实时生物分子相互作用分析技术用于链霉亲和素-生物素化抗体的层层组装研究

使用生物分子相互作用分析 ( Biomolecular interaction analysis,BIA)技术实时监测了在链霉亲和素表面层层组装亲和素 -生物素化抗体多层膜的过程 ,结果表明 ,通过链霉亲和素与生物素之间的强亲和作用 ,能够在表面形成均一的多层膜 ,并用实时 BIA技术求得了每层蛋白质的表面浓度 .对于生物素化抗体 ,单层吸附表面浓度为 1 .32 ng/mm2 ;对于链霉亲和素 ,单层吸附表面浓度为 2 .93ng/mm2 .

生物膜干涉技术在生物分子间相互作用检测中的应用

生物膜干涉技术可以实现生物分子之间相互作用的实时分析检测,广泛应用于高校科研实验室的药物开发过程,是一种非标记的、实时监测的先进技术。本文结合生物分子相互作用分析系统的技术原理和实际使用情况,详尽叙述了其在生物分子间相互作用检测的方法和应用,旨在为相关领域的科研工作者提供实验帮助和参考。

基于SPR原理的生物分子相互作用光强法检测技术

本文简述了表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,简称SPR)原理、激发表面等离子体共振的条件和共振发生时反射光的光强变化，对角度扫描法和波长扫描法进行了分析。接着，基于角度扫描的光强检测，以半导体激光器为光源，建立了生物分子相互作用检测实验装置，并在模拟分析的基础上以蓖麻毒素与其单克隆抗体为样本进行了实验。实验表明，实验系统结构简单，可以实时监测生物分子间的相互作用过程，对样本无需进行标记，操作简便。

利用ForteBio OctetRed多通道生物分子相互作用系统非标记实时检测小分子和蛋白质结合的动力学常数

测定评价小分子和治疗靶点蛋白结合的亲和力在药物开发和先导化合物优化过程中很重要。我们使用一种新的无需标记的方法来检测碳酸酐酶和一些小分子抑制物（〈500Daltons）结合的动力学常数，包括速率常数和亲和常数。ForteBio的OctetRED系统检测生物分子相互作用时不需要标记，八通道同时检测，待检测的样品可以放在96孔板中。该系统检测时基于生物膜层反射光干涉技术（BioLayer Interferomelry），简单地说，光纤制成的生物传感器（Biosensor）底端覆盖了生物分子相容层，可以用来固定相互作用分子中的一个，形成生物膜层，当具有一定带宽的可见光入射生物膜层时，根据薄膜干涉的简化模型和光线反射折射定律，入射光线在生物膜层表面被分成两部分，形成第一部分反射光．进入生物层的透射部分在生物层的第二个界面产生反射，形成第二部分反射光。光束垂直入射时，两部分反射光形成干涉波，被光谱仪所检测。相互作用发生时，生物层厚度增加，反射光干涉光谱曲线整体向波长增加方向移动。分子结合或解离时，都会导致干涉曲线的漂移，这种变化可以被实时监测。

拉曼标记分子与水溶性CdTe量子点相互作用研究

量子点由于具有良好的荧光、化学发光、表面增强拉曼等特性，在生物标记及细胞成像等方面具有很好的应用前景。到目前为止，尽管基于量子点的表面增强拉曼特性研究已有文献报道，但在实际生物样品分析中应用还很少。

酵母双杂交系统检测金属硫蛋白(MT)间的相互作用

金属硫蛋白 3(MT 3) ,又称神经生长抑制因子 ,为金属硫蛋白家族中惟一具有生物活性的成员。为了验证其在细胞内是否形成二聚或多聚体 ,构建酵母双杂交系统用于检测。结果表明 :MT 3与MT 3之间在酵母细胞内能发生相互作用 ,进一步用酵母双杂交实验还表明MT 3与MT 1间也存在弱相互作用。由此提示 ,在机体细胞中 ,MT 3可以以同源或异源二聚体的形式存在。

分子生物学图像分析系统软件设计

利用VisualBasic6 0 (简称VB6 )编程技术和分子生物学实验技术 ,研制开发一套用于测定DNA基因扩增片段或限制性内切酶水解后形成的不同大小片段的特征参数的分子生物学图像分析软件 ,该软件能对不同DNA分子、蛋白质分子和其它生物大分子的电泳图像进行定量分析。应用表明 ,该软件系统准确可靠 ,速度快 ,能储存大量信息 ,便于检索和信息处理 。

用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽

展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。

蛋白质相互作用动力学的核磁共振分析方法研究取得新进展

蛋白质相互作用动力学的研究有助于系统地了解蛋白质结构与功能的关系，并为新药靶点的发现和药物设计提供理论和实验基础。在这方面的研究中，核磁共振（NMR）技术具有独特的优越性，是目前研究溶液中蛋白质等生物大分子的三维结构、主链和侧链运动特征及其相互作用和功能（构效关系）的最有效的手段。

开发出可检测活细胞内蛋白质相互作用的双荧光共定系统

荧光蛋白是目前细胞分子生物学广泛应用的分子探针，在细胞生物学、组织工程、基础医学领域也有广泛应用。荧光蛋白以其可以在活细胞正常生理水平下即时反应细胞、

蛋白质相互作用实验技术的最新进展

蛋白质相互作用的研究,是揭示生物体正常生长发育及其应对各种生物或(和)非生物胁迫的分子机制及其调控网络的重要途径。文章综述了近年来发展起来的研究蛋白质相互作用的常用实验性方法,如酵母双杂交系统、串联亲和纯化、免疫共沉淀、GST Pull-down、双分子荧光互补、荧光共振能量转移、表面等离子共振分析,介绍了其原理、发展进程,并分析了其优缺点。

动物线粒体DNA的特异结构及应用分子系统学分析的方法

动物线粒体是一种存在真核生物细胞质中的细胞器,根据已经测序的动物线粒体DNA,它可编码13种蛋白质,2种rRNA,22种tRNA,和非编码区(D-Loop),已有报道发现了新的R-Loop结构,呈现母性遗传特点,且其平均进化速度是核基因组的10倍,尤其是D-Loop区.同时在线粒体DNA控制区中发现的重复序列在种间甚至种内存在着差异可作为动物特异的分子标记。根据线粒体的结构和遗传特点,借助生物信息学手段和丰富的数据库资源,对动物种间及种内群体进行分子系统学的研究,并确定分类地位,亲缘关系。

筛选hALR的相互作用蛋白基因(英)

为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因.筛出的阳性克隆基因序列被测出后,经GenBank查询,结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na+/K+ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列.这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因,为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础.

分子进化生物学中序列分析方法的新进展

简要介绍了分子进化生物学中序列分析方法的最新进展 ,特别强调了似然比检验和贝叶斯推论在分子进化和系统发育假说检验中的重要性 ,并介绍了新方法的一些成功应用 。

基于生物信息学与系统药理学的斑蝥药理分子机制研究

目的:通过生物信息学和系统药理学方法、数据库和工具初步探讨斑蝥有效成分的药理作用的分子机制。方法:利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库获取斑蝥中有效成分及其有效成分的潜在靶标,并进一步获取这些靶标对应的疾病;运用网络可视化软件,构建斑蝥有效成分-靶点-疾病相互作用网络;借助DAVID工具进行斑蝥靶标群作用的生物学功能(GO分析)和信号通路的富集分析(KEGG分析),并运用OmicShare网络工具进行可视化;制作并分析斑蝥靶标的蛋白质相互作用(PPI)网络,将其GO分析结果可视化。结果:斑蝥主要相关疾病有癌症/肿瘤、炎症与感染、神经系统类、心血管类和代谢类;GO分析结果表明斑蝥主要通过类固醇激素介导的信号通路、腺苷酸环化酶调节G蛋白偶联受体信号通路、细胞增殖等作用发挥生物学功能;信号通路富集结果表明斑蝥主要作用蛋白与神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、PI3K-Akt信号通路等多途径发挥其药理作用;通过蛋白质相互作用,斑蝥靶标还可以影响来自RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录起始、细胞内受体信号通路等生物学过程。结论:本研究结果与已有的斑蝥药理机制和应用是一致的,且更丰富。这能为进一步揭示和完善斑蝥的分子药理作用机制、开发新药和发现可能的新用法等提供指导。

电子通讯与生物大分子序列分析

随着核酸和蛋白质序列数据的急剧增加和分子生物学家对最新序列数据的需要,用磁带、磁盘甚至光盘已不能满足大量数据的存贮和数据库迅速更新的要求。另一方面长期维持订购一套(或几套)核酸和蛋白质数据库、购买不断涌现的新的序列分析软件也是一项巨大的开支。近年来,随着全球性信息高速公路的建设。越来越多的分子生物学数据库和软件与国际计算机网络系统相连,任何一台与之连网的计算机都可以利用这些软件和信息资源。

t-PAS165W突变体的分子设计及其生物活性的初步分析

蛋白质工程是继基因工程之后的生物学前沿研究领域。借助于分子设计,在氨基酸水平进行点突变的方法深入研究蛋白质的结构—功能关系,是当前国际上分子生物学的活跃领域和新的发展趋势。 组织型纤溶酶原激活剂(Tissue type plasminogenactivator,t-PA)是由血管内皮细胞合成并分泌的糖蛋白,对心血管系统栓塞性疾病的治疗具有较好的疗效。但由于野生型t-PA在血液中的半衰期太短(～5min),因此需反复多次给药。