一种短期保存肺炎双球菌的简单方法

目的 寻求一种简单易行的保存肺炎双球菌的方法。方法 在 - 2 0℃和 - 80℃条件下 ,用体积分数为 10 %的甘油新鲜兔脱纤维血 (新鲜兔血 )、体积分数为 10 %的甘油陈旧兔脱纤维血 (陈旧兔血 )和脱脂鲜奶作为保存剂 ,观察保存一定时间后肺炎双球菌存活百分率和其生物学性状的变化。结果 在 - 80℃保存 18个月其存活率均达 10 0 % ,且生物学性状保存前后无明显变化 ;在 - 2 0℃该菌株保藏 12个月以上时 ,用新鲜兔血、陈旧兔血和脱脂鲜奶保存剂保存该菌 ,其存活率分别为 70 %、30 %和 5 5 % ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;而用新鲜兔血方法保存的菌株 ,其菌形、胆汁溶解和荚膜试验与保存前菌株相似 ,生化反应与保存前菌株相比稍有改变 ,而其它生物学性状无变化。结论 在 - 80℃保存该菌 ,上述 3种保存剂均可使用 ;在 - 2 0℃保存该菌 。

新鲜羊膜及几种保存羊膜移植治疗角膜碱烧伤

目的:近年来羊膜移植成为治疗角膜碱烧伤较为有效的手段之一,但其生物学基础尚不完全清楚。观察不同活性羊膜移植对兔眼角膜碱烧伤的治疗效果,并分析其生物活性成分作用。方法:实验于2004-01/07于重庆医科大学动物实验中心实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及分组:健康产妇剖宫产胎盘由重庆医科大学附属第一医院产科提供。选用新西兰大白兔45只,按随机数字表法分为5组(n=9):新鲜羊膜组、甘油保存羊膜组、乙醇保存羊膜组、真空干燥羊膜组及对照组。②实验方法:于新鲜羊膜制备后24h内,保存羊膜保存1个月后行羊膜移植。③实验评估:术后2～21d每日、21d后每3日观察眼表角膜透明度及新生血管生长情况;术后14,30,60d行荧光素染色,观察角膜上皮的修复情况;术后2周、1个月、2个月行组织病理和透射电镜观察。结果:白兔43只进入结果分析。①在角膜透明性及角膜上皮修复速度上新鲜羊膜组、甘油保存羊膜组和真空干燥羊膜组无明显差异,均明显优于乙醇保存羊膜组和对照组,乙醇保存羊膜组与对照组无明显差异。②在抑制新生血管方面,新鲜羊膜组明显优于甘油保存羊膜组及真空干燥羊膜组。结论:真空干燥羊膜、甘油保存羊膜和新鲜羊膜移植后均能减轻眼表碱烧伤的炎症反应,促进角膜上皮修复。其中新鲜羊膜效果最好,可能与其较其他羊膜含有更多的生物活性物质有关。

新鲜制备及中长期保存的羊膜细胞外基质结构特征

目的:制备并保存羊膜细胞外基质,观察新鲜制备及中长期保存的羊膜细胞外基质的结构特点。方法:实验于2004-01/12在赣南医学院科研中心完成。①采用目前国际公认的羊膜制备与保存方法,制备并保存羊膜细胞外基质。②取新鲜制备的羊膜细胞外基质、中期保存的羊膜细胞外基质(4℃恒温冰箱储存备用1周)、长期保存的羊膜细胞外基质(-80℃超低温冰箱中储存备用3个月),通过大体、光镜、透射电镜和扫描电镜观察其形态及结构特点。结果:①羊膜细胞外基质大体观察:新鲜制备及中、长期保存的羊膜细胞外基质均为透明、无色、有一定韧性生物膜,其厚度约0.02～0.4mm。②光镜观察结果:新鲜制备和经中、长期保存的羊膜细胞外基质可见2层结构:基底膜厚薄不均,无细胞结构;致密层由结缔组织组成。新鲜羊膜与中期保存的羊膜细胞外基质致密层较长期保存的羊膜细胞外基质略厚;新鲜羊膜细胞外基质可见少量成纤维细胞,而中、长期保存羊膜细胞外基质的成纤维细胞较少见。③透射及扫描电镜观察结果:新鲜制备与中期保存的羊膜细胞外基质两者的基底膜厚约0.1～0.2μm,致密层厚约30～400μm,其主要结构由胶原纤维、网状纤维和基质组成,偶见成纤维细胞;长期保存的羊膜细胞外基质的基底膜厚约0.2～0.3μm,致密层厚约20～400μm,其中致密层的主要成分为胶原纤维和网状纤维,无细胞结构;三者的胶原原纤维结构完全一致。结论:羊膜经过组织工程技术处理后去除其上皮细胞或使上皮细胞失活,保留基底膜与致密层,形成羊膜细胞外基质。羊膜细胞外基质主要成分是胶原纤维和网状纤维,因其免疫原性低于羊膜并具有抗炎性,是一种特殊的细胞外基质,作为一种细胞黏附的基膜和生物支架,具有广阔的研究和应用前景。因此羊膜细胞外基质可作为体外细胞培养的生物载体而应用于基础研究。

弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究

目的探索一种简单、方便、有效的弯曲菌菌种保存方法。方法采用含30%甘油的脑心浸液肉汤,将实验室保存的19株弯曲菌于-30℃和-70℃分别保存,每个菌株3个菌种管。1年后,采用5%脱纤维羊血的布氏肉汤进行增菌,然后转种哥伦比亚血平板,比较存活效果。结果-30℃条件下采用多管法保存弯曲菌可以获得与-70℃条件下保存相当的效果。结论采用多管法(每株菌3个菌种管)于-30℃冷冻保存弯曲菌是一个简单、方便、有效、实用的方法。

SMO保存液对犬肾低温保存期间Na^+-K^+ ATPase的影响

目的:研究SMO保存液对犬肾低温保存期间Na+-K+ATPase的影响。方法:建立犬离体肾脏单纯低温保存模型,对照组用0~4℃HTK保存液和UW保存液对供肾进行灌注和保存,试验组用0~4℃自制SMO保存液对供肾进行灌注和保存,分别于24、48、72h后取皮质标本,进行组织病理学观察及检测Na+-K+ATPase的活性。结果:SMO液组所见组织病理学改变,48h和72h比HTK液组轻,在各时间点与UW液组基本相似。Na+-K+ATPase活性,保存各时点,SMO液组与UW液组无明显差异;保存24h和48h,SMO液组与HTK液组无明显差异;保存72h,SMO液组Na+-K+ATPase活性明显高于HTK液组,存在明显差异。结论:SMO保存液在减轻细胞形态学改变和减缓Na+-K+ATPase活性下降方面显著优于HTK保存液,与UW保存液相当。

形态学实验室菌种保存的实验方法改革

目的探讨形态学实验室菌种保存的新方法。方法采用液状石蜡、甘油冷冻以及滤纸片低温冷冻保存菌种的方法对实验室的菌种进行保存。结果 3种菌种保存方法经过1年的保存,各菌种均生长良好。结论此3种菌种保存的方法适于实验室现有条件,切实可行。

临床与基础研究中实验室生物样本对接管理的主要问题及对策

背景:转化医学实现需要临床医师与基础研究者的密切合作。疾病相关的人体生物样本是转化医学研究的重要资源,是实现转化的核心环节。目的:分析临床医师与基础研究者合作开展转化医学研究的必要性,并就临床与基础研究实验室生物样本对接管理中的主要问题及策略进行了探讨。方法:英文检索词设定为"Translational medical research,biosample,biobank";中文检索词设定为"转化医学,生物样本,生物样本库"。检索中国知网、维普资讯、万方数据、Pub Med数据库2010年1月至2016年12月相关的文献124篇,选取其中部分文献及作者所在单位与其他单位的科研合作经验进行分析探讨。结果与结论:临床与基础研究实验室生物样本对接管理中可能遇到的问题,包括生物样本采集的伦理问题、标准操作流程的设定、生物样本的采集、运输、保存、登记、管理以及有关生物样本的知识产权分割等,医学标准化,高质量的疾病相关的人体生物样本是实现转化医学的核心环节。建立完善的利益共享机制,对于做好临床与基础研究实验室生物样本对接管理,后续转化医学研究工作的顺利进行将起到至关重要的作用。

骨髓造血干细胞分离 保存的研究

目的探讨骨髓造血干细胞分离及保存的方法。方法应用羟乙基淀粉(HES)或percoll液分离骨髓造血干细胞;联合应用二甲基亚砜(DMSO)和HES对造血干细胞进行液氮保存。应用血细胞计数法、锥虫蓝拒染实验、粒-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)的体外培养等方法对造血干细胞冷冻前后的有核细胞(NC)数、存活率、体外分化能力进行检测;应用流式分析法计数CD34+细胞数。结果利用HES沉降法分离的单个核细胞数、CD34+细胞数、CFU-GM集落数均比percoll液离心法明显增多;骨髓造血干细胞冷冻保存1年后的有核细胞数、CD34+细胞数、锥虫蓝活率、CFU-GM集落计数与保存前差异无统计学意义。结论HES法分离骨髓造血干细胞方法安全、有效;通过程序降温,联合使用DMSO及HES的低温冻存方法对骨髓造血干细胞的长期保存是适合的。

不同保存液及放置时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响

背景:干细胞制备完成后的放置时间与其存活率的关系是临床应用安全、有效的基础。目的:观察不同保存液及不同保存时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响,为干细胞有效期的确定提供重要依据。方法:选用脐带源间充质干细胞制备干细胞制剂,分别采用生理盐水、培养基、培养基+生理盐水、生理盐水含表皮生长因子、培养基含低分子肝素钙悬浮保存。使用冷藏箱模拟细胞运输条件,分别在第0,6,12,18,24,30,36,42,48小时取样,进行细胞总数和细胞活率的检测。结果与结论:各组在24 h内的细胞数量和细胞活率差别不大。24 h后,培养基组和培养基含低分子肝素钙组的细胞总数和细胞活率优于生理盐水含因子组、生理盐水组、培养基+生理盐水组。干细胞制剂制备完成后,冷藏运输24 h内细胞活率可达90%以上,保存液中的营养成分及合适的pH值,可使细胞活率显著提高。

溴氰菊酯在保存药用动物标本中的应用

目的探讨溴氰菊酯杀虫剂在保存药用动物标本中的应用方法。方法测量干燥保存的动物标本的体表面积后,以溴氰菊酯(用量以100mg/m2计算)均匀涂布在该动物标本体表。应用化学法结合空气去湿机机械吸潮的防治虫害的方法,观察并记录防治虫蛀的效果,与常规应用氯化苦或甲醛的防治害虫的方法进行比较。结果以溴氰菊酯为杀虫剂防治动物标本虫蛀的效果明显优于氯化苦或甲醛。结论以溴氰菊酯为杀虫剂、结合空气去湿机机械吸潮的方法可有效防治动物标本虫害,适用于干燥保存动物标本。

2019冠状病毒病(COVID-19)疫情期生物样本保藏生物安全防护原则及建议

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染引起的2019冠状病毒病(COVID-19)是乙类传染病。随着COVID-19疫情蔓延,生物样本库样本保藏的生物安全风险增加,其生物安全防护显得越来越重要。根据国家有关规定和中华医学会相关指南,本文基于SARS-CoV-2病原学和COVID-19流行病学资料,提出了生物样本采集、转运、处理、保藏、检测、检测后处置、突发事件等过程中个人和生物样本保藏场所的生物安全防护原则及若干建议。强调依据有无病毒载量信息、传染力大小、标本类型(可能接触传播、气溶胶传播、粪口途径传播)对样本进行严格的生物安全风险评估,以指导疫情期间生物样本保藏、确保生物样本库生物安全。

不同介质对脂肪干细胞活性短期保存的影响

目的探讨10%富血小板血浆(PRP)、10%人血清、生理盐水对脂肪干细胞(ADSC)活性的影响,确定其适宜的保存环境。方法分离培养ADSC,将ADSC分别保存于10%PRP、10%人血清、生理盐水中,在室温下放置2 h,分别检测细胞的增殖能力、成骨分化能力和成活率,确定ADSC的适宜保存介质。结果与生理盐水组比较,ADSC在10%PRP、10%人血清中表现出较高的增殖能力和分化能力,且这两组细胞成活率均较生理盐水组高,其中10%人血清组细胞成活率最高,能够达到78.08%,其次为10%PRP组,为75.68%。生理盐水组成活情况最差,为62.34%。结论10%人血清最适合ADSC的短期保存。

经液氮保存同种带支架瓣膜的制备

目的 探讨经液氮保存的同种带支架瓣膜的制作方法.方法 将制作完成的瓣架经液氮保存1个月后复温,进行几何形态检测（6枚）.涤纶包布及缝线经液氮保存1～3个月后复温,检测机械强度变化（6例）.采集同种带瓣主动脉和肺动脉,缝于瓣架上,缝制完成后打水观察瓣叶的闭合情况,初步粗略估算Rb/Rc、H/Rc和α值.将制作完成的瓣膜灭菌培养后,程控降温,液氮保存.结果 瓣架直径在液氮冷冻前为（21.1±0.06）mm,冷冻后为（21.1±0.05）mm,P＞0.05;瓣架高度冷冻前为（14.03±0.02）mm,冷冻1个月后为（14.04±0.03）mm,P＞0.05;几何形态未发生明显变化.涤纶包布经液氮冷冻前纤维方向拉力强度纵向为（19.05±1.64）Mpa,冷冻1个月、3个月后分别为（17.29±1.79）Mpa、（18.23±1.6）Mpa（P＞0.05）;横向纤维冷冻前为（18.16±1.16）Mpa,冷冻后分别为（16.81±0.97）Mpa、（17.46±1.54）Mpa（P＞0.05）;包布物理强度未发生明显变化.缝线经液氮冷冻前拉力强度为（163.99±7.83）Mpa,冷冻1个月、3个月后分别为（168.88±6.28）Mpa、（168.74±1.85）Mpa,P＞0.05;缝线物理强度未发生明显变化.初步估算Rb/Rc值为1.2左右,H/Rc值为1.4左右,α值为10°左右,瓣架构型均符合制作标准.结论 经液氮保存同种带支架瓣膜的材料选择、设计和制作方法均达到了人工瓣膜的技术要求.

甘油羊血巧克力汤在嗜血杆菌菌种保存中的应用

目的：评价甘油羊血巧克力汤在嗜血杆菌菌种保存中的应用价值。方法将 ATCC10211、ATCC49247、ATCC49766流感嗜血杆菌菌种用甘油羊血巧克力汤置－35℃以下的冰箱中进行保存，将保存菌种于1个月、3个月、6个月、1年、2年从冰箱中取出，35℃复溶5 min，然后立即转移到巧克力平板培养基上，置于 CO2环境、35℃温度中过夜培养，观察菌株的存活情况、菌落形态、因子需求试验有无变化，保存2年的ATCC49247、ATCC49766标准菌种进行纸片扩散法药敏试验。结果经过2年的观察，3株流感嗜血杆菌菌种生长良好存活率100％，菌落无色透明，扁平湿润，革兰染色为革兰阴性小杆菌，血平板卫星试验阳性，不溶血，哥伦比亚琼脂卫星试验阴性等性状符合流感嗜血杆菌的特性。ATCC49247、ATCC49766标准菌种药敏特征仍符合临床实验室标准协会要求。结论甘油羊血巧克力汤适合嗜血杆菌菌种保存。

活体冷冻技术联合心电图研究小鼠心脏微循环

目的应用活体冷冻技术（IVCT）联合心电图研究不同血流动力学条件下活体小鼠心脏微循环变化。方法分别在正常血流、心肌缺血和心脏骤停等血流动力学条件下，心电图监测的同时行小鼠心脏活体冷冻。连续的石蜡切片后，分别进行苏木精-伊红（HE）染色、过碘酸-希夫氏染色和血清白蛋白、免疫球蛋白荧光染色及共聚焦显微镜分析，并进行统计分析。结果与正常血流动力学相比，心肌缺血时，微血管内红细胞数量减少和形态改变、心肌细胞糖原缺失、血清白蛋白异位分布到心肌细胞浆内、T小管网络破坏、间距增宽；心脏骤停条件下，红细胞数量形态各异、心肌细胞糖原缺失、T小管网络破坏、间距变窄。结论应用活体冷冻技术与心电图即刻捕获了不同血流动力学条件下心肌细胞微循环及微环境的组织病理学改变。