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生物合成咖啡酸苯乙酯体系的液相色谱-串联质谱快速分析 被引量:4
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作者 卢定强 蒋奔 +4 位作者 王俊 赵辉 凌岫泉 柴宏 夏亭 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1657-1660,共4页
建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测生物合成咖啡酸苯乙酯体系中咖啡酸(Caffeic acid,CA)和咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethylester,CAPE)的方法。采用LC-MS/MS电喷雾电离(ESI),负离子选择反应监测(SRM)模式检测。以V(乙腈)∶V(水)... 建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测生物合成咖啡酸苯乙酯体系中咖啡酸(Caffeic acid,CA)和咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethylester,CAPE)的方法。采用LC-MS/MS电喷雾电离(ESI),负离子选择反应监测(SRM)模式检测。以V(乙腈)∶V(水)∶V(冰醋酸)=55∶45∶0.5为流动相,流速1.0mL/min,Hypersil C18色谱柱分离并检测生物合成咖啡酸苯乙酯体系中的咖啡酸以及咖啡酸苯乙酯的含量,并对生物合成咖啡酸苯乙酯的收率进行了动力学分析。本方法在进样量为0.2~20μg时具有良好的线性关系,咖啡酸和咖啡酸苯乙酯样品的加标回收率分别为93.4%~98.2%和90.3%~97.8%,相对标准偏差分别为1.79%~2.56%和1.82%~3.67%,咖啡酸苯乙酯收率在3d内可以达到15.54%,表明本方法简便、快速、可靠。 展开更多
关键词 液相色谱-串联质谱法 咖啡酸苯乙酯 咖啡酸 生物(酶)合成体系
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二糖磷酸化酶及其在体外合成生物学中的应用 被引量:1
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作者 李国玮 游淳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期284-291,共8页
二糖磷酸化酶是以二糖为底物,催化磷酸向糖基转移,生成糖1-磷酸的一类酶。根据催化反应的立体化学过程可以分为保留型和翻转型,即供体底物二糖的异头构型可以在糖1-磷酸产物中保留或翻转。目前已发现的超过10种的二糖磷酸化酶均分布在... 二糖磷酸化酶是以二糖为底物,催化磷酸向糖基转移,生成糖1-磷酸的一类酶。根据催化反应的立体化学过程可以分为保留型和翻转型,即供体底物二糖的异头构型可以在糖1-磷酸产物中保留或翻转。目前已发现的超过10种的二糖磷酸化酶均分布在糖苷水解酶和糖苷转移酶家族中。根据二糖磷酸化酶的功能设计体外生物合成体系,不仅可以用于制备高价值化学品,例如直链淀粉、肌醇、昆布二糖等,还可生产一些大宗产品,例如在氢能和酶燃料电池开发等方面已取得了进展。随着蛋白质工程的不断发展,对二糖磷酸化酶的研究越来越深入,相信未来二糖磷酸化酶将在体外生物合成平台扮演更重要的角色。 展开更多
关键词 二糖磷酸化酶 保留和翻转机制 氢能 酶燃料电池 体外生物合成体系
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合成微生物体系研究进展 被引量:6
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作者 尹珺 马安周 +3 位作者 宋茂勇 种国双 庄绪亮 庄国强 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期583-593,共11页
合成微生物体系作为自下而上构建的人工合成微生物群落,相比于自然微生物群落具有复杂度低及可控性、可操作性强等特点。其作为新兴的生物技术,综合借鉴了合成生物学、系统生物学、生物进化等知识,通过合理的设计、规划与调控,成为研究... 合成微生物体系作为自下而上构建的人工合成微生物群落,相比于自然微生物群落具有复杂度低及可控性、可操作性强等特点。其作为新兴的生物技术,综合借鉴了合成生物学、系统生物学、生物进化等知识,通过合理的设计、规划与调控,成为研究微生物生态学理论的实验平台,以及验证已知理论的微生物系统。本文首先简单介绍了合成微生物体系的概念及其由来,阐述了其基本构建原则,随后介绍了其生态学理论基础,并总结概括了近年来的实际应用,最后提出合成微生物体系的发展前景,包括需要设计构建更为复杂的人工合成微生物群落,以及优化生态模型。 展开更多
关键词 合成生物体系 合成生态学 生态模型 生态学理论
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Toward modular construction of cell‐free multienzyme systems
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作者 Yinchen Zhang Ning Nie Yifei Zhang 《Chinese Journal of Catalysis》 SCIE EI CAS CSCD 2022年第7期1749-1760,共12页
The implementation of multiple enzymes for chemical production in a cell‐free scenario is an emerging field in biomanufacturing.It enables the redesign and reconstitution of new enzymatic routes for producing chemica... The implementation of multiple enzymes for chemical production in a cell‐free scenario is an emerging field in biomanufacturing.It enables the redesign and reconstitution of new enzymatic routes for producing chemicals that may be hard to obtain from natural pathways.Although the construction of a cell‐free multienzyme system is highly flexible and adaptable,it is challenging to make all enzymatic reactions act in concert.Recently,modular construction has been conceptual‐ized as an effective way to harmonize diverse enzymatic reactions.In this review,we introduce the concept of a multienzyme module and exemplify representative modules found in Nature.We then categorize recent developments of synthetic multienzyme modules into main‐reaction modules and auxiliary modules according to their roles in reaction routes.We highlight four main‐reaction mod‐ules that can perform carbon metabolism,carbon assimilation,protein glycosylation and nonribo‐somal peptide synthesis,and exemplify auxiliary modules used for energy supply,protection and reinforcement for main reactions.The reactor‐level modularization of multienzyme catalysis is also discussed. 展开更多
关键词 Cell-free biosynthesis In vitro synthetic biology Multienzyme system Modular construction Synthetic module
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基于工程化毕赤酵母一锅法合成硫酸软骨素A 被引量:7
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作者 盛靖雨 金学荣 +2 位作者 胥睿睿 王阳 康振 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期2594-2605,共12页
硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是一种线性多糖,广泛应用于医疗和保健等领域。相比于传统动物组织提取法,微生物合成硫酸软骨素具有可控、易规模化放大等优势。为实现硫酸软骨素A(CSA)的高效合成,本研究首先通过整合软骨素合酶编... 硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是一种线性多糖,广泛应用于医疗和保健等领域。相比于传统动物组织提取法,微生物合成硫酸软骨素具有可控、易规模化放大等优势。为实现硫酸软骨素A(CSA)的高效合成,本研究首先通过整合软骨素合酶编码基因kfoC、kfoA以及UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD至毕赤酵母GS115基因组中,构建了以甘油为唯一碳源发酵生产软骨素的毕赤酵母工程菌株。通过进一步优化软骨素合成途径,软骨素分批补料发酵水平达到2.6 g/L。在进一步整合表达软骨素-4-O-磺基转移酶的基础上,本研究通过向生产软骨素毕赤酵母工程菌株破碎液中添加3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸和软骨素-4-O-磺基转移酶,成功建立了CSA的一锅法生物合成体系。通过优化,最终实现0-40%不同磺酸化水平CSA的可控合成。本研究中CSA的一锅法生物合成体系操作简便、易放大,更适用于工业化大规模生产。本研究结果也为肝素等其他糖胺聚糖的合成提供了思路。 展开更多
关键词 软骨素 硫酸软骨素A 一锅法 3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸 毕赤酵母 生物合成体系
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