对氨基脲敏感的胺氧化酶生物功能化色谱的方法学研究

采用毛细管电泳法建立了对氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)生物功能化色谱模型。将SSAO酶固载到一种仿细胞膜的载体——脂质体上,pH值对固定化酶稳定性影响的实验表明,pH5.0是理想的固载条件;SSAO酶活性检测表明游离态和固定态的酶活性分别为0.0404和0.0347mmolg-1min-1。将有活性的固定化SSAO酶作为假固定相添加到磷酸盐缓冲液中(10mmol/L,pH5)。随着固定化酶的浓度从0.004g/L上升到0.856g/L,其特异性底物苯甲胺的有效淌度从4.06×10-4cm2/(V.s)下降到0.81×10-4cm2/(V.s)。据此,建立的生物功能化色谱模型为研究生物分子间的特异性作用提供了新的技术方法。

生物功能化色谱技术研究胰岛素与其受体间的相互作用

生物功能化色谱技术是通过模拟细胞膜表面环境,在色谱系统内实现研究生物分子间相互作用过程的新技术。利用生物功能化色谱方法研究了胰岛素与其受体间的相互作用。将提取出的胰岛素受体混合物固定化在人工膜(Immobilized artificial membrane,IAM)的表面,并确定了固定化的最佳pH值为7.2,最佳离子强度为20 mmol,最佳有机溶剂浓度为2%(V/V)。通过区带洗脱法确定了胰岛素受体的存在及其与胰岛素间存在相互作用;通过前沿分析法确定了胰岛素受体与胰岛素间相互作用的结合常数大小约为0.701 nmol/L。

应用生物功能化色谱研究SSAO酶与底物和抑制剂之间的相互作用

应用生物功能化色谱技术——毛细管电泳法研究对氨基脲敏感的胺氧化酶（SSAO）与其底物苯甲胺、抑制剂2-溴乙胺之间的相互作用．活性检测表明，SSAO酶经固定化到脂质体上之后，仍然保留有70％～85％的活性．将有活性的固定化酶添加到磷酸盐缓冲液中，随着缓冲液中固定化酶浓度的增加，pH=5时，特异性底物苯甲胺的有效淌度从4．06×10^-4cm^2·V^-1·s^-1下降到0．81×10^-4cm^2·V^-1·S^-1，pH=7时，则从3．91×10^-4cm^2·V^-1·S^-1下降到0．29×10^-4cm^2·V^-1·s^-1．若将抑制剂2-溴乙胺与固定化酶同时添加到电泳缓冲液中，随着抑制剂浓度从10^-6mol·L^-1上升到10^-1mol·L^-1，苯甲胺的有效淌度则从1．42×10^-4cm^2·V^-1·s^-1上升到2．22×10^-4cm·V^-2·s^-1．