荧光原位杂交技术及其在肿瘤生物学中的应用

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是近年应用起来的一种新的分子细胞遗传学技术。该方法具有简便、快速、安全、稳定及结果直观等优点，目前被广泛用于细胞遗传学、产前诊断、核组成、基因定位、基因扩增和缺失的检测，以及肿瘤生物学等领域。本文主要综述了ＦＩＳＨ技术的发展史、方法机理及其在肿瘤基础研究和临床研究中的应用。

microRNAs:新型食管癌生物学标记物

microRNAs(miRNAs)是一类进化保守的单链非编码RNA,由17-25个核苷酸组成,可在转录后水平调节靶基因的表达。miRNAs可参与调节细胞的分化、增殖、凋亡、代谢等生理过程,部分miRNAs在肿瘤的发生、发展中起癌基因或抑癌基因的作用。因此miRNAs有望成为新型食管癌生物学标记物,用于食管癌的诊断、预后评估和靶向治疗。本文就miRNAs的特点及其在食管癌中的研究进展作一综述。

MAGLUMI X8全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能验证

【目的】探讨并验证MAGLUMI X8全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能。【方法】对甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原125(CA125)、前列腺特异性抗原(PSA)和游离前列腺特异性抗原(fPSA)进行精密度、正确度、线性范围、参考范围和相关性分析;另外用6西格玛(6σ)质量管理规则评价上述项目的分析性能水平,设计最优室内质控方案。【结果】AFP、CEA、CA125、CA199、PSA和fPSA中重复精密度变异系数(CV)在1.40%~3.98%范围内,中间精密度CV在1.39%~4.98%范围内;相对偏倚在-6.21%~-1.39%范围内,均符合要求;线性范围斜率b在0.9896~1.0243范围内,相关系数r^(2)在0.9954~0.9983范围内,参考范围验证均在厂家标注的参考范围内,符合要求;CA125和PSA项目σ值≥6,AFP、CEA、CA199、fPSA项目σ值≥5。【结论】MAGLUMI X8检测系统的精密度、正确度、线性范围、参考区间和相关分析性能指标均通过相关标准,完全符合医学实验室的性能要求,上述项目分析性能水平均达到优秀,可对临床诊断和预后提供检验依据。

四项肿瘤标记物在肺癌中的表达及其相关因素分析

目的通过检测肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白l9片段21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和血清铁蛋白(SF)在肺癌患者血清中的表达及其相关因素分析探讨CEA、CYFRA21-1、NSE、SF的临床应用价值。方法采用电化学发光免疫技术分别对39例体检健康人员和196例肺癌患者的血清标本进行CEA、CYFRA21-1、NSE、SF的含量检测。结果肺癌组血清与对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);诊断效能ROC分析显示,CEA、CYFRA21-1、NSE和SF曲线下面积分别为0.824、0.734、0.809和0.787,对肺癌具有诊断意义(P<0.01);血清CEA、CYFRA21-1、NSE和SF四项联合检测阳性率81.6%,其中对肺腺癌为74.6%,肺鳞癌为91.3%,小细胞肺癌为75.5%,均高于单项检测及前三项联合检测。四项肿瘤标记物的表达与肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌、肝转移、骨转移等因素之间有不同的直线相关关系。结论四项肿瘤标志物联合检测有助于肺癌的诊断及病理类型鉴别,对其病程推断、脏器转移监测、预后等具有一定的临床价值。

子宫颈癌干细胞的分离培养及生物学特性鉴定

目的:分离、培养子宫颈癌干细胞,并鉴定其生物学特性。方法:收集19例不同临床分期(ⅠA～ⅡB期)子宫颈癌患者的肿瘤组织,通过机械剪切、酶消化等方法处理后分离获得单个细胞,采用肿瘤细胞球培养液(tumor sphere medium,TSM)培养获得悬浮细胞球。收集悬浮细胞球形成细胞,通过有限稀释法观察该细胞的克隆形成能力,MTT法检测紫杉醇(paclitaxel)和多柔比星(adriamycin)对细胞的抑制率,荧光活性细胞分类仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测细胞表面标志物,RT-PCR和Western印迹法检测干细胞、耐药基因及相关癌基因表达。裸鼠皮下接种分离获得的干细胞,观察其成瘤能力,并进行病理类型分析。结果:19例原代细胞经过10～15d培养,其中8例有悬浮细胞球形成,形成比例随肿瘤临床分期的提高而增加。细胞球形成细胞具有克隆形成能力。紫杉醇(100nmol/L)和多柔比星(100nmol/L)对其细胞的平均抑制率分别为(77.65±6.46)%和(48.00±7.15)%,差异有统计学意义(P<0.01)。FACS检测结果提示,细胞表面标志为CD34-CD105-CD44+CK17+;RT-PCR检测结果提示,细胞球表达干细胞标志Oct4和Piwil2,耐药基因ABCG2及相关癌基因c-myc、stat3和sox-2也有mRNA水平的表达;Western印迹法检测结果进一步提示,肿瘤细胞球表达干细胞标志Oct4和Piwil2蛋白。裸鼠皮下接种细胞12周后全部成瘤,且病理类型与来源标本一致。结论:成功分离获得子宫颈癌干细胞,为将来研究子宫颈癌个性化治疗及疗效评价提供了很好的研究模型。

血清肿瘤标记物对孤立性肺结节良恶性的诊断价值

目的:探讨肿瘤标记物在孤立性肺结节(solitary pulmonary nodule,SPN)中的诊断价值。方法:选择北京大学第一医院2011年1月至2013年1月经手术病理明确诊断的SPN患者175例,检测血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma,SCC)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和细胞角蛋白19片段(cytokerantin-19-fragment,CYFRA21-1)水平,采用ROC曲线及曲线下面积比较诊断价值,计算诊断灵敏度、特异性和准确度。结果:175例SPN患者中,肺癌125例,良性病变50例。恶性SPN组血清CEA、SCC和CYFRA21-1水平明显高于良性SPN组(P<0.05),恶性SPN组CEA、SCC和CYFRA21-1以及4种标记物联合检测的阳性率均高于良性SPN组(P<0.05)。CEA、NSE、SCC和CYFRA21-1的ROC曲线下面积分别为0.633±0.045、0.494±0.047、0.664±0.042和0.711±0.041。4项指标联合检测对恶性SPN诊断的灵敏度和特异度分别为52.0%和76.0%。吸烟SPN患者中,良恶性SPN间CEA、NSE、SCC和CYFRA21-1的阳性率无明显差异。结论:血清CEA、SCC和CYFRA21-1在恶性SPN中阳性率增高,对于恶性SPN有一定的诊断价值。

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Sc id小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物(AE 3、p53)的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月,已传至80代以上,群体倍增时间为39.6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点,胞浆富含张力原纤维束,细胞间可见桥粒。Sc id小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型,染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物(AE 3、p53)呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系,可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。

肿瘤标记物用于卵巢癌早期诊断的研究进展

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,早期无明显临床症状,且缺乏有效的诊断方法,其病死率居于妇科肿瘤首位。基因组学、蛋白质组学和免疫学等方法已成为目前卵巢癌早期诊断研究的热点,以期找到高度敏感、特异的用于卵巢癌早期诊断的标记物。综述与卵巢癌相关的新的肿瘤标记物的研究进展。

血清肿瘤标记物联合检测辅助鉴别良恶性结肠疾病

目的血清癌胚抗原(CEA)、碱性磷酸酶(ALP)、CA125、CA19-9、CA72-4在结肠疾病鉴别诊断中的价值。方法应用Roche电化学发光免疫分析技术检测肿瘤标志物,全自动生化分析仪检测ALP,经病理学和影像学确诊的43例结肠息肉、88例结肠癌以及66例健康体检者入选本研究。结果在结肠癌组中,CEA、CA125、CA19-9、ALP水平均明显高于结肠息肉组和健康对照组(P<0.05),结肠癌组CA72-4与健康对照组比较有统计学差异(P<0.01)。单一CEA、CA125、CA19-9、CA72-4检测鉴别诊断结肠癌特异性均较好,但敏感性均较低分别为35%、7%、11%、14%;CEA、CA19-9、CA72-4三者联合检测具有较好的敏感性和特异性。结论 CEA、CA19-9、CA72-4的联合检测对结肠癌的诊断及疗效观察具有较大价值,可提高结肠癌诊断的敏感性和准确性。

胰腺癌肿瘤基因标记物的研究现况

手术切除是胰腺癌惟一治愈手段,然而,85%的胰腺癌患者在就诊时已属晚期或发生远处转移,手术切除率较低,故胰腺癌的早期诊断具有非常重要的意义。胰腺癌患者血清中含有较多的肿瘤标记物,临床应用较多的是CA19-9、CA242及癌胚抗原（CEA）等。然而,现阶段血清学肿瘤标记物由于灵敏度及特异性尚未尽如人意,故临床急需有效的联合检测以提高其早期诊断率,改善整体治疗效果。

胃癌血液肿瘤标记物研究进展

胃癌是常见消化系统恶性肿瘤,居全球恶性肿瘤死亡率的第2位。胃镜活检组织病理学检查是早期诊断胃癌最有效的手段,但因费用高、人群接受度较低而难以作为普查手段。血液肿瘤标记物检测具有操作简便、无创、便于动态监测等优点,因此易为受试者所接受。寻找高特异性和敏感性的胃癌血液肿瘤标记物,对实现高危预警、早期诊治、改善胃癌预后具有重要意义。本文就血液肿瘤标记物胃癌相关抗原MG7-Ag、M2-丙酮酸激酶(PK)、上皮细胞黏附分子(Ep-CAM)、CA72-4以及常用肿瘤标记物联合检测在胃癌早期诊断中的相关研究进展作一综述。

宫颈癌的分子生物学标志物研究进展

细胞学检查是诊断浸润性和浸润前子宫颈病变的金标准,确认新的肿瘤特异标志物是非创伤性检测早期癌症的首要目标之一,于是人们开始研究一些分子标志物在辨识这些病变中的有效性。本文概括了对HPV感染的特征标志,血清标志物,基因标志物及Apaf-1、COX-2等分子生物学标志物的一些新近研究结果。分子生物学标志物的研究虽有所发展,但其可用性仍待验证。联合应用为系统检查所设计的多个相关标志物及深入研究现有标志物及发展新的更具特异性的分子标志物将有较好发展前景。

肿瘤标记物在卵巢癌诊断中的研究进展

卵巢癌是女性生殖器官常见的三大恶性肿瘤之一,病死率居妇科恶性肿瘤首位,已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤。卵巢癌早期临床症状隐匿,70%的患者就诊时已是晚期,晚期卵巢癌患者5年生存率仅30%,而早期卵巢癌患者5年生存率则达90%。目前急需寻找特异度和敏感度高的肿瘤标记物用于卵巢癌的早期诊断,进一步提高生存率。糖链抗原,人附睾蛋白4(HE4),NECTIN4,溶血磷脂酸(LPA),酪氨酸激酶受体(trkA)和微小RNA(miRNA)在卵巢癌诊断中发挥了一定的作用,其中糖链抗原CA125临床应用最广。miRNA作为一种新的肿瘤标记物可以改善卵巢癌的诊断方法。

卵巢癌早期诊断的血清肿瘤标记物研究进展

卵巢癌是女性生殖系统中病死率最高的恶性肿瘤,由于缺乏早期有效的筛查手段,多数患者确诊时已为晚期,治愈率只有20%～30%,而早期患者的生存率较晚期患者高。因此,提高卵巢癌的早期诊断是改善患者生存质量的重要且有效的途径。目前临床上主要的筛查手段是经阴道超声检查联合血清肿瘤标记物的检测。除了糖类抗原125（CA125）广泛用于卵巢癌的诊断、检测和预后评估外,人附睾蛋白4（HE4）、骨桥蛋白（OPN）、间皮素（MSLN）和协同刺激分子B7-H4等生物学标记物也开始成为卵巢癌诊断的辅助或补充手段,以提高卵巢癌的早期检出率和诊断准确性。其中,OPN和B7-H4可作为卵巢癌诊断和靶基因治疗的理想指标和目的基因。检测患者尿液中可溶性MSLN相关蛋白（SMRP）和OPN的含量为卵巢癌的诊断提供了非侵袭性的方法。简要综述目前研究发现的与卵巢癌相关的血清学标记物。

糖尿病患者肿瘤标记物检测的意义

[目的]探讨糖尿病患者肿瘤标记物检测的意义.[方法]将1 241例2型糖尿病患者分成两组,A组为合并肿瘤组（n=14）,B组为无肿瘤组（n=1227）.检测两组患者的空腹血糖、餐后2 h血糖,糖化血红蛋白,糖类抗原CA125、CA153、CA199、CA242,甲胎球蛋白,癌胚抗原,肿瘤特异性生长因子、空腹胰岛素、空腹C肽、餐后2 h胰岛素、餐后2 h C肽,体重指数等指标.[结果]糖尿病患者中多种肿瘤标记物均可升高,任何2种标记物联合阳性在B组中仅为5.08%,而在A组中为55.56%,3种及3种标记物以上联合阳性率在A组中为37.5%,在B组中无3种以上标记物联合阳性,组间比较有显著性差异（P〈0.05）.[结论]糖尿病患者应尽早联合检测多种肿瘤标记物,3种或3种以上标记物联合阳性对合并肿瘤具有一定的预测价值.

临床常用肿瘤标记物升高对心力衰竭诊断价值的探讨

目的探讨临床常用肿瘤标记物升高在诊断心力衰竭的应用价值。方法选择2007年11月～2009年6月在我院住院年龄≥65岁的312例非肿瘤及肝硬化患者,根据是否有慢性心力衰竭分心力衰竭组(126例)和对照组(186例),采用电化学发光免疫法检测各项肿瘤标记物,采用logistic回归和累积logistic回归分析各指标的诊断价值。分析肿瘤标记物与心力衰竭诊断和严重程度的关系。结果心力衰竭组和对照组患者肿瘤标记物CA12-5和CA19-9差异显著。CA12-5对于心力衰竭诊断和严重程度的判断有临床意义(曲线下面积0.812,95% CI:0.753～0.871)。CA12-5与临床常用的N末端脑利钠肽前体存在相关性(Spearman's rho=0.478,P<0.01),工作特征曲线比较无显著差异,CA12-5在失代偿心力衰竭截断点(39 kU/L)时,敏感性、特异性等方面无显著差异。结论 CA12-5是反应心力衰竭严重程度较为有效的指标,两者结合可能会提供更为精确的信息。

消化系肿瘤干细胞标记物的研究进展

肿瘤干细胞假说从一个新的角度认识肿瘤．对消化系肿瘤千细胞进行全面地了解、鉴定和纯化可为消化系肿瘤的治疗带来新的方向．其中充分认识消化系肿瘤干细胞标记物是其基础．并可进一步证实肿瘤干细胞的存在以及选择有效的抗肿瘤靶向药物。本文就消化系肿瘤干细胞标记物的研究进展作一综述。

MALDI-TOF质谱技术筛选Ⅰ期肺鳞癌血清肿瘤标记物

目的:MALDI-TOF-MS技术筛选肺鳞癌特异性肿瘤标记物,以提高肺鳞癌早期诊断水平.方法:采集19例Ⅰ期肺鳞癌患者和19例年龄、性别、吸烟量等与之匹配的健康对照者血清,应用MALDI-TOF-MS技术结合MB-WCX蛋白芯片和AutoflexII-C质谱分析仪检测各血清标本,经计算机软件数据处理以筛选肺鳞癌血清差异蛋白质波峰.结果:与正常人比较发现肺鳞癌显著异常表达的潜在标记物3个,Mr分别为3261.69,3192.07和2556.92(P<0.01),并据此建立了肺鳞癌分子诊断模型.另采集22例肺鳞癌和19例健康者血清盲检验证该诊断模型具有95.5%的敏感性和94.7%的特异性.结论:MALDI-TOF质谱技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,不仅能直接筛选出肺鳞癌患者血清中相对特异的潜在肿瘤标记物,而且可能具有较好的临床应用前景,同时为临床寻找新的肺鳞癌血清肿瘤标记物提供理论依据.

缺氧相关蛋白碳酸酐酶-9在结直肠癌的表达及生物学意义

目的评价缺氧相关蛋白碳酸酐酶-9(CA-9)在结直肠癌中的表达及与临床病理指标的可能关系。方法采用免疫组织化学方法检测43例结直肠癌CA-9的表达,并评价它们与病理分级、临床分期、转移之间的关系。结果 43例结直肠癌组织CA-9表达阳性25例,阴性18例。CA-9的表达与结直肠癌肠壁浸润深度(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.040)、肿瘤病理分级(P=0.047)及临床分期(P=0.002)以及远处转移情况(P=0.035)密切相关。结论 CA-9在转移组中的阳性表达率高,提示可能是有效的预后因子。

腹水中肿瘤标记物在腹腔化疗前后的变化及意义

目的 研究腹腔化疗前后对腹水中肿瘤标记物端粒酶活性、甲胎蛋白 (AFP)、癌胚抗原 (CEA)、糖链抗原(CA19 9)的影响 ,探讨其作为腹腔化疗疗效及预后评价指标的可行性。方法 对 39例进展期消化道肿瘤伴腹腔转移及癌性腹水患者 ,在行腹腔化疗前后 ,采用端粒酶重复序列扩增 (TRAP ELISA)检测方法 ,检测腹水中端粒酶活性 ,采用免疫放射法检测AFP、CEA、CA19 9及常规脱落细胞检查 ,将每例腹水中上述肿瘤标记物读数在化疗前后进行自身对照 ,并进行分析和评价。结果 腹腔化疗后 ,化疗有效组 (部分缓解 +完全缓解 )人数为 5 3.9% (2 1/ 39) ,肿瘤指标下降人数分别为端粒酶活性 81.0 % (17/ 2 1)、AFP 38.1% (8/ 2 1)、CEA 5 2 .4 % (11/ 2 1)、CA19 94 7.6 % (10 / 2 1) ;化疗无效组 (无效 +进展 )人数为 4 6 .1% (18/ 39) ,肿瘤指标下降人数分别为端粒酶活性 2 2 .2 % (4 / 18)、AFP 11.1% (2 / 18)、CEA 11.1% (2 / 18)、CA19 95 .6 % (1/ 18) ,两组差异有统计学意义 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。腹腔化疗有效组和无效组6、12、18个月生存率分别为 76 .2 %、33.3%、14 .3%和 38.9%、2 7.8%、11.1%。当对化疗有效组和无效组在不同时期生存率分别进行 χ2 检验时 ,发现化疗有效组能有效提高 6个月生存率 (χ2