高效液相色谱法同时检测茶叶提取物中9种儿茶素类和3种生物碱类化合物

建立了以Kromasil 100-5-C_(18)为分析柱,甲醇与0.01%(体积分数)磷酸水为流动相梯度洗脱的高效液相色谱方法,同时定量检测茶叶提取物中的9种儿茶素类和3种生物碱类化合物。结果显示,在一定的质量浓度范围内,12种化合物的峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,方法定量限为2.5~25 mg/L,回收率为94%~103%,相对标准偏差(RSD)≤2.7%。方法精密度好、准确度高,分析时间短,检测效率高,可以作为研究茶叶提取物的可靠方法,也可推广用于茶原料的产品质控。

盐析辅助液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定糕点中14种生物碱

目的建立一种应用盐析辅助液液萃取前处理技术结合超高效液相色谱-串联质谱法快速测定糕点中14种常见有毒生物碱的分析方法。方法样品加水超声处理后,在碱性条件下(pH=11),用乙腈提取,加入氯化钠盐析分层。取乙腈相氮吹至干后用40%甲醇水溶液复溶,使用0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸铵的水溶液和乙腈为流动相,在C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.5μm)上通过梯度洗脱实现目标物分离,在串联质谱正离子多反应监测模式下进行检测,溶剂标准曲线外标法定量。结果14种生物碱在0.5~100.0 ng/mL的范围内具有良好的线性关系,相关系数均≥0.999,检出限和定量限范围分别为0.1~2.2μg/kg和0.3~7.1μg/kg。在8.00、50.00和200.00μg/kg的加标浓度下,14种生物碱的平均回收率为76.3%~105.7%,相对标准偏差为1.2%~9.8%(n=6)。结论本方法简单、快速、准确,能满足糕点中14种生物碱的快速筛查和定量分析,可用于疑似生物碱中毒的应急事件处理。

QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱法检测甘草中吡咯里西啶生物碱与风险分析

目的建立QuEChERS和高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定甘草中吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)的方法。方法甘草样品经0.05mol/L硫酸水QuEChERS自动样品制备系统振荡提取后,用混合型阳离子交换固相萃取小柱(PCX SPE)进行净化,以5 mmol/L甲酸铵水(含0.1%甲酸)-5 mmol/L甲酸铵甲醇为流动相,Agilent Proshell 120EC-C18柱进行分离,利用三重四极杆检测器在多反应监测模式下进行检测。结果利用建立的前处理方法对甘草中34种PAs做添加回收实验,在10、20和50μg/kg 3个浓度下的回收率为71.3%~112.0%,相对标准偏差为0.29%~8.18%,满足检测要求。利用建立的提取和检测方法对172个甘草样品中34种PAs进行监测,阳性样品检出率为22.1%,PAs总含量在9.5~118.0μg/kg之间。其中石松胺、石松胺N-氧化物、天芥菜碱和大尾摇碱N-氧化物的检出率最高。结论本研究开发的甘草中PAs的提取和检测方法快速、准确,可同时测定甘草中34种PAs阳性。所有监测的甘草样品中PAs总量低于欧盟限量标准。

高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱的源内裂解-多级质谱法解析干燥恰特草中卡西酮类生物碱成分

本研究基于高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)的源内裂解-多级质谱法,发现并解析了恰特草中未知卡西酮类生物碱成分。将恰特草粉碎后,采用0.05 mol/L HCl水溶液提取,二氯甲烷、NaOH水溶液净化,ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl色谱柱(3.0 mm×100 mm×1.8μm)以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱。在一级质谱全扫描模式下,通过卡西酮类生物碱的源内裂解特征实现未知卡西酮类生物碱成分的筛查;在目标离子采集模式下,基于未知卡西酮类生物碱成分的多级质谱裂解规律推测其分子结构。结果表明,该方法可实现恰特草中未知生物碱成分的筛查和解析,共识别出甲卡西酮、乙卡西酮和2-氨基-1-苯基-1-丁酮等3种卡西酮类生物碱成分,并采用标准物质对甲卡西酮和乙卡西酮进行确证,但由于缺乏相应的标准物质,2-氨基-1-苯基-1-丁酮有待进一步确证。本工作为恰特草中精神活性成分的进一步研究提供指引,为其他领域未知化合物的解析提供参考。

高效液相色谱-串联质谱法测定精油类化妆品中生物碱研究

采用LC-MS/MS(高效液相色谱-串联质谱)技术,对挥发油化妆品中31种生物碱进行了分析。在HPH-C18柱层析中,用含2%甲酸的甲醇-水溶液(体积比3∶1)为萃取液,用0.2%的甲酸水(流动相A)、乙腈(流动相B)进行梯度洗脱,洗脱流速控制为0.35 mL/min,进样量为5μL,通过电喷雾正离子模式进行多反应监测分析。研究结果表明,精油类化妆品中31种生物碱在质量浓度范围内的线性关系均较为良好,前处理方式简便高效,可有效测定精油类化妆品中31种生物碱,保障化妆品的安全性评价效果。

高效液相色谱法测定达原饮中槟榔生物碱的含量

目的:采用高效液相色谱法测定达原饮中槟榔生物碱的含量。方法:色谱条件为:Venusil SCX色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm,300Å),流动相:甲醇:0.2%磷酸(氨水调节pH值至3.8)=60:40,检测波长:210 nm,柱温:30℃,流速:1.0 mL•min^(-1)。结果:4种槟榔生物碱分离度良好,各组分在浓度范围内线性关系良好,加标回收率(n=9)在98.37%~102.11%,RSD值均小于2%。达原饮药液中去甲槟榔碱、槟榔碱、去甲槟榔次碱和槟榔次碱的含量分别为0.014 mg•mL^(-1)、0.046 mg•mL^(-1)、0.036 mg•mL^(-1)和0.018 mg•mL^(-1)。结论:该方法准确度高、稳定性强、灵敏度和重复性良好,简便可靠,可用于达原饮中槟榔生物碱的含量测定及质量控制。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

基于反相高效液相色谱法的面团黏性与小麦醇溶蛋白组成关系研究

以74份不同黏性等级的小麦品种(系)为研究材料,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离不同黏性小麦品种的醇溶蛋白特征图谱,并进行面团黏性、醇溶蛋白组分含量与小麦面粉品质性状的相关性分析,以期建立采用少样本量快速准确识别面团黏性的方法。结果表明,经RP-HPLC分离后,ω-、α/β-和γ-醇溶蛋白3个组分在图谱上清晰可见;不同黏性等级小麦材料的醇溶蛋白得到了不同的特征图谱,黏性较大的小麦ω-醇溶蛋白的组分峰数较多,总峰面积较大;ω-醇溶蛋白在不同黏性等级小麦材料间存在显著差异。相关性分析结果表明,面团黏性与ω-醇溶蛋白相对含量呈极显著正相关,与α/β-和γ-醇溶蛋白相对含量相关性不显著;ω-醇溶蛋白相对含量与沉淀值、形成时间、稳定时间、能量、拉伸阻力和最大拉伸阻力均呈极显著负相关,与蛋白质、湿面筋含量均呈显著正相关,与弱化度呈极显著正相关;ɑ/β-醇溶蛋白相对含量与蛋白质、湿面筋含量均呈极显著正相关;γ-醇溶蛋白相对含量与小麦各品质性状均无显著相关性。可见,面团黏性主要与ω-醇溶蛋白相对含量有关,ω-醇溶蛋白对面团质量有弱化作用。

高效液相色谱法测定菜用大豆鲜籽粒VC含量

为建立菜用大豆鲜籽粒VC含量的高效液相色谱测定方法,采用30 g/L偏磷酸溶液低温提取样品后,进行高效液相色谱分析,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm×5μm),流动相为1 g/L偏磷酸溶液∶甲醇=96∶4(V/V),流速0.8 mL/min,检测波长243 nm,柱温25℃,以保留时间定性,外标法定量。结果表明:VC质量浓度范围为2~40μg/mL时,其与峰面积呈良好的线性关系(R2=1.000),平均加标回收率为108.14%,相对标准偏差为1.70%。所建立的方法操作简便,灵敏度高,分离度好,结果准确,重复性也比较好,适用于测定菜用大豆鲜籽粒VC含量,为优质菜用大豆的选育和生产提供技术支持。

高效液相色谱法测定诃子中诃黎勒酸和诃子酸

建立高效液相色谱法测定诃子中诃黎勒酸、诃子酸含量的方法,对《中华人民共和国药典》2020年版一部中诃子含量测定项进行补充。采用Dikma Platisil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,柱温为35℃,以0.1%甲酸水溶液-乙腈-甲醇(体积比为78∶16∶6)作为流动相等度洗脱,流量为1 mL/min,进样体积为5μL,检测波长为280 nm。诃黎勒酸、诃子酸的质量分别在0.03203~1.025μg、0.03555~1.137μg范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.9996、0.9995,方法检出限分别为2.67、4.44 ng,定量限分别为8.00、11.85 ng。测定值的相对标准偏差分别为1.9%、1.8%(n=6),样品加标平均回收率分别为99.0%、99.2%。该方法可用于诃子药材的质量控制方法。

高效液相色谱法同时测定果蔬中有机酸和维生素C含量

采用1%草酸(含10%甲醇)溶液提取果蔬的有机酸(酒石酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸、反丁烯二酸)和维生素C,色谱柱为InertSustain C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为0.1%磷酸水溶液,流动相B为甲醇,梯度洗脱,进样体积为20μL,柱温为30℃,流速为0.8 mL/min,在210 nm和254 nm波长处分别检测5种有机酸和维生素C的含量。结果表明,该方法在标准曲线范围内线性关系良好,相关系数(R^(2))均大于0.9990,检出限为0.01~0.90μg/mL,定量限为0.15~5.00μg/mL,方法的相对标准偏差为2.40%~3.75%,回收率在86.4%~115.2%;该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好、效率高等优点,可用于果蔬中有机酸和维生素C的含量测定。

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定果蔬中4种有机磷类农药的残留量

以4种目标物丙溴磷、毒死蜱、二嗪磷、辛硫磷的混合物作为模板分子,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂、甲基丙烯酸为功能单体,通过水热聚合法制备分子印迹聚合物(MIPs),将MIPs填充在聚丙烯空柱中制备MIPs固相萃取(MIPs-SPE)柱。将果蔬样品洗净、晾干、粉碎后,分取5.00 g,加入2 g无水硫酸钠,研磨均匀。加入30 mL乙腈,超声1.5 h,离心10 min。分取1 mL上清液过活化好的MIPs-SPE柱,用4 mL正己烷淋洗,6 mL体积比9∶1的甲醇-乙酸混合溶液洗脱。收集洗脱液,于35℃氮气吹干,用1 mL乙腈定容,用高效液相色谱法分析。结果显示:MIPs可特异性识别4种目标物,对目标物的吸附量约非分子印迹聚合物(NIPs)的2.5倍,对硫磷、马拉硫磷、甲拌磷、甲基毒死蜱的吸附量显著低于目标物的;经MIPs-SPE柱净化后,样品大部分基质成分被去除,目标物测定无干扰。4种目标物的浓度在0.005~2.0μmol·L^(−1)内和对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.0015~0.0040μmol·L^(−1);在0.01,0.5,1.0,2.0 mg·kg^(−1)加标浓度水平下,4种目标物的回收率为85.9%~102%,测定值的相对标准偏差(n=5)为3.0%~7.1%。方法用于4种果蔬样品的分析,在草莓样品中检出了丙溴磷(检出量为0.07 mg·kg^(−1)),甘蓝样品中检出了辛硫磷(检出量为0.05 mg·kg^(−1)),其他样品中均未检出这4种目标物。

滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的高效液相色谱法测定

目的建立一种快速、准确测定滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的高效液相色谱法。方法采用乙腈萃取-超声-离心的方法提取滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖;SB-C18色谱柱分离,乙腈(10 mmol/L)∶戊烷磺酸钠(10∶90)做流动相,柱温常温,流速0.8 mL/min,检测波长192 nm。结果该方法在0.5~2.5 mg/mL浓度范围内具有良好的线性关系(r>0.999);滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖检出限为0.11 mg/mL;定量限为0.23 mg/mL;回收率为88.7%~95.4%。结论该方法简便、快速、灵敏,是一种检测滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的优良方法。

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片中硫脲

建立高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片中硫脲的含量。样品用流动相提取后,用Shim-pack GIST C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以磷酸盐缓冲液-甲醇(体积比为90∶10)为流动相,等度洗脱,流量为0.5 mL/min,柱温为40℃,检测波长为236 nm,进样体积为10μL。硫脲的质量浓度在0.102~10.205μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.999 9,方法检出限为3.4μg/g,定量限为8.5μg/g。测定结果的相对标准偏差为0.8%(n=6),加标平均回收率为99.3%。该方法处理简便,检测高效,灵敏度高。

高效液相色谱法测定化妆品中白藜芦醇

建立高效液相色谱法测定化妆品中白藜芦醇,并用质谱确证。样品经甲醇涡旋超声提取、离心后,通过Merck Discovery■HS C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,采用甲醇-0.05%磷酸水溶液(体积比为40∶60)为流动相,等度洗脱,流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长306 nm,进样量为10μL,采用负离子多反应监测模式进行质谱确证。白藜芦醇在质量浓度1.0~100μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9998,检出限和定量限分别为3.0和10.0 mg/kg,在膏霜、油和水三种不同基质中测定值的相对标准偏差均小于5.0%(n=10),加标平均回收率为87.1%~96.6%。该方法样品处理简便,稳定性较好,定量结果准确,适用于化妆品中白藜芦醇的高效测定。

柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中16种氨基酸的含量

提出了2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中甘氨酸、亮氨酸、组氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、异亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸等16种氨基酸含量的方法。取化妆品样品5 g置于50 mL离心管中,加入5 mL水,超声10 min,加热煮沸15 min,冷却后加入15 mL 35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液,以转速10500 r·min^(−1)离心20 min。取全部上清液,用35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液定容至25 mL。取1 mL样品溶液,加入0.5 mol·L^(−1)碳酸氢钠溶液(pH 9.0)1 mL和1%(体积分数)DNFB衍生溶液1 mL,混匀,于60℃加热10 min,冷却后用0.01 mol·L^(−1)磷酸二氢钾溶液(pH 7.0)定容至5 mL,所得溶液中16种氨基酸经X Bridge C_(18)色谱柱分离,以不同体积比的含1%(体积分数)N,N-二甲基甲酰胺的0.05 mol·L^(−1)乙酸钠缓冲液(pH 6.5)-体积比1∶1的乙腈-水混合溶液为流动相进行梯度洗脱,在360 nm处检测。结果表明:16种氨基酸标准曲线的线性范围均为0.004~40.0 mg·L^(−1),检出限(3S/N)为0.1~0.2 mg·kg^(−1);对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为89.0%~105%,测定值的相对标准偏差(n=7)均不大于10%。方法用于11种市售化妆品分析,检出的氨基酸成分多为组氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸。

柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

高效液相色谱法测定川贝母和川贝粉中三嗪代谢物残留

目的建立了一种快速固相萃取联合高效液相色谱法同时测定川贝母和川贝粉中3种三嗪代谢物残留量的分析方法。方法采用分散固相萃取前处理方法,样品经乙腈-水提取,无水硫酸镁和醋酸钠等无机盐盐析分离,十八烷基硅烷键合硅胶C18净化处理,以Athena C18柱为色谱柱,以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果通过合理选择色谱柱、流动相和净化剂,在最佳色谱条件下,脱异丙基莠去津、脱乙基莠去津和脱乙基特丁津等3种三嗪代谢物的检出限为0.20μg/kg,定量限为0.67μg/kg,3种目标组分在0.01~20.00μg/mL的线性范围内线性关系良好(r≥0.999),在5、25和50μg/kg 3个添加水平内,平均加标回收率为95.3%~105.7%,相对标准偏差为1.0%~2.4%。结论该方法简单、快速、灵敏,适用于川贝类中药材中三嗪类农药代谢物残留量的快速检测分析。

高效液相色谱法测定化妆品中海藻糖的含量

通过对影响海藻糖测定条件(流动相、色谱柱、提取溶剂、超声时间)的研究,建立了高效液相色谱法快速测定化妆品中海藻糖含量的分析方法。化妆品中海藻糖经体积比1∶9的乙腈水溶液超声提取20 min后,使用体积比3∶1的乙腈-水(含体积分数0.2%三乙胺)溶液作为流动相等度洗脱,用Waters Xbrige-NH2氨基柱(250 mm×4.6mm×5μm)进行分离检测化妆品中海藻糖。该方法的线性范围为0.1~5 mg/mL,检出限为0.33 g/kg,定量限为1.0g/kg,加标回收率为92.4%~106%,相对标准偏差<5%。

全自动固相萃取—高效液相色谱法测定现制饮料中7种合成着色剂

目的:建立一种全自动固相萃取—高效液相色谱双波长法测定现制饮料中7种合成着色剂的方法。方法:样品经纯水提取2次,离心后,合并上清液,调节pH至3~4。利用全自动固相萃取装置活化Poly-sery色素专用固相萃取小柱,并上样、淋洗、洗脱。洗脱液氮吹浓缩至200μL,用50%流动相A+50%流动相B混合液定容至1.0 mL。色谱柱采用C 18柱,流动相为20 mmol/L乙酸铵—甲醇,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,进样量10μL,检测波长254,628 nm。结果:各物质在0.5~50.0μg/mL范围内相关系数均大于0.9999,方法检出限为0.023~0.179 mg/kg,定量限为0.078~0.598 mg/kg,加标回收率为92.4%~96.8%,相对标准偏差(RSD)为1.2%~4.2%。结论:该方法试剂使用量小,操作步骤简便,自动化程度高,回收率高,重复性好,适合于批量样品测定。