE174,纯化倍数分别为50和29,活力回收率分别为34%和41%。有关RSDE173和RSDE174酶学性质研究显示,对熟淀粉水解的最适作用温度均为70℃,而对生淀粉水解则分别在50℃～60℃和40℃～60℃下表现出高水解活力;对不同底物的最适作用pH值均为5.0～5.5;它们对大多数试验离子的敏感性较低,但个别离子如Co^(2+)、Cu^(2+)对RSDE173或Cu^(2+)对RSDE174的酶活力有一定的抑制作用。纯化的这两种生淀粉酶对不同来源生淀粉的底物专一性并不相同。RSDE173底物专一性顺序为红薯淀粉>小麦淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉>糯米淀粉;而RSDE174的糯米淀粉>小麦淀粉>红薯淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉。RSDE173对生红薯淀粉有很好的降解,其水解糊化淀粉与生红薯淀粉的比值为1.48:而RSDE174优先降解生糯米淀粉,其相应比值为1.69。

生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质

分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。

红曲霉固态发酵产生淀粉酶培养基的优化

研究碳源、氮源、无机盐对红曲霉M2固态发酵产生淀粉酶的酶活性影响。在单因素试验的基础上,采用响应面试验设计对红曲霉固态发酵产生淀粉酶的培养基进行优化,并建立乳糖、(NH4)2SO4、K2HPO4变化的二次回归方程,探讨各因素对生淀粉酶酶活力的影响。在固态发酵基础培养基中,最终确定适宜的培养基条件为:乳糖添加量为8.18%、(NH4)2SO4添加量为6.36%、K2HPO4添加量为0.91%;在该条件下可得到红曲霉M2产生淀粉酶的最大酶活力,预测值为680.29 U/g,对实验结果进行验证,得到生淀粉酶酶活力为662.21 U/g。

酸性生淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究

酸性生淀粉酶在淀粉制糖中具有重要的开发价值。本实验从醋厂醋渣、淀粉厂排污口泥土分离到酸性条件下α-淀粉酶活力较高的三株菌,其中B-5所产α-淀粉酶最适pH为5.0,为酸性α-淀粉酶。对三株菌粗酶液降解生淀粉的能力进行比较,可知B-5、B-1降解生淀粉能力较强,而B-6虽然有较高的α-淀粉酶活力,但其生淀粉降解能力却较低,粗酶液降解后的生淀粉电镜图片也说明了此结果。

生淀粉酶产生菌的筛选和研究

利用透明圈法再经单菌分离纯化从土壤中筛到一株产酶为158U/mL的生淀粉酶产生菌TCCC451031,经16S rDNA鉴定为Paenibacillus属。最适发酵培养基:碳源为2%的玉米粉,最佳氮源为酵母粉与玉米浆混用比例为1∶2,用量为1%。最适发酵条件:35℃、pH值为7.0、转速160r/min,发酵5d酶活达312U/mL。该酶最适作用温度40℃,最适作用pH值为4.2,Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶有一定的激活作用,Cu2+、Mn2+、K+、Fe2+、Ba2+对酶活有抑制作用。

红曲霉产生淀粉酶固态发酵条件的优化及部分酶学性质

以红曲霉M2为研究对象，在单因素试验的基础上，确定无机盐水添加量、培养时间、培养温度和培养基初始pH四个因素的取值范围，以生淀粉酶活力为指标设计正交试验优化了培养条件，并对最优条件下生淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明：温度为32℃，pH值5．0，无机盐水量为14mL，培养时间6d时酶活最高可达445．37u／g；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为5．0，在pH值为5．0～7．0范围内较稳定，热稳定性较差，在60℃保温2h残余酶活只有23．9％；Zn^2＋，Mn^2＋，Cu^2＋对该酶有促进作用，Ba^2＋和Fe^3＋对该酶有抑制作用，Na^＋，K^＋，Mg^2＋对该酶基本无影响。

Penicillium sp.X-1液态发酵生产生淀粉酶的优化

通过摇瓶发酵,研究了培养基成分对Penicillium sp.X-1液态发酵产生淀粉酶的影响。结果表明:碳源、氮源及MgCl2对产酶有较大的影响,经响应面优化得到的培养基组成为:玉米粉42 g/L,豆饼粉30 g/L,MgCl216 mmol/L,在最优条件下酶活达到239 U/mL,与采用基本培养基的相比,酶活提高了7.5倍.

丹参内生真菌产生淀粉酶菌株的筛选鉴定及酶学性质分析

目的:从丹参内生真菌中筛选耐热性强的酸性生淀粉酶菌株,并对其酶学性质进行初步研究。方法:以50株丹参内生真菌作为筛选对象,通过淀粉固体培养基初筛、液体发酵复筛,筛选产生淀粉酶活力较高的菌株;通过形态学观察和ITS序列分析对产酶菌株进行鉴定。结果:从50株丹参内生真菌中,筛选出5株产生淀粉酶活力较高的菌株,其中菌株ZDH2-2-1-1为产淀粉酶活性最强的菌株,酶活力达到117.63 U/m L,经鉴定为互隔链格孢(Alternaria alternata)。该淀粉酶最适p H为4.0,最适反应温度为55℃,具有较好的热稳定性和p H稳定性,对生淀粉具有广谱的降解能力。通过薄层层析发现,ZDH2-2-1-1所产淀粉酶的酶解产物为葡萄糖。结论:丹参内生真菌能产生高活性的耐热性酸性生淀粉酶,在生淀粉深加工中具有极大的开发潜力。

响应面法优化Rhizopus microsporus var.chinensis产生淀粉酶的条件

对Rhizopus microsporus var.chinensis固态发酵产生淀粉酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验确定最适固态发酵基质为小麦麸皮,最适碳源和氮源分别为可溶性淀粉和硫酸铵,通过控制培养基初始pH为3.0、初始湿度为70%时,使其生淀粉酶产量提高3.5倍。在此基础上,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,得出每500mL三角摇瓶中含小麦麸皮13.7g、可溶性淀粉0.063g、硫酸铵0.052g时,生淀粉酶产量达到48.50U/mL,比初始产量提高了8倍。

优良生淀粉酶产生菌Asp.niger.no.882用于生料酒精发酵的研究

酒精发酵,传统工艺都得把原料进行蒸煮和糖化处理,所耗能量约占生产总能的35—40%。为了节能和降低成本,各国都在大力开展无蒸煮酒精发酵的研究,日本已有生玉米酒精生产的专利,国内也有玉米、薯干、大米、高梁等生料酒精发酵的研究。此工艺存在的最大问题是用酶(曲)量过大,一般相当于熟料用酶量的五倍。Y.Han曾报导Asp.

米曲霉高产生淀粉酶菌株的诱变选育

以米曲霉y18为出发菌株,通过紫外诱变(UV)和硫酸二乙酯(DES)2次诱变,获得产生淀粉酶活力酶较高的菌株y18-U-36-D-40,酶活达到434.5U/mL,比出发菌株提高153.35%,菌株经过7次传代,酶活稳定。

产生淀粉酶系菌株的筛选及其混株发酵粗酶研究

从6株霉菌中筛选出具有较强生淀粉分解能力的黑曲霉、米曲霉、宇佐美曲霉和少根根霉,并进行混株发酵,试验结果表明,所得粗酶分解生淀粉能力显著提高。最低的D组提高5.43%,最高的E组提高10.0%,而且菌株的种属会明显影响分解生淀粉的能力。

优良生淀粉酶产生菌Asp.882的研究第Ⅱ报——酶性质及动力学初探

报导了用新方法选育的优良生淀粉糖化酶产生菌Asp.882的酶性质及动力学情况。实验证明它对多种生淀粉有较强的分解能力;顺序是:糯米>小米>大米>小麦>木薯>玉米>甘薯>马铃薯。酶最适反应pH为3.0～4.0,45℃保温30分钟不失活,2％葡萄糖对酶有抑制作用。酶作用于大米粉的米氏常数是1.3％。酶曲产生淀粉糖化酶达230～245u/g(pH3.6,40℃),蛋白酶3000～4000u/g,液化酶6～7u/g,纤维素酶20～25u/g。□(谢敏)

生淀粉酶产生菌产酶条件与酶学性质的研究

从宜州市大米厂附近采集的样品中,筛选出一株水解生淀粉能力较强的芽孢杆菌。该菌株以生木薯粉为底物发酵4 d后酶活达92 U/ml,最适产酶温度为35℃。对初步分离的酶进行酶学性质研究得:该酶最适pH值为7.0,最适温度为50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对酶有激活作用,离子Zn2+、Ni2+、Cu2+、Fe2+、Mn2+、Co2+对酶有抑制作用。

优良生淀粉酶产生菌Asp.882的研究第1报——小型酒精发酵试验

本文报导新选育的优良生淀粉酶产生菌Asp.882用于酒精发酵小型试验的研究情况。该菌酶曲含生淀粉酶190～240u/g,液化酶6～7u/g,蛋白酶3000～4000u/g,纤维素酶20～25u/g,其复合酶系能适于多种淀粉原料发酵。当它与酵母共酵生产酒精时,其用酶量约10u/g左右,加水比例为1:2.5～3.3,33℃发酵72～96小时,淀粉利用率达90％左右,酒度10％～14％(V/V),残糖1.25％～1.50％。而且酒糟易过滤,具有较大的应用价值。

产生淀粉酶真菌的分离筛选及初步鉴定

以大曲、醋曲和酿造厂附近土壤为样品,对其中具有降解生淀粉能力的真菌进行富集、分离、纯化。通过定性和定量筛选共得到5株具有较高降解生淀粉能力的菌株Y14、Y15、Y18、Y19和Y22。经初步鉴定,菌株Y14和Y18为米曲霉,菌株Y15为少根根霉,菌株Y19和Y22为黑曲霉。

一株生淀粉酶高产菌的选育

采用平板初筛、平板复筛以及摇床筛选从腐烂木薯中筛选出一株产生淀粉酶活力较强的菌种AspergillusnigerX-01,所产生淀粉酶活力为142 U/mL,对其进行紫外和亚硝基胍诱变后,得到高产突变株Aspergillus niger N T G-4酶活力达到377 U/mL,较出发菌株提高了2.65倍。