基于生物素-亲和素系统的压电免疫传感器检测相思子毒素研究

利用生物素-亲和素系统的放大作用和纳米金质量扩增效应,建立了压电免疫传感器检测相思子毒素的新方法。首先在石英晶体的金电极上依次组装二巯基丙酸、EDC和NHS进行表面修饰,然后通过亲和素固定生物素标记相思子毒素多抗来制备敏感膜,利用纳米金的质量扩增效应设计了一种"毒素-纳米金标记单抗"复合物,成功实现了对相思子毒素的检测,提高了传感器灵敏度和重现性。本传感器对相思子毒素响应的线性范围为0.05～5mg/L;回归方程为Δf=50.81CAbrin+67.11(r=0.9903,n=10,P<0.0001);检测灵敏度为50.81Hz.L/mg。

生物素-亲和素系统在压电免疫传感器中质量放大作用研究

生物素－亲和素系统（ＢｉｏｔｉｎＡｖｉｄｉｎＳｙｓｔｅｍ，ＢＡＳ）是７０年代后期迅速发展起来的一种新型生物放大系统，具有高灵敏度、高特异性以及简便、经济、快速等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛的应用［１］．我们首次将生物素－亲和素系统用于压电免...

亲和素-生物素系统的^(153)Sm标记及其生物学分布动力学的研究

选用１５３Ｓｍ对生物素进行放射性标记，然后利用亲和素和链霉亲和素与生物素的高亲合力特性，再对亲和素和链霉亲和素进行１５３Ｓｍ的标记，观察在大鼠和小鼠体内的血清除率和生物学分布，并与１５３ＳｍＣ１３和１５３Ｓｍ－ＤＴＰＡ的生物学分布进行比较．结果表明，１５３Ｓｍ标记的亲和素血清除迅速，肝肾放射性摄取高；１５３Ｓｍ标记的链霉亲和素血清除缓慢，肝、脾、肾等脏器和血液中滞留量高；而１５３Ｓｍ－生物素的代谢较快，其血清除主要经肾脏排泄。亲和素和链霉亲和素体内生物分布的差别为预定位放免显像和治疗研究中亲和素－生物素系统的不同组分的选择提供实验基础。

亲和素-生物素系统介导的炎症预定位显像研究

目的:探讨亲和素-生物素系统在小鼠炎症模型中进行预定位炎症显像的实验研究。方法:实验动物均为用肌肉注射松节油所致炎症模型,采用生物素化人免疫球蛋白(B-hIgG)和99mTc标记亲和素(99mTc-Avi-din)进行二步法预定位炎症显像,在注药后3h、6h、12h对小鼠炎症模型进行显像和体内生物学分布测定,并以99mTc-hIgG和99mTc-Avidin作为对照组。结果:二步法预定位显像组炎症病灶在3h即可显像,其靶/非靶(T/NT)比值为1.95,6h达3.12,血中放射性清除较快。而99mTc-hIgG组T/NT在3h仅0.38,由于其分子量较大,血中清除时间较长,血本底较高,6h^12h血中仍保持较高放射性水平,且肝脏积聚放射性较多,图像也不清晰;99mTc-Avidin组则在肝、肾有较多放射性浓聚。结论:二步法预定位炎症显像的T/NT比值较99mTc直接标记hIgG法为高,且病灶显像时间提前,并可提高图像的清晰度。

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用131I和188Re标记亲和素,测定其与生物素结合的能力,并与未标记的亲和素、罗丹明标记的亲和素进行比较,测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量;探讨用生物素 亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明,未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、188Re 亲和素和131I 亲和素,它们与生物素的结合能力依次下降,与生物素半解吸量分别为21.9,19.5,25.7和47.9μg;放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明 亲和素。由此推测,有可能用亲和素 生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。131I和188Re;

生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用

目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性。方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性。将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600 μg,24 h后腹腔注射80 μg 亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素。对实验动物行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10、30 min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比。结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%。增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到最大值,与其他各时间点有显著性差异。肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到最高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似。肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异。结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化。

利用生物素-链亲和素系统筛选重症急性胰腺炎肝损伤大鼠HMGB1启动子结合蛋白

目的:筛选重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肝损伤大鼠高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)的启动子结合蛋白.方法:牛黄胆酸钠胆胰管逆行注射法制备SAP大鼠模型,与对照组同时处死,取肝组织提取细胞核蛋白,PCR扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针,将核蛋白与HMGB1探针孵育,然后用链亲和素磁珠分离HMGB1启动子-蛋白复合物,分别用0.25 mol/L和1 mol/L NaCl洗脱探针上结合的蛋白,用SDS-PAGE电泳分离样本蛋白,SilverQuest银染试剂染色,比较SAP组和对照组的差异条带并做质谱鉴定.结果:对照组和SAP组共有14条差异条带,质谱鉴定这些差异条带得到H2A、H2B、H3、H4、S100A9转录相关蛋白.结论:该研究筛选到一些SAP肝损伤特异性的HMGB1启动子结合蛋白,对于下一步研究HMGB1在SAP肝损伤过程中的转录调控机制具有重要意义.

生物素-亲和素桥接系统在骨组织工程中的应用

目的:观察生物素-亲和素桥接系统(avidin-biotin binding system,ABBS)对骨组织工程中种子细胞与支架材料黏附的影响,探讨ABBS在骨组织工程的作用。方法:以脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞、β磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)作为支架材料建立组织工程骨模型。实验分为两组,对照组:ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合;实验组:ABBS修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合。通过免疫荧光以及流式细胞仪检测ADSCs生物素化的效率。计算并比较两组的细胞黏附率;在扫描电镜下观察ADSCs与多孔β-TCP支架黏附的表面情况。结果:生物素化的ADSCs荧光染色显示生物素结合部位在细胞胞质,且流式细胞仪检测提示生物素化细胞阳性率为95%。ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合10min、30min、60min、12h、24h时,对照组和实验组的细胞黏附率分别为(2.31±0.14)%和(21.75±4.69)%、(11.96±2.53)%和(54.82±12.37)%、(33.48±9.51)%和(78.69±15.65)%、(78.29±10.63)%和(95.46±7.38)%、(94.79±10.42)%和(98.13±1.45)%。生物素化的ADSCs与亲和素化多孔β-TCP支架材料的黏附效果在10min、30min、60min、12h4个时间点明显高于未修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架的黏附效果(P<0.05)。电镜下观察,ABBS组与对照组无明显差别。结论:ABBS可以促进ADSCs在支架上早期黏附,有利于细胞增殖,并且对组织工程骨的生物相容性无明显影响。

亲和素-生物素系统预定位放免治疗白血病的研究

1预定位技术概述单克隆抗体在肿瘤学中已成为将放射性核素传递至肿瘤细胞的载体用于肿瘤的诊断及治疗。放免治疗（RIT）成为最令人期待的治疗形式之一,特别是在血液系统恶性肿瘤。例如,抗CD20介导的RIT即可单独或联合化疗或造血细胞移植（HCT）可明显提高惰性B-细胞非霍奇金淋巴瘤病人的预后,为侵袭性淋巴瘤的预后带来希望。

亲和素-生物素系统预定位放免治疗的实验研究

选用153Sm标记抗CEA单抗 (McAb)和螯合DTPA生物素 (DB2 ) ,利用生物素化单抗 -亲和素- 153Sm -DB2 的三步法在荷人结肠癌裸鼠模型中进行预定位放免治疗。以153Sm -CEAMcAb、153Sm -mIgG、153Sm -DB2 作为治疗对照组 ,10 0 μL生理盐水作为非治疗对照组 ,在移植瘤接种后的第3天实施治疗 ,采用单次较大剂量治疗 ( 11.1MBq 每鼠 ) ,定期测量裸鼠的体重、血白细胞计数和肿瘤生长体积以及瘤块的组织病理学检查 ,观察肿瘤抑制效应及毒副作用。结果表明 ,预定位放免治疗与直接标记单抗放免治疗对肿瘤有明显的抑制作用 ,治疗第 5周肿瘤抑制率分别达到 80 .67%和 78.4 4 % ,组织病理学结果提示肿瘤组织呈坏死样改变 ,而正常脏器如肝、肾等未见损伤 ;治疗前后白细胞计数以153Sm -CEAMcAb及153Sm -mIgG两组降低最为显著。提示预定位放免治疗具有低毒高效的治疗作用 ,较153Sm

人促甲状腺激素生物素-亲和素系统免疫放射分析法的建立

报道将ＢＡＳ（生物素－亲和素系统）引入双位点夹心ＩＲＭＡ（免疫放射分析法），建立了人血清ＴＳＨ（促甲状腺激素）固相试管双位点夹心ＢＡＳ－ＩＲＭＡ。该法批内ＣＶ为１．４％—８．３％，批间ＣＶ为６．１％—８．４％，最小检出量为０．０４ｍＩＵ／Ｌ，平均回收率为１００．１６％，灵敏度约是同条件下ＩＲＭＡ的３倍；与ＩＲＭＡ对比测定２０份病人血清ＴＳＨ样品，经统计学处理，两者测定结果呈良好相关性。

利用生物素-链亲和素系统筛选呼吸机所致肺损伤HMGB1启动子结合蛋白

目的:筛选呼吸机所致肺损伤(VILI)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的启动子结合蛋白.方法:制备VILI大鼠模型,与正常对照组大鼠同期处死,取肺组织提取细胞核蛋白.用PCR法扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针,将细胞核蛋白与制备的HMGB1启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离HMGB1启动子-蛋白反应复合物,分别用0.25mol/L和1mol/LNaCl洗脱探针上结合的蛋白,SDS-PAGE电泳分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较VILI组与正常对照组的差异条带.结果:两组细胞核蛋白中共观察到24条差异条带.分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,机械通气后有6个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有2个蛋白的结合力减弱;在高亲和力作用水平,有10个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有6个蛋白的结合力减弱.结论:筛选到一些VILI特异性HMGB1启动子结合蛋白,对于研究HMGB1的转录调控机制具有重要意义.

肿瘤放射免疫显像的亲和素-生物素系统

生物素－亲和素预定位法应用于肿瘤放免显像，能使肿瘤靶位信号放大，血液本底快速降低，从而Ｔ／ＮＴ明显增高，肿瘤检测效率提高。从目前国外的研究结果看，亲和素－生物素预定位放免显像无论是动物实验还是临床应用都明显优于一步法放免显像，值得进一步研究。

生物素-亲和素放大系统荧光免疫分析检测太空杯中的双酚A

通过简单的全合成将生物素共价结合到抗双酚A抗体上形成生物素化的抗双酚A抗体复合物，结合荧光素标记的亲和素作为荧光探针，建立了测定双酚A的荧光免疫分析新方法．在优化的实验条件下，测定双酚A的线性范围为0．1～10000ng／mL，检出限为0．05ng／mL．将其用于太空杯中双酚A的测定，得到的样品回收率和相对标准偏差分别为91．8％～110．0％和2．2％～5．3％．实验结果表明该方法简单、稳定、可靠．

亲和素-生物素系统预定位技术在炎症显像中的应用

亲和素 -生物素系统预定位技术已在肿瘤放射免疫显像中得到成功应用 .近年来 ,这一新技术也已开始用于炎症的显像研究中 .本文就亲和素 -生物素系统预定位技术及其在炎症动物模型中的实验研究和临床试用研究中的情况进行简要综述 .并就目前炎症显像的现状及存在的问题 ,以及预定位炎症显像的应用前景加以讨论 .

亲和素-生物素系统预定位技术的某些新进展

亲和素－生物素系统预定位技术在肿瘤诊治中的应用研究近年来发展迅速，现已从动物实验阶段转入临床应用研究，并取得良好的结果，肿瘤预定位治疗也在研究之中。

生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚A

建立了可用于快速、灵敏地检测双酚A的生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法,测得最佳实验条件为包被抗原浓度为13.8 mg/L、抗体稀释为2.4×105倍,生物素化二抗和酶标亲和素的最佳稀释倍数分别为2000倍和500倍.在优化条件下,方法的线性范围0.2～1000 μg/L;最低检出限0.05 μg/L.所建立的方法用于食品和唾液中双酚A含量的测定,样品处理简单,结果满意.

双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素

目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,线性回归方程为Y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P<0.0001,n=9),检测限为0.125μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性。结论成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的,可适用于各种微量abrin样品的分析。

人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。

基于生物素-亲和素放大的SPR传感器检测大肠杆菌研究

建立了一种基于表面等离子体共振(SPR)技术的大肠杆菌特异性快速检测方法。采用EDC/NHS将葡聚糖修饰的CM5芯片表面活化,通过亲和素固定生物素标记的二抗(羊抗兔IgG抗体),利用一抗(兔抗大肠杆菌ATCC25922单克隆抗体)和二抗反应,将兔抗大肠杆菌单克隆抗体固定在传感芯片表面。利用一抗和二抗的质量扩增效应和生物素-亲和素的多级放大效应,实现了对低浓度大肠杆菌ATCC25922的快速检测,提高了SPR传感器灵敏度。利用NaOH溶液对芯片再生,可对多个不同浓度样品进行检测,采用相对响应单位(RU)记录数据。本传感芯片对大肠杆菌ATCC25922响应的线性范围为1.5×102 CFU/mL～1.5×107 CFU/mL,检测限为1.5×102 CFU/mL,相关系数r为0.981 5。这种方法简便快捷,有望成为一种在线检测治病菌的有力手段。