铜绿假单胞菌单PilZ结构域蛋白PA0012和PA4324突变体生物学表型的初步筛选

目的 本研究以铜绿假单胞菌单PilZ结构域的环二鸟苷酸受体蛋白PA0012和PA4324为研究对象,研究这2个蛋白对生物学表型的影响。方法 本研究首先利用同源重组的方法对编码PA0012和PA4324蛋白的基因进行了敲除,得到敲除突变体菌株ΔPA0012和ΔPA4324。然后,将实验分为3组,以野生型菌株PAO1为对照,用这2个突变体进行了表型筛选,包括群集运动能力、感染生菜的能力、对线虫的致病力和蛋白酶活性等,采用单因素方差分析对各组间的差异进行统计分析。随后对这2个突变体和野生型菌株进行了RNA测序,分析2个单PilZ结构域蛋白突变导致的基因差异表达,在转录水平上综合分析2个蛋白对生物学表型的影响。结果 本研究发现这2个单PilZ结构域蛋白的突变均能导致铜绿假单胞菌的群集运动增强,感染生菜的能力减弱,对线虫的毒性和蛋白酶活性的影响则无显著变化。RNA测序结果表明,这2个蛋白突变均可导致铜绿假单胞菌中大量基因的差异表达,且有一些共同的差异基因。结论 铜绿假单胞菌的PA0012和PA4324突变均能增强其群集运动和减轻其对生菜的感染,为后续机制研究奠定了基础。

非编码RNA靶向脂代谢重编程参与肝细胞癌恶性生物学表型

代谢重编程是肿瘤细胞的主要特征之一。脂质代谢重编程参与肝细胞癌(hepatocellular carci⁃noma,HCC)发病机制。非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)是具有有限的或没有编码蛋白质能力的一类功能性RNA。多种ncRNAs调控脂质代谢。本文首先总结了肝癌发生和发展过程中细胞内主要脂肪酸代谢途径的改变情况,进一步总结了ncRNA调控脂代谢异常参与HCC恶性生物学表型的研究进展。本文介绍临床ncRNAs通过调控脂质代谢影响HCC表型的进展,为临床靶向性肿瘤治疗提供新的策略。

TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织生物学表型特征及细胞周期特点分析

目的:研究TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织生物学表型特征及细胞周期分布特点。方法:H-E染色法观察正常饲养的TgN(p53mt-LMP1)/HTG4代5、11、15和18月龄阳性表达和阴性表达小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织生物学表型特征(主要是癌前病变率),流式细胞术测定其细胞周期分布特点。结果:5、11、15和18月龄阳性表达小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织的癌前病变率分别为0、50%、60%和75%,不同月龄阴性表达小鼠的癌前病变率均为0。与转基因阴性小鼠比较,转基因阳性小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织G0/G1期细胞数量减少,S期、G2/M期细胞数量增多,细胞增殖指数(PI)增高(P<0.01)。结论:随着年龄增长,TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔/鼻咽黏膜上皮组织癌前病变率增加,PI增高,表明鼻腔/鼻咽癌前病变转基因小鼠模型构建成功。

血管内皮生长因子的表达对人胃癌细胞生物学表型的影响

目的 探讨血管内皮生长因子对人胃癌细胞生物学表型的影响。方法 将 VEGF16 5正、反义 RNA表达载体导入人胃癌细胞 ,并观察其细胞周期、增殖、裸鼠致瘤生长等生物学指标。结果 与 VEGF正义转染细胞相比 ,在反义转染细胞的细胞周期中 G1期细胞数增加了 1 7.3% ,而S期细胞减少了 43.6 % ;正义转染细胞的克隆形成率明显高于反义转染细胞 ;正义转染细胞组的肿瘤生长速度及瘤体积明显高于其他组。结论 VEGF可以加强肿瘤组织血管生成 ;VEGF反义RNA可以防治肿瘤生长 ;

HIV-1中国流行株的生物学表型与V3环序列变异相关性初步研究

目的 分析我国HIV 1流行株的生物学表型及其与V3环序列变异的相关性。方法 采用传统的共培养方法从HIV 1感染者新鲜外周血单个核细胞 (PBMC)中分离病毒并在MT 2细胞上测定分离株的融合诱导性 ,用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST( 3)测定毒株的辅助受体利用情况 ,用巢式 聚合酶链反应 (nest PCR)扩增V3环及两侧区序列并对其序列进行测定 ,用GCG软件分析氨基酸序列。结果 在所分析的 5个原代毒株中 ,LTG0 2 13和LTG0 2 14为合胞体诱导型 (SI) ,利用CXCR4辅助受体 ;XJN0 0 2 1、XJN0 0 91和SHXDC0 0 4 1为非合胞体诱导型 (NSI) ,利用CCR5辅助受体。X4 /SI病毒和R5 /NSI病毒在V3环氨基酸序列方面 ,存在明显的区别。CCR5表型中国株第 8、11、18及第 2 5位氨基酸的共同基序为 :8 TXXS/GXXXXXXR/QXXXXXXE/D 2 5 ,CXCR4表型株在这些位置出现碱性氨基酸取代 (第 2 5位除外 ) ,引进正电荷。结论 HIV 1中国流行株的生物学表型与V3环序列变异密切相关 ,V3环上第 8、11、18及第 2 5位积累碱性氨基酸 (或由酸性氨基酸转变为中性氨基酸 ) ,可以使病毒由NSI/R5表型转变为SI/X4表型 。

我国分离的西尼罗病毒与乙脑病毒生物学表型的比较研究

我国于2011年在新疆维吾尔自治区自然界采集的蚊虫标本分离到西尼罗病毒(West Nile virus,WNV),这是我国首次在自然界蚊虫标本分离到该病毒,但是一直缺少对该病毒生物学特性研究的报道。本研究利用细胞培养和动物实验的方法研究了我国首次在蚊虫分离的WNV(XJ11129株)对不同细胞系和动物的致病性,以及通过中和试验测定了病毒滴度及其与乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株之间的交叉抗原特性。通过病毒感染细胞的超薄切片观察到XJ11129株WNV呈有包膜的球形颗粒,直径约为40～60nm;XJ11129株WNV对哺乳动物细胞(BHK-21和Vero)和蚊虫细胞(C6/36)细胞均可以引起细胞病变;接种BHK-21细胞显示WNV感染产生的蚀斑直径较JEV大;XJ11129株病毒接种C6/36细胞滴度可达108PFU/100μL;颅内接种2日龄乳鼠第2～3d即开始出现明显发病特征,第4d出现动物的肢体瘫痪并开始死亡,至第5d全部死亡。WNV和JEV的交叉中和试验结果显示,XJ11129株病毒对自身病毒株的中和抗体滴度可达1∶1 280,但对JEV的交叉中和抗体滴度仅有1∶10。综合以上结果提示,从我国新疆维吾尔自治区蚊虫分离的WNV XJ11129株对哺乳动物具有较强致病性,而目前尚无针对WNV感染有效的治疗方法和疫苗,因此,加强我国新疆维吾尔自治区WNV在人间传播的检测和监测具有重要意义。

HIV-1临床毒株的分离培养及生物学表型和基因型鉴定

目的从晚期艾滋病(AIDS)病人中分离培养艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)毒株,对其生物学表型和基因型进行鉴定,了解中国临床HIV-1毒株的生物学特征,以期探讨HIV-1生物学特征与疾病进展的关系。方法收集6例AIDS晚期病人的静脉全血,分离血浆和外周血单个核淋巴细胞(PBMCs);流式细胞仪检测CD4细胞,bDNA法检测病毒载量;PBMCs共培养法分离HIV-1毒株;终点稀释法滴定分离株的感染力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增分离株的env区;以MT-4细胞检测毒株的融合诱导性。结果6例病例中分离出3株能在PBMCs中连续稳定传代的HIV-1毒株,50%组织培养感染剂量(TCID50/ml)分别为6.3×103、10.2×103、2.51×103;3株毒株均为B亚型,均不能引起MT-4细胞病变。结论共分离出3株感染力相对较高、呈慢/高型复制动力学、M-嗜性、非融合诱导性的HIV-1 B亚型临床分离株。

骨愈合的生物学表型及其在骨不连治疗中的应用

骨愈合是一个复杂的、被精细调控的过程,涉及到炎性反应、血管新生、间充质干细胞分化、血管内皮细胞及骨相关细胞增殖、细胞自噬等生物学表型。从生物学表型的角度出发,结合患者的骨不连危险因素等个体化特点,能够以一种新的视角为骨不连治疗方式的合理选择提供参考。骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、runt相关转录因子2(RUNX2)及血管内皮生长因子(VEGF)等分子参与调控骨愈合的多种生物学表型,是骨不连治疗的重要靶点。掌握骨愈合的生物学表型及分子靶点,能够加深对骨不连治疗方案的机制认识,有助于基础研究向临床治疗的转化应用。为此,本文综述了骨不连常见治疗方式所对应的主要生物学表型,并分析了各表型中的重要分子机制。

香蕉枯萎病4号小种T-DNA插入突变体Focr4-1453表型特征及致病性分析

尖孢镰刀菌古巴转化型是引起香蕉枯萎病的主要病原菌,呈世界多态性分布,其致病机理尚不清楚。Focr4-1453为T-DNA插入突变体库中筛选出的一株与致病性相关的突变体。在克隆出其失活基因之后,将野生型菌株中的相同基因进行敲除和互补,得到敲除突变体ΔFoc4-1453和互补突变体ΔFoc4-1453-cp-1。对获得的3株突变体进行生物学表型研究发现,这些菌株的菌落生长速度、产孢能力以及孢子萌发率较野生型菌株明显降低,且无法透过玻璃纸进行生长。致病性测定试验表明,该基因失活会导致病原菌侵染能力显著减弱。

特应性皮炎的生物制剂靶向治疗

特应性皮炎(AD)是一种常见的慢性炎症性皮肤病,具有复杂的临床表型。研究发现,特应性皮炎患者的临床表型异质性,与内外源性、急慢性、种族、聚丝蛋白状态和年龄有关,这些异质性是由AD患者潜在的遗传背景和分子生物学内表型分类所决定的。AD的精准医疗是指明确患者内表型与临床表型之间的关系,制定个体化诊疗策略,实施生物制剂精准靶向治疗。

MLL-NRIP3融合基因诱发白血病的生物学特性研究

白血病是起源于造血干祖细胞的恶性增殖性肿瘤,是儿童时期最常见的恶性肿瘤,在成人恶性肿瘤中的发生比例也在逐渐上升,严重危害着人类健康与生存.MLL重排白血病(简称MLL-r)是其中一类具有独特生物学行为的白血病,MLL融合蛋白是影响预后的不良因素之一.MLL融合基因MLL-NRIP3(简称NRIP3)是近年来发现的新型MLL-r.有文献报道运用MLL-NRIP3融合基因可以建立白血病小鼠(Musmusculus)模型,并在白血病小鼠模型上研究其关联基因的敲降或过表达对白血病进程的影响,但未对其本身生物学特性进行单独研究.为了更加充分认识这一新的白血病类型,本研究将检测这类白血病的基本生物学表型,包括移植白血病细胞后受体小鼠生存期;白血病细胞迁移能力和黏附能力;白血病干细胞(LSCs)的比例、数目与功能;细胞周期和细胞凋亡等,并验证白血病复发、难治的关键细胞LSCs的表面标志是否同样适用于MLL-NRIP3白血病细胞.结果显示,与研究较为成熟的MLL-AF9(简称AF9)相比,MLL-NRIP3受体小鼠生存期较MLL-AF9延长,白血病细胞的迁移能力较MLL-AF9弱,黏附能力反较MLL-AF9强,而两者在细胞周期和细胞凋亡方面的生物学特性基本一致.体外克隆形成实验和极限稀释实验提示MLL-NRIP3白血病LSC数目、比例及功能较MLL-AF9白血病LSC降低.由此可得出结论:MLL-NRIP3诱发的白血病小鼠模型是低LSCs富集型MLL-r.

禾谷镰孢FgCYP51B蛋白F511L突变对分生孢子产量及其对烯唑醇敏感性的影响

Phe511是禾谷镰孢甾醇-14α-脱甲基酶FgCYP51B活性口袋中的一个重要氨基酸。本研究中,我们探究了FgCYP51B蛋白中该位点突变后对禾谷镰孢主要生物学表型的影响,并通过分子对接探讨了可能的原因。结果表明禾谷镰孢FgCYP51B-F511L突变体在菌落形态、生长速率等表型上与野生型菌株PH-1没有明显差异。但是F511L突变导致分生孢子的产量严重降低,对烯唑醇的敏感性增强。分子对接发现突变后亮氨酸的长侧链使得烯唑醇的甲基发生扭转,侧链朝向发生改变,更有利于与蛋白受体形成较强的疏水作用,这可能是导致FgCYP51B-F511L突变体对烯唑醇敏感性增强的原因。

RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响

目的 观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法 构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论 敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.

中国HIV-1B/C重组病毒的gag-pol区基因序列特征分析

目的 对 6株中国人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)B/C重组病毒的完整 gag基因和部分pol基因进行序列分析 ,从基因水平上分析是否存在新模式的B/C重组病毒并与其母本毒株进行比较研究 ,尝试对其不同的生物学表型进行解释。方法 从确诊的HIV感染者的全血样本中 ,提取样本基因组DNA ,经套式聚合酶链反应 (PCR)扩增后 ,将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析。用Simplot软件进行序列重组分析并确定重组断点区域 ;用MEGA软件按断点分段做基因进化树分析以验证该断点的正确性 ;用GCG软件包的Distance程序计算基因距离。并分析所研究的HIV 1B/C重组毒株长 2 5 5 0bp基因区段的分区段的基因离散率及基因重组对其功能可能造成的影响。结果 新疆 5份样本均未发现重组断点的变化 ,而重庆 1份样本的逆转录酶区内的B/C断点发生了 16 0个核苷酸的移动。氨基酸序列分析显示 ,我国流行的B/C重组株与其母本B、C毒株之间发生第 2 86位 (R→K/N)和第 799位 (A→T)的变化。结论 我国现在流行的HIV 1B/C重组病毒仍以CRF0 7 BC和CRF0 8 BC两种模式为主 ,在本研究涉及的基因区内尚未发现新模式重组毒株的流行。初步分析表明我国B/C重组毒株 2 86位和 799位氨基酸的变异可能为B/C重组株在我?

32例有偿献血感染者HIV-1膜区序列测定及V3环氨基酸变异特点分析

目的了解我国有偿献血人群中HIV-1B’亚型流行株的膜蛋白v3环序列特征。方法巢式PCR扩增前病毒DNAc2-c3区后测序，进行病毒亚型鉴定和V3环序列特点分析。结果所检的32个HIV-1B’亚型株v3环顶端四肽有五种形式。AIDS组与无症状感染组相比前者呈现更多的T/SI型毒株V3环变异特点。结论我国有偿献血人群中HIV-1B’亚型流行株V3环顶端四肽有多种形式。处于病程不同时期的患者体内病毒V3区呈现不同的氨基酸变异特点和电荷积累趋势，提示可能具有不同的生物学表型特征。

NDUFS3在肿瘤发生发展中的作用及其机制

NADH脱氢酶[泛醌]铁硫蛋白3(NADH dehydrogenase [ubiquinone] ferrithionein 3, NDUFS3)是线粒体复合体Ⅰ的核心亚基,直接参与呼吸链的电子传递的过程,在人类各组织器官中的表达水平高低不一。NDUFS3参与肿瘤的发生发展,与细胞活性氧ROS(reactive oxygen species)水平,三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate, ATP)生成以及Warburg效应密切相关。本文综述了NDUFS3在肿瘤中的作用及其可能分子机制的研究进展。