生物修饰ePTFE促进内皮化的研究

目的在膨体聚四氟乙烯表面构建肝素/胶原蛋白-REDV选择性活性界面，体外观察ePTFE表面早期内皮细胞（ECs）粘附情况和后期内皮细胞增殖及内皮化程度。方法通过层层自组装技术，在0.1 mm ePTFE膜片表面制备5层肝素和胶原蛋白复合涂层[（HEP/COL）5]，随后接枝特异性吸附内皮细胞和内皮祖细胞的REDV多肽和无活性的REVD多肽。将未修饰的ePTFE（ePTFE组）、（HEP/COL）5修饰的ePTFE[（HEP/COL）5组]、（HEP/COL）5-REDV修饰的ePTFE（REDV组）和（HEP/COL）5-REVD修饰的ePTFE（REVD组）与脐静脉内皮细胞（HUVECs）共培养1～6 h，荧光显微镜下观察4组ePTFE表面早期内皮细胞粘附情况。6 h后将ePTFE膜片转移至新的培养皿，培养24～72 h，进一步评估ePTFE表面细胞增殖情况和内皮化程度。并用CKK-8法检测不同时间点4组ePTFE表面覆盖的内皮细胞活性。结果细胞贴壁时期，共培养1 h和6 h时，REDV组ePTFE表面覆盖的内皮细胞较其他组多；共培养6 h时REDV组细胞活性最高（OD＝0.358），组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。细胞增殖时期，修饰过的3组ePTFE表面覆盖的内皮细胞数量均较未修饰的ePTFE表面细胞明显增多，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。修饰过的3组ePTFE的细胞活性较未修饰的ePTFE组明显增高，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）；且与其他3组比较，REDV组表面的内皮细胞数量和内皮细胞活性最高，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。从细胞分布来看，（HEP/COL）5-REDV分布最均匀，培养72 h时，该组表面内皮细胞覆盖率高达95%。结论在0.1 mm ePTFE表面构建（HEP/COL）5-REDV选择性活性界面方法可行，可以促进内皮细胞粘附及细胞增殖，有望在植入体内的ePTFE表面建立内皮细胞屏障，克服血栓形成、内膜增生、材料衰败等缺点。