生物活性追踪法对丁香抗低密度脂蛋白氧化修饰的研究

丁香为桃金娘科植物丁香的干燥花蕾。实验室前期经筛选发现,丁香在国家公布的87种药食两用物品原料中抗氧化活性最强。为了在此基础上进一步探索丁香抗低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)氧化修饰作用,本文采用生物活性追踪及硫酸铜诱导法,对丁香抗LDL氧化修饰作用进行了研究。结果表明,反应体系中硫酸铜和LDL浓度分别采用3 mmol/L和4 mg/mL合适。丁香粗提物及其乙酸乙酯相、正丁醇相与水相三个极性部位对LDL氧化均具有相应的抑制能力。在不同极性部位中乙酸乙酯相抑制率最高(85.29±0.02)%,为有效部位。该有效部位对LDL抑制呈现良好的量效关系,且对已被氧化修饰的LDL也存在抑制能力。薄层色谱分析发现有效部位主要由8种成分组成。实验证明丁香具有很强的LDL氧化修饰抑制能力,为后续研发抗动脉粥样硬化功能食品打下了基础。

应用生物活性追踪法对香椿抗氧化活性的研究

采用生物活性追踪法,将香椿老叶甲醇提取物划分为4个不同极性部位,通过测定其总还原力、1,1-二苯基-2-苦基-肼(DPPH)自由基清除能力和三价铁还原抗氧化能力(FRAP)测试值,确定香椿老叶提取物抗氧化活性及其组成。结果表明:香椿老叶提取物中的强抗氧化活性物质主要集中在乙酸乙酯部位,该部位的总还原力相当于467.53mg/g Vc的总还原值,FRAP值相当于10578μmol/g硫酸亚铁的FRAP值,质量浓度50mg/L的DPPH自由基清除率为92.84%,均比同浓度的2,4-二叔丁基甲基苯酚(BHT)强。相关性研究表明,香椿老叶提取物的抗氧化活性主要在于其含有较高的黄酮类化合物所致。TLC和HPLC分析表明:香椿老叶提取物强抗氧化活性物质主要由4个黄酮-糖苷类化合物组成。

丁香活性物质提取工艺优化与抗氧化活性研究

对丁香抗氧化活性物质提取工艺及其抗氧化活性进行了研究。结果表明,最佳提取工艺条件为:60%乙醇、提取温度60℃、料液比1∶20和提取时间40 min;在此工艺条件下抗氧化活性物质提取率为(10 480.4±40.3)μmol/g,获得的相应丁香粗提物具有较强的抗氧化活性,总还原力弱于相同质量浓度的阳性对照BHT和VC(P<0.01或P<0.001),FRAP法抗氧化能力和DPPH自由基清除能力弱于相同质量浓度的VC,强于相同质量浓度的BHT(P<0.05、P<0.01或P<0.001);通过生物活性追踪发现丁香抗氧化活性物质主要存在于其弱极性的乙酸乙酯部分,该部分100μg/mL质量浓度样液的总还原力达0.634±0.040,FRAP法抗氧化能力达0.433±0.005,DPPH自由基清除率达(85.294±0.499)%;相关关系表明丁香抗氧化活性的主要物质基础为总多酚和总黄酮。

诃子抗氧化活性物质提取工艺与抗氧化活性研究

对诃子抗氧化活性物质提取工艺、抗氧化活性及其初步物质基础进行了研究。结果表明,最佳提取工艺为:乙醇体积分数50%、液料比20、提取温度60℃、提取次数4次、提取时间7 m in;总还原力、FRAP法抗氧化能力和DPPH自由基清除能力的结果均显示诃子粗提物具有很强的抗氧化活性。生物活性追踪结果发现,诃子抗氧化活性物质主要由存在于乙酸乙酯相的弱极性化合物组成,该相质量浓度为25、50μg/mL样品的总还原力OD700值分别为0.197±0.002和0.380±0.006,FRAP法抗氧化能力OD593分别为0.272±0.023和0.631±0.002,DPPH自由基清除率分别为(86.838±0.600)%和(90.318±0.917)%。相关关系表明,诃子抗氧化活性的主要物质基础为总黄酮和总多酚。

荷叶活性物质提取工艺与抗氧化活性研究

对荷叶活性物质提取工艺与抗氧化活性进行了研究。结果表明,荷叶抗氧化活性物质最佳提取工艺为提取时间50 min、提取温度80℃、乙醇体积分数60%和料液比1∶20;采用生物活性追踪法研究发现,在极性依次增大的正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水相4个极性萃取组分中,乙酸乙酯萃取组分抗氧化活性(总还原力、FRAP法抗氧化能力和DPPH自由基清除能力)最强并具有显著性差异(P<0.001或P<0.01);通过验证试验发现该组分抗氧化能力(OD593和DPPH自由基清除率)均显著高于阳性对照BHT和GBE(P<0.05)。

海蛾活性部位抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡作用研究

目的从中药材海蛾中分离具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖活性的组分,并探讨其诱导凋亡的机制。方法采用生物活性追踪法对海蛾乙醇浸提物进行硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析分离抗肿瘤活性组分;采用MTT法评价其对肿瘤细胞的抑制作用;采用AO/EB、PI及Annexin V-FITC/PI荧光染色流式细胞术分析其诱导凋亡作用;通过分析肿瘤细胞中caspase-3活性及凋亡相关基因的蛋白表达水平,探讨其诱导凋亡的可能机制。结果从海蛾中分离得到了具有较高HeLa细胞抑制活性的组分C22,得率为0.73‰,IC50为36.3 mg·L-1;组分C22作用于HeLa细胞后,可致细胞处于亚二倍期的比例增加、磷脂酰丝氨酸外翻等典型细胞凋亡现象,且具有剂量依赖性;组分C22可下调HeLa细胞Bcl-2的表达,降低胞内Bcl-2/Bax比例,增加caspase-3酶活性。结论海蛾活性组分C22能诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能是通过线粒体途径的Bcl-2/caspase通路发挥作用。

乌桕叶提取物抑菌活性研究

采用生物活性追踪法,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus G+)为供试菌,对乌桕(Sapium sebiferum)叶提取物的抑菌活性进行探讨。结果表明:乌桕叶不同溶剂的提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性有很大区别,乙醇提取物的抑菌活性最强;进一步的研究表明:乌桕叶乙醇提取物之乙酸乙酯可溶部抑菌活性最强,乙酸乙酯可溶部经柱层析分离,所得流分皆无明显抑菌活性,各成分间存在协同作用。

丁香不同极性部位抑制低密度脂蛋白脂质氧化修饰的研究

为研究丁香提取物对LDL中脂质氧化修饰的抑制作用,采用生物活性追踪法对该提取物抑制LDL弱氧化及完全氧化过程中共轭二烯(CD)产生、总胆固醇降解及脂褐素产生的效果进行了测定。结果表明,在LDL弱氧化过程中,丁香不同极性部位对CD产生、总胆固醇降解均有显著抑制作用(p<0.05),抑制作用强弱顺序为正己烷相>乙酸乙酯相>正丁醇相>水相。在LDL完全氧化过程中,不同极性部位对CD产生、总胆固醇降解及脂褐素产生均有显著抑制作用(p<0.05),抑制作用强弱顺序与上述相同。总多酚、总黄酮含量高低是各极性相对LDL脂质氧化修饰抑制效果产生差异的原因。本文为后续研发丁香抑制LDL氧化功能食品提供参考。

白骨壤提取物抑菌活性研究

以白骨壤叶为原料,以4种常见病原菌为供试菌种,采用生物活性追踪法研究了白骨壤叶提取物的抑菌活性。利用滤纸片扩散法对白骨壤叶不同溶剂提取物进行初步抑菌试验,确定出抑菌活性成分所在部位,并对有效部位的有效成分进行纯化、定性检测和抑菌试验。结果表明,95%乙醇提取液对4种病原菌都有较强的抑菌效果,石油醚稍有抑菌作用,水提液无抑菌作用。利用大孔吸附树脂对抑菌活性较强的乙醇提取液进行进一步分离,得到2个抑菌活性组分,它们对4种试验菌的抑菌效果与浓度呈正相关关系。纯化物对4种供试菌的抑菌大小顺序为大肠杆菌>根霉>枯草芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌,初步的定性试验结果表明,有抑菌活性的纯化物中含有生物碱、黄酮、蒽醌等。