基于全肿瘤MRI筛选胰腺导管腺癌SMAD4表达影像-生物学标志物

目的利用包括影像组学特征在内的全肿瘤MRI评价,结合组织病理学和SMAD4表达分析,寻找预测胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)SMAD4表达的影像-生物学标志物。方法纳入2012年1月至2017年9月复旦大学附属中山医院收治的60例经手术病理证实的PDAC患者。患者术前均用同一台1.5T MRI进行腹部平扫及动态增强检查,并对PDAC进行包括主观评价和影像组学分析的全肿瘤影像学评价。对PDAC进行病理评价,分析SMAD4表达。用最大相关最小冗余(maximum relevance minimum redundancy,mRMR)算法筛选影像组学特征并进行多因素融合建模,获取可能预测SMAD4表达的影像-生物学标志物。结果SMAD4阳性表达者11例(18.3%)、阴性表达者49例(81.7%)。不同SMAD4表达组间性别差异有统计学意义(P=0.012),余临床资料及常规影像学评价指标差异均无统计学意义;SMAD4阴性表达组男性比例明显高于女性(71.4%vs 28.6%)。经基于SMAD4表达的全肿瘤影像组学特征单因素筛选,6个影像组学特征进入多因素影像组学特征融合模型。所得最佳子集模型为门脉期_wavelet-HHL_NGTDM_Contrast+T1WI_wavelet-HHL_GLDM_HighGrayLevelEmphasis,BIC值为33.4,ROC曲线下面积为0.92(P<0.001),预测灵敏度为90.9%、特异度为81.6%,组内预测准确度为83.3%。结论通过包括影像组学特征的全肿瘤MRI评价有望无创获取PDAC病灶SMAD4表达的影像-生物学标志物,具有较好的诊断效能。

抗瘤增效方联合化疗对中晚期非小细胞肺癌患者肿瘤标志物影响的随机对照研究

背景:某些肿瘤标志物在临床上广泛应用并成为判断肺癌疾病进展情况的一个重要观察指标,中医药与化疗联合治疗肺癌能否改善肿瘤标志物水平也成为临床医生逐渐关注的一个问题。目的:探讨抗瘤增效方对中晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)化疗患者血清糖类抗原50(carbohydrate antigen50,CA50)、细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的影响及其与临床疗效的关系。设计、场所、对象和干预措施:所有患者均为2008年10月～2009年12月在上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科及上海市浦东新区浦南医院肿瘤科治疗的住院患者,采用前瞻性、随机、对照的临床研究方法,将74例中晚期NSCLC患者分为治疗组(抗瘤增效方+化疗)、对照组(单纯化疗)各37例,均采用NP方案(诺维本+顺铂)化疗2个疗程,治疗组在化疗同时口服中药抗瘤增效方。主要结局指标:检测治疗前后NSCLC患者CA50、CYFRA21-1、CEA水平并观察疗效、中医症状、生活状态评分(Karnofsky评分),探讨疗效与CA50、CYFRA21-1、CEA水平变化的关系。结果:两组患者均未达到完全缓解。治疗组近期稳定率(部分缓解+稳定)为89.20%(33/37),优于对照组的70.30%(26/37)(P<0.05)。治疗组治疗后血清CA50、CYFRA21-1、CEA水平均较对照组明显下降(P<0.05),稳定患者治疗后血清CA50、CYFRA21-1、CEA水平也下降,对照组变化不明显,甚至有升高趋势。此外,治疗组治疗后中医证候改善率为51%(19/37),优于对照组的11%(4/37)(P<0.05)。而生活质量的变化,治疗组总有效率为91.89%(34/37),优于对照组的56.76%(21/37)(P<0.01)。结论:中药抗瘤增效方结合化疗治疗中晚期NSCLC可以获得较好的局部病灶稳定缓解,降低肿瘤标志物水平,同时明显改善伴随症状,提高生活质量。

一种新的肝癌肿瘤标志物——聚糖蛋白3

聚糖蛋白3基因是近年来发现的一种在肝癌组织中高表达的基因，很可能成为一种应用于肝细胞癌诊断的新的肿瘤标志物。现介绍聚糖蛋白3的发现及其结构，聚糖蛋白3mRNA在胎儿、成人组织、肝细胞癌组织及肿瘤细胞系中的表达，聚糖蛋白3在人HCC细胞系、肝组织及人血清中的检测结果。

广东医科大学医学系统生物学研究所

消化系统肿瘤的发病率和死亡率均较高,肿瘤标志物与肿瘤的发生、发展密切相关,因此肿瘤标志物检测是当前进行癌症筛查和诊断的重要方法之一。但单一的肿瘤标志物检测灵敏度和特异度不高,不利于肿瘤的筛查和早期诊断。因此,开发高效的肿瘤标志物联合检测技术对消化系统肿瘤的早期诊断和治疗具有重要意义。本文系统地综述了消化系统肿瘤标志物联合检测的最新进展,为评价其在消化系统肿瘤诊疗方面的临床应用价值和发展前景提供理论依据。

乳腺癌血清标志物的TMT标记定量蛋白质组学筛选及分析

目的探讨乳腺癌患者血清中蛋白的表达变化,筛选并分析乳腺癌诊断的生物学标志物。方法采用定量蛋白质组学串联质量标签(TMT)标记技术对68例Ⅱ期乳腺癌患者及62例健康女性的血清蛋白进行检测,并进行蛋白质定量分析,筛选乳腺癌患者血清中发生显著变化的差异蛋白。利用Uni Prot数据库和Proteome Discoverer软件及在线工具STRING对差异蛋白进一步行生物信息学分析,应用蛋白质印迹法和q PCR对变化倍数显著的差异蛋白VIME(上调为健康对照女性的3.918倍)和RAF1(下调为健康对照女性的0.251)进行验证。结果共获得67种差异蛋白,其中26种表达上调,41种表达下调。基因本体论(GO)注释分析和功能聚类分析显示上述差异蛋白与肿瘤的血管生成、新陈代谢进程、生物黏附能力等相关。蛋白质印迹法和q PCR验证结果显示RAF1蛋白和mRNA在Ⅱ期乳腺癌患者血清中的表达水平均低于健康对照女性,而VIME蛋白和mRNA的表达均高于健康对照女性,与筛选结果一致。结论定量蛋白质组学TMT法能有效筛选Ⅱ期乳腺癌患者血清中的差异蛋白,其中VIME和RAF1蛋白有望成为乳腺癌淋巴结转移的候选血清标志物。

BICD货物接头蛋白1基因作为胶质瘤级别进展分子标志物的研究

目的检测BICD货物接头蛋白1(BICD1)基因在中国人群各级别胶质瘤样本中的表达水平,并探讨其在低级别胶质瘤向高级别胶质瘤进展过程中的潜在作用。方法从中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)的全转录组表达谱芯片数据库和全转录组测序数据库中收集BICD1的mRNA表达数据,结合胶质瘤的世界卫生组织(WHO)级别、分子亚型、患者无进展生存期和总生存期及经典分子标志物的表达与突变数据,分析BICD1表达与胶质瘤的级别进展及恶性程度的相关性。收集WHOⅡ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤组织各10例,提取RNA并反转录为c DNA进行实时荧光定量PCR(qPCR),分析各级别胶质瘤样本中BICD1在转录水平上的表达差异。结果 CGGA全转录组表达谱芯片和全转录组测序数据库中提取的表达数据显示,BICD1的表达水平随着胶质瘤的级别升高而升高(WHOⅢ及Ⅳ级vs WHOⅡ级:t=7.901,P<0.01)。qPCR结果显示较高级别的胶质瘤组织中BICD1的表达水平更高(WHOⅢ级vs WHOⅡ级:t=3.514,P<0.01;WHOⅣ级vsⅢ级:t=2.128,P=0.037 6)。BICD1高表达与胶质瘤患者更短的无进展生存期和总生存期均有关(P均<0.01)。BICD1在前神经元型、神经元型、经典型和间质型胶质瘤样本中的表达水平不同(F=21.8,P<0.01),其中间质型胶质瘤样本中BICD1表达水平最高,前神经元型胶质瘤样本中表达水平最低。BICD1的表达水平与异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变、染色体1p19q联合缺失、人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)突变等指示胶质瘤恶性程度的经典分子标志物相关,其中IDH1突变胶质瘤样本中BICD1的表达水平低于野生型样本(t=7.769,P<0.01)。结论 BICD1可能是指示低级别胶质瘤发生级别进展和恶性进展的潜在分子标志物。

乳腺癌患者肿瘤循环DNA的定量分析

目的:检测乳腺癌患者肿瘤循环DNA的含量及其p16基因5′CpG岛甲基化状态的改变.方法:收集61例乳腺癌患者、33例乳腺良性病变患者和27例健康志愿者的血浆样本,抽提血浆循环DNA,以SYBRgreenI荧光染色法行DNA定量;利用半巢式甲基化特异性PCR技术,检测61例乳腺癌患者血浆循环DNA和相应癌组织p16基因5′CpG岛甲基化状态的改变.结果:乳腺癌患者、乳腺良性病变患者、健康自愿者肿瘤循环DNA浓度分别为(65.0±45.3),(19.0±9.5)和(13.0±7.3)μg/L,乳腺癌患者血浆循环DNA浓度显著高于乳腺良性病变患者和健康自愿者,差异有统计学意义(P<0.05).61例乳腺癌患者血浆循环DNA和相应癌组织p16基因5′CpG岛甲基化状态的改变检出率分别为44.3%和46.2%,两者检出率无统计学差别(P>0.05).结论:血浆肿瘤循环DNA的定量有可能成为一种新的恶性肿瘤标志物.

Op18:一个潜在的肝癌诊断标志物

目的探讨人原癌基因蛋白18(Op18)在肝癌细胞和组织中的表达及临床意义。方法应用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色法检测常见肝癌细胞和88对配对肝癌组织及癌旁组织中Op18的表达。结果 Hep3B、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3和HCCLM6等常见肝癌细胞株中均见Op18表达;配对肝癌及癌旁组织中,RT-PCR发现肝癌组织中Op18阳性率达68.75%(11/16),Western blot发现Op18的阳性率为56.25%(9/16),免疫组化检测发现肝癌组织中Op18的阳性率为65.28%(47/72),P<0.05;Op18的表达与肿瘤大小数目、临床分化、门脉侵犯和TMN分期相关(P<0.05)。结论 Op18可能是一个潜在的肝癌诊断标志物。

CA19-9、AFP和CEA联合检测在消化道恶性肿瘤诊断中的价值

甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）是消化道恶性肿瘤比较传统的特异性相对较高的肿瘤标志物。近年来，癌抗原19-9（CA19-9）作为恶性肿瘤生物学标志的研究已经日趋深入，国内外均有报道。多数研究表明，CA19—9在许多恶性肿瘤血清中会升高，因此我们采用血清CA19—9、AFP和CEA联合检测以提高对消化道恶性肿瘤的实验室阳性检出率，协助临床医生对该类疾病作出诊断。

非黏附性球培养在肿瘤干细胞研究中的应用现状

肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)理论的提出为肿瘤靶向治疗研究提供了新的思路,靶向杀灭CSCs将可能有效消除肿瘤。有效、特异地分离和培养CSCs是开展CSCs研究的前提。非黏附性球培养最初应用于成体干细胞的研究,后来应用于CSCs自我更新能力的研究,近来已成为富集肿瘤干细胞的常用方法之一。本文综述非黏附性球培养CSCs的应用原理、关键问题以及相关研究进展。

多因素判别分析在卵巢肿瘤诊断中的应用

作者检测１０７例卵巢肿瘤和５０例健康妇女血清九项肿瘤生物学标志物含量，对其结果在电子计算机进行多因素分析。结果：判别疗程符合率，组内８４．４％，组外８６．６％，判别效果满意。

MicroRNA-4286在前列腺癌诊断中的价值

目的检测血清前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)升高患者microRNA-4286(miR-4286)的表达情况,探讨其在前列腺癌诊断中的意义。方法选择2016年3月至8月第二军医大学长海医院日间手术病区收治的171例血清PSA升高、行前列腺穿刺活检的患者,采用q PCR技术检测miR-4286在血清中的表达,比较前列腺癌(50例)和良性前列腺病变(121例)患者miR-4286表达的差异。并且分析10例良性病变患者术前与术后3 d的血清miR-4286的表达变化,以及15例PCa患者的术前与术后3 d及8例术前与术后7 d的血清miR-4286的表达变化。以受试者工作特征曲线分析评价miR-4286对PCa的诊断效能。结果 MiR-4286在前列腺癌和良性前列腺病变患者中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。术后3 d前列腺癌患者miR-4286的表达水平升高,与术前相比差异有统计学意义(P<0.05),术后3 d良性前列腺病变患者miR-4286的表达水平与术前相比差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d miR-4286在前列腺癌患者中的表达水平与术前相比差异无统计学意义(P>0.05)。MiR-4286和PSA在前列腺癌中的诊断效能分别为曲线下面积(AUC)0.653(界值3.72,敏感性68.75%,特异性60.06%)和0.733(界值11.38 ng/m L,敏感性57.16%,特异性92.35%)。结论 MiR-4286在前列腺癌中具有良好的诊断价值,可作为新型的液体活检标志物。

大肠癌噬菌体展示肽库的构建及大肠癌早期检测分子的筛选

目的构建大肠癌噬菌体展示肽库,筛选用于大肠癌早期检测的分子标志。方法选取30例第二军医大学长海医院肛肠外科手术后立刻冻存的大肠癌组织标本构建T7噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集大肠癌组及非肿瘤对照组血清中的抗体进行5轮亲和筛选,富集大肠癌相关肽;随机挑取5轮筛选后的2000个噬菌体克隆,用ELISA方法进一步筛选与大肠癌患者血清和对照血清反应性存在差异的大肠癌相关标志物克隆,进行基因序列测定。应用通过Chilibot文献挖掘方法预测各克隆的蛋白功能,反证筛选结果。结果 (1)所建大肠癌噬菌体展示肽库的滴度为3.0×106pfu,经PCR鉴定其重组率为60%,库容为1.8×106pfu。(2)共筛选出18个有意义的噬菌体,测序后,预测其蛋白功能,其中12个与肿瘤的发生相关。结论应用ELISA对肿瘤重组抗原的噬菌体展示肽库进行筛选的方法 ,可以用来发现差异表达的抗原。所筛选出的噬菌体克隆所表达的抗原可用于早期筛检大肠癌。

环境温度对Luminex流式荧光免疫分析法测定糖类抗原242结果的影响

目的分析定标和测定时不同环境温度下Luminex流式荧光免疫分析法测定糖类抗原242(CA242)结果的差异,评价环境温度对测定结果的影响。方法选择高值和中值2个不同浓度的标本,分别采用Luminex流式荧光免疫分析法在11个温度点(18.3、20.1、21.5、22.2、24.1、25.0、25.4、26.5、27.4、28.5、30.0℃)重复测定CA242 5次,以定标时环境温度(25℃)下的检测结果的平均值为参比值,计算不同环境温度下检测结果的偏倚。随机选择49例涵盖高、中、低值的标本,分别采用Luminex流式荧光免疫分析法在20、25和30℃下对CA242进行测定,比较测定结果并分析其相关性。结果中值标本和高值标本在18.3℃下测定结果的偏倚分别为-35.6%和-29.4%。49例标本在20℃下的测定结果与25℃下的测定结果差异有统计学意义(P<0.001),并且二者具有相关性(回归方程:Y=0.676 9X+0.374 7,R2=0.990 5);在30℃下的测定结果与25℃下的测定结果差异有统计学意义(P<0.001),并且二者具有相关性(回归方程:Y=0.896 6X+0.227 0,R2=0.999 4)。结论环境温度过低或过高会对Luminex流式荧光免疫分析法测定CA242产生负性影响,测定时应使环境温度保持相对恒定且控制在定标温度±4℃范围内。