人巨细胞病毒IgM抗体生物素-亲和素单克隆抗体捕获时间分辨荧光免疫法检测试剂盒的研制与评价

目的建立人巨细胞病毒IgM(human cytomegalovirus IgM,HCMV IgM)抗体生物素-亲和素单克隆抗体捕获时间分辨荧光免疫法(biotin-avidin monoclonal antibody capture time-resolved fluoroimmunoassay,BA Mac TrFIA)检测试剂盒,并对其性能进行评价。方法采用鼠抗IgMμ链单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)作为固相反应板的包被抗体,生物素(biotin)标记的HCMV基因重组抗原作为桥接抗原,链酶亲和素(SA)标记铕(Eu3+)作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,应用BA Mac TrFIA法进行HCMV IgM抗体的检测,对连续制备的3批试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、热稳定性进行评价,并与巨细胞病毒IgM抗体诊断试剂盒同时对1 020份血清或血浆样本进行临床研究比对试验,采用Kappa检验进行一致性分析。结果选择4μg/ml作为鼠抗IgMμ链McAb最佳包被浓度,1∶10 000稀释作为HCMV-Bio最佳工作浓度,1∶1 500稀释作为SA-Eu3+最佳工作浓度,试剂盒参考值建议为阴性对照品检测荧光值(negative control counter,NCx)×2.1;连续制备的3批试剂盒最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均达到国家检定标准;于37℃恒温箱放置6 d后,检测性能无明显改变;临床研究比对试验Kappa指数为1,一致程度达100%。结论成功制备了HCMV IgM BA Mac TrFIA法检测试剂盒,该试剂盒灵敏度高,精密性较好,与同类产品检测结果相关性好,为临床HCMV lgM抗体的检测提供科学、可靠的诊断依据。

抗风疹病毒IgM类抗体生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法的建立与性能评价

目的建立抗风疹病毒IgM类抗体(RV IgM)生物素-亲合素时间分辨荧光免疫分析捕获法(BA Mac TrFIA)并评价其分析性能。方法用鼠抗人μ链单克隆抗体(抗-μMcAb)作为包被抗体,生物素化RV重组抗原为桥接抗原,链霉亲合素标记铕作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,测定抗RV IgM抗体,并对其检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、试剂热稳定性进行评价,与同类方法学比对检测1 020例样本,比对实验的一致性分析采用Kappa检验。结果本方法检测国家检测限参考品L1、L2和L3的结果均为阳性反应(S/CO≥1.00),批内变异系数(CV)<15.00%,国家阴性参考品符合率为10/10,国家阳性参考品符合率为5/5;本方法的试剂盒于37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变;与珠海海泰公司试剂结果符合率为98.82%,Kappa=0.96。结论本方法灵敏度高,特异性强,精密度好;与同类方法学检测结果相关性好,能满足临床应用需要。

氯霉素的BAS-时间分辨荧光免疫分析

采用基于生物素-亲和素系统(BAS)的时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)建立高灵敏的氯霉素(CAP)全自动检测方法。以亲和素包被板,生物素-CAP-OVA与游离CAP竞争限量抗CAP多克隆抗体,用铕标记的羊抗兔IgG示踪。该方法的灵敏度为0.018ng/mL,效应点ED20、ED50、ED80分别为0.092、1.339、39.275ng/mL,与甲砜氯霉素、青霉素、诺氟沙星的交叉反应率均小于0.1%,批内和批间的变异系数分别为4.4%和11.8%。向蜂蜜和鸡蛋样品添加0.1～10ng/mL浓度的CAP,平均回收率分别为110.3%和92.8%。检测结果与ELISA试剂盒有良好的相关性。结果表明,CAPBAS-TRFIA法灵敏度高、特异性好、操作简便,适于大样本筛查,有良好的应用前景。

sICAM-1 BSA TRFIA的建立及在肺癌临床诊断中的初步应用

目的:建立可溶性细胞间粘附分子-1(soluble intercellul aradhesion molecule-1,sICAM-1)生物素-亲和素系统(BSA)时间分辨荧光免疫分析方法(sICAM-1BSA-TRFIA)并应用于临床,探讨肺癌患者sICAM-1水平的变化及其临床意义。方法:使用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体,利用制备的铕标记链亲和素(SA-Eu3+)作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合,建立双位点多层夹心法BSA-TRFIA法,检测31例正常对照者和48例肺癌患者血清sICAM-1水平。结果:本文建立的sICAM-1BSA-TRFIA线性范围为1.25μg/L～1000μg/L;本法检测灵敏度为1.32μg/L。平均回收率为99.87%。批内变异为4.24%,批间变异为6.83%。与ELISA方法所测结果高度相关。与TNF-α、IL-8、IL-1、IL-2和IL-6无明显交叉反应。溶血、脂血对该方法无明显影响。肺癌患者血清sI-CAM-1水平浓度为(570.7±160.6)μg/L明显高于正常对照者(365.74±45.03)μg/L(P<0.01)。结论:sICAM-1BSA-TRFIA是一种新型的高灵敏度、宽范围的非放射性标记免疫分析法,sICAM-1可作为诊断肺癌的辅助观察指标,对评价肺癌患者病情和预后有一定临床意义。