生物素-亲合素预定位技术在肿瘤磁共振免疫成像中的初步应用研究

目的 :探讨生物 亲合素预定位技术提高肿瘤磁共振免疫成像诊断效果的可能性。材料和方法 :制备生物素化抗CEA单克隆抗体 (Bt McAb)、Gd标记生物素 (Gd DTPA Bt)和Gd DTPA McAb复合物 ;建立 8只荷人结肠癌裸鼠模型 ;实验组 (n =4)分别注射Bt McAb→链霉亲和素→Gd DTPA Bt预定位于裸鼠瘤结 ,观测注射前、注射后 3 0min、1、2、6、12、2 4和75h瘤结的信号变化 ;对照组分别注射Gd DTPA McAb或Gd DTPA(n分别为 2 ) ,在同样时间点成像。结果 :预定位技术法特异性提高了瘤结的增强程度 ,增强持续 2 4小时 ,增强程度高于Gd DTPA McAb组 ,与Gd DTPA的速升速降增强形式也不同。结论 :生物素 (链霉 )

游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。

抗风疹病毒IgM类抗体生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法的建立与性能评价

目的建立抗风疹病毒IgM类抗体(RV IgM)生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法(BA Mac TrFIA)并评价其分析性能。方法用鼠抗人μ链单克隆抗体(抗-μMcAb)作为包被抗体,生物素化RV重组抗原为桥接抗原,链霉亲合素标记铕作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,测定抗RV IgM抗体,并对其检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、试剂热稳定性进行评价,与同类方法学比对检测1 020例样本,比对实验的一致性分析采用Kappa检验。结果本方法检测国家检测限参考品L1、L2和L3的结果均为阳性反应(S/CO≥1.00),批内变异系数(CV)<15.00%,国家阴性参考品符合率为10/10,国家阳性参考品符合率为5/5;本方法的试剂盒于37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变;与珠海海泰公司试剂结果符合率为98.82%,Kappa=0.96。结论本方法灵敏度高,特异性强,精密度好;与同类方法学检测结果相关性好,能满足临床应用需要。

生物素-亲合素斑点免疫金渗滤试验检测血清中登革病毒4型抗原

目的建立用斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）检测血请中登革病毒抗原的方法。方法一株ＤＶ４型特异性单克隆抗体点加于硝酸纤维膜上，以捕获血清中的ＤＶ４抗原。借助黄病毒组反应性单克隆抗体、生物素化革抗鼠ＩｇＧ抗体、金标ＳＰＡ和金标亲合素，建立用ＤＩＧＦＡ检测血清中登革病毒抗原的方法。结果常规ＤＩＧＦＡ检测的敏感性高于病毒分离，而生物素一亲合素ＤＩＧＦＡ（ＢＡ－ＤＩＧＦＡ）的敏感性又高于常规的ＤＩＧＦＡ。常规ＤＩＧＦＡ可检测到５、０ＴＣＩＤ５０的病毒抗原，ＢＡ－ＤＩＧＦＡ可检测到４３ＴＣＩＤ５０的病毒抗原。结论作者建立的ＢＡ－ＤＩＧＦＡ简便、快速、敏感、特异，可用于快速诊断登革病毒４型感染。

桥式生物素-亲合素标记提高藻胆蛋白免疫荧光法灵敏度的研究

目的提高藻胆蛋白免疫荧光法检测的灵敏度。方法在藻胆蛋白免疫荧光法(PBPIFA)的检测流程中，引入桥式亲合素－生物素系统(BRAB)，称为BRAB-PBPIFA,用ELISA法与藻胆蛋白免疫荧光直接法和桥式BAS法，对定值的标准质控抗原HBsAg样品及500份血清样品同时进行测定。结果BRAB应用于藻胆蛋白免疫荧光法中，能显著提高该法对低抗原含量样品的检出，对弱阳性血清的检出率可提高1.5倍。无蛋白封闭试剂Tween 20在BRAB-PBPIFA中具有较好的封闭效果。结论BRAB标记可提高藻胆蛋白免疫荧光法检测的灵敏度。

生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统干扰的研究进展

外源性生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统的干扰现象,近几年广受关注。使用该系统方法进行检测的常规项目,如激素、心肌标志物和肿瘤标志物,可受到生物素不同程度的干扰,导致结果异常,甚至造成疾病的误诊或误治。该文对生物素的应用及其干扰生物素-链霉亲合素免疫分析系统的情况进行概述,并分析消除干扰的对策。

谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素．链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用

目的建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用。方法人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD);以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的最优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3 ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析。结果成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法;在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08%vs 52.83%,P<0.01);在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20%vs 6.12%,P<0.05)。结论利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法;生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1DM的漏检率,为早期检测T1DM提供新方法。

心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用

目的应用生物素链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA ELISA)建立血浆心肌营养素1(CT1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT1水平的检测。方法用鼠抗重组人CT1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2邻苯二胺显色。检测35名冠心病患者及对照组血浆CT1含量的变化。结果方法的线性范围为10～2000pg/ml,检测下限为10pg/ml,批内变异系数为1.76%～7.64%,批间变异系数为5.96%～9.04%。结论该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验。

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA+0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

ABC-ELISA检测HSeAg、抗-HBe的实验研究

本文应用ABC-ELISA检测乙型肝炎e抗原、e抗体,结果表明,抗-HBc的最佳生物素标记用量为150μg/mg Ab,最适包被、标记抗体应用浓度均为10μg/ml。该法和普通ELISA比较,在294份血清中。抗-HBe的阳性率分别为59.18％及34.35％;209份HRsAg阳性血清中,HBeAg阳性率各为34.93％和27.75％,P<0.01,ABC法具有较高的灵敏度;在20份ABC法HBeAg阳性而普通法阴性的血清中,用抗-HBe作中和抑制试验,抑制率均>50％;本法检测抗-HBe时批内CV为9.23％,批问为9.80％,检测HBeAg时批内CV7.42％,批间为6.43％。

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

目的建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb)。方法用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。结果本法抗原包被量为0.083μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%～104.0%;包被板37℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P<0.01)。结论间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。

雌鼠抗透明带抗体检测及结果分析

目的建立大鼠抗透明带抗体的检测方法,探讨抗透明带抗体与母鼠年龄的关系。方法用BA-ELISA法,检测了28只老年母鼠、20只青年母鼠血清抗透明带抗体,并与40只正常妊娠大鼠对照。结果老年母鼠组阳性率为32．14%,青年母鼠阳性率为15．00%,正常妊娠大鼠阳性率为5．00%;抗透明带抗体阳性14例,总阳性率为15．9%(14/88)。结论用BA-ELISA法能够检测大鼠血清抗透明带抗体,正常妊娠组抗透明带抗体含量低。

子宫内膜异位症患者子宫内膜人白细胞抗原的免疫组化研究

目的 研究子宫内膜异位症 (内异症 )患者在位和异位子宫内膜人白细胞抗原 HL A- DR的表达。方法 采用酶标链霉亲合素 -生物素 (L SAB)技术对 19例内异症不孕患者在位和异位子宫内膜腺细胞 HL A- DR抗原的表达进行免疫组化研究 ,以 19例非子宫内膜异位症的不孕患者作为对照。结果 内异症患者在位和异位子宫内膜腺细胞HL A- DR抗原的表达较对照组明显增强 (P<0 .0 1)。结论 子宫内膜 HL A-