斑点免疫金渗滤试验、生物素-链霉亲和素一步法与培养法检测淋球菌抗原的对比

目的 探讨斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测淋球菌抗原的优缺点。方法 同时用DIGFA、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测临床疑诊淋病患者 110例泌尿生殖道标本中的淋球菌抗原 ,并相互比较。结果 DIGFA和生物素 链霉亲和素一步法的敏感性、特异性分别为 97.53 %、92 .85%和 96.2 9%、89.2 8%。配对计数资料 χ2 检验 ,两法分别与培养法比较差异均无显著性 (P >0 .0 5)。结论 检测淋球菌抗原的DIG FA、生物素 链霉亲和素一步法是一种简易、快速、敏感。

应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮

采用基于生物素（Biotin）-链霉亲和素（Strepavidin）的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）检测方法。以strepavidin包被板条，加入生物素化的ZEN—BSA，结合在板条上的ZEN—BSA与标准／样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体，用稀土离子Eu“标记的羊抗鼠IgG进行示踪，建立了间接竞争的ZEN-TRFIA。该方法的检测灵敏度为0．2ng／ml，测量范围是0．2～200．0ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．7％和8．3％，平均回收率为91．1％。与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12．3％，与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应，说明该方法的特异性较好。相关试剂在4℃放6个月后各检测参数基本无变化，说明该方法稳定。样品同时用ZEN—TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量，两者的相关系数为0．9664，说明该方法测量准确。ZEN—TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点，适合于ZEN大量筛查的应用。

生物素-链霉亲和素技术一步法检测淋球菌抗原的研究

目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本的 4.71± 2 .1 3μg/ L ,阳性率 0 % (P均 <0 .0 1 ) ,本法检测灵敏度 0 .6 2 5 μg/ L,特异性 1 0 0 % ,敏感性 97.2 %。结论 :该法可作为灵敏、快速诊断淋球菌的新的辅助方法。

利用生物素-链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞的表面标记

背景:目前尚缺乏高效、无创的方式将干细胞植入靶器官,探索引导干细胞到达靶器官或组织的途径以及提高干细胞归巢效率是现今干细胞研究的重点领域之一。目的:利用生物素-链霉亲和素反应体系建立一种简单可行的细胞表面化学修饰方法,并评价此方法进行骨髓间充质干细胞表面标记的效率及其对细胞生物学功能的影响。方法:全骨髓培养法得到第3代骨髓间充质干细胞,采用流式细胞仪鉴定;以磺化生物素-N-羟基琥珀酰亚胺、生物素、链霉亲和素将黏附分子配体唾液酸化的路易斯抗原装备到骨髓间充质干细胞表面;通过荧光显微镜评估骨髓间充质干细胞表面标记的效率,锥虫蓝染色法检测骨髓间充质干细胞的活性,CCK-8比色法检测骨髓间充质干细胞的增殖功能;成脂、成骨诱导检测骨髓间充质干细胞多分化功能。结果与结论:(1)全骨髓培养法培养2周,可得到第3代骨髓间充质干细胞,细胞表达CD90,CD29,不表达CD34和CD45。(2)以生物素及链霉亲和素成功将黏附分子配体唾液酸Lewis X(Sle X)装备到骨髓间充质干细胞表面,且对细胞活性、增殖、分化功能影响不大。(3)运用这种方法对细胞进行表型修饰,操作技术简单,修改效率可达88%,有望提高骨髓间充质干细胞的归巢率,未来会有广泛和重要的应用价值。

生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究

目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸(FA)。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体(FR)靶向QD探针,比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况,并验证其靶向特异性;对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果;比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果:BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞,且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强,同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论:制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的 建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法（BSA—ICC）并作临床初步应用。方法 从健康人外周血单个核细胞（PBMC）中富集CD4细胞，加入莫能霉素，用不同浓度的佛波醇酯（PMA）和钙离子载体（A23817）诱导CD4细胞不同时间，比较其胞内表达白细胞介素-2（IL-2）／白细胞介素-4（IL-4）的细胞百分率，确定最适诱生条件；用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG（bio-SAMIgG）和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（HRP-SA）作棋盘配比试验，确认McAb、bio-SAMIgG和HRP—SA的最适浓度，根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA—ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2／IL-4细胞的百分率。结果 诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2．0μmol／L，诱导高峰时间分别为5和7h，BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1：20和1：40，bio—SAMIgG和HRP-SA浓度分别为10～15μg/ml和15μg/ml。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为（45．90±4．39）％、（37．28±2．67）％和（25．19±3．49）％，分泌IL-4的细胞百分率分别为（10．5±1．50）％、（9．94±1．06）％和（16．13±2．50）％，IL-2^＋CD4^＋／IL-4^＋CD4^＋比值分别为3．65±0．94、3．55±0．76和1．27±0．26。结论 所建方法可用于T辅助（Th）细胞亚型的测定，从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化，呈Th2反应，可能与恶性肿瘤的发生有关。

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程У=0.985Х-0.131,相关系数(r)=0.997。PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%。测定范围为1.50～85.00μg/L。最小检测限为0.30μg/L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用。

基于SiC@Ag基底和银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体双重SERS放大的miRNA-106a检测

基于SiC@Ag基底与Ag纳米颗粒的表面增强拉曼散射效应,提出了利用银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体二次表面增强拉曼散射放大的超灵敏miRNA-106a检测方案.首先,将地高辛修饰的捕获DNA与固定在SiC@Ag基底上的抗地高辛链接,制备SiC@Ag@anti-digoxin/digoxin-DNA基底;将4-巯基苯甲酸(4MBA)标记的银纳米颗粒与修饰有氨基和生物素的探针DNA链接,制备Ag@4MBA@DNA-biotin探针.然后将制备的基底、探针与待测miRNA-106a组成“三明治”结构,获得表面增强拉曼散射信号放大.最后,依次加入链霉亲和素和制备的探针,形成银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体,实现检测信号的二次放大.实验结果表明,利用SiC@Ag基底和银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体双重表面增强拉曼散射放大,可以实现miRNA-106a的超灵敏检测,检测极限达到0.579fmol/L,对于肿瘤的早期诊断具有应用潜力.

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA，BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法，结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用，建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE，线性范围为0．12～20ng／mL，回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析，当阈值为0．5ng／mL时，敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点，具有良好的应用前景。

应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法检测原发性肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶

目的观察生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附（ELISA）法检测原发性肝癌（PHC）特异性欧曼陀罗凝集素强结合的γ-谷氨酰转移酶（DSA-GGT）的临床应用价值。方法对45例正常对照者、58例PHC患者和203例非PHC患者（包括其他肿瘤患者36例，肝良性病变患者167例），应用生物素-链霉亲和素ELISA法检测受试者血清中DSA—GGT的水平，同时用ELISA法检测受试者血清中甲胎蛋白（AFP）的水平。结果58例PHC患者中，DSA—GGT阳性38例，检测DSA-GGT诊断PHC的灵敏度为65．5％；203例非PHC患者中，DSA—GGT阳性18例，检测DSA—GGT诊断PHC的特异度为91．1％。该方法的平均批内及批问变异分别为8．9％和11．5％。58例PHC患者中，AFP阳性40例，检测AFP诊断PHC的灵敏度为69．0％；203例非PHC患者中，AFP阳性19例，检测AFP诊断PHC的特异度为90．6％。DSA-GGT与AFP联合检测诊断PHC的灵敏度和特异度分别为93．1％和85．7％。结论生物素-链霉亲和素ELISA法检测DSA—GGT和ELISA法检测AFP对PHC诊断的灵敏度和特异度相近，且前者的重复性良好，可作为PHC诊断的较好检测方法；DSA—GGT与AFP联合检测可显著提高PHC诊断的灵敏度。

生物素链霉亲和素联合免疫层析用于快速检测NT-proBNP

为提高常规免疫层析技术的检测灵敏度,引入生物素-链霉亲和素系统,以荧光微球作为标记物,建立了一种新型快速定量检测NT-pro BNP的方法.试验结果表明:新型试剂盒在0.02~30μg·L^(-1)范围能对NT-proBNP实现快速检测.在全血检测中,新型试纸条所测NT-pro BNP浓度与雷度快速免疫分析仪定量检测结果具有很好的一致性.新型免疫层析试纸条大大提高了快速检测的准确性,可广泛用于床旁检验(POCTs)等临床诊断阶段.

利用生物素链霉亲和素放大酶联免疫方法检测猪肉中莱克多巴胺残留

以酶联免疫方法为基础,结合生物素-链霉亲和素系统的放大作用,建立直接竞争生物素链霉亲和素放大酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并将其用于猪肉肌肉组织中莱克多巴胺残留的检测,方法灵敏度(IC50)为(0.3±0.05)ng/mL,样品检出限为(0.3±0.1)ng/kg,平均加标回收率在84%以上。

链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌诊断中的临床应用

目的分析链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌检测当中的临床价值。方法选取2009年3月至2013年1月在孝感市中心医院就诊具有高度鼻咽癌危险的患者326例,分别进行链霉亲和素-生物素放大免疫酶法和常规免疫酶法检验,对链霉亲和素-生物素放大免疫酶法与常规免疫酶法在鼻咽癌患者117例与鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者209例的IgA/VCA和IgA/EA的检出率进行观察。结果在鼻咽癌患者中,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为99.16%,高于常规免疫酶法的92.31%,IgA/EA检出阳性率为78.63%,高于常规免疫酶法的56.41%(P<0.05)。鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为24.88%,与常规免疫酶法检出阳性率(23.92%)差别无统计学意义(P>0.05),IgA/EA检出阳性率为3.83%,而常规免疫酶法为0。结论链霉亲和素-生物素放大免疫酶法能够较常规免疫酶法更为灵敏地诊断鼻咽癌。

生物素—链霉亲和素免疫学测定地高辛的研究

方法为竞争酶联免疫吸附方法，待测物质为血清中地高辛，采用国产链霉素和素直接包被塑料板孔，生物素标记地高辛抗体。其测定灵敏度为0．0964μg/L,最低检测限为0．225μg/L,测定三份低、中、高浓度的血清标本，批内变异系数分别为8．9％、5．9％和2．4％；批间变异系数分别为15．8％，10．1％和9．2％，测定回收率在89．1％－107．22％之间，此法与FPIA方法相关良好（r=0.9488).

生物素化DNA与链霉亲和素绑定初步研究

将生物素标记的DNA与链霉亲和素(streptavidin,STV)按4∶1摩尔比连接,用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)对混合物表征,观察到所有可能的几种DNA-STV复合物。并按照不同摩尔浓度比和孵育时间配制DNA与STV混合液,探讨了影响结合效率的因素,初步得到用生物素-链霉亲和素系统批量制备1STV-1DNA单分子复合物的最佳制备条件,为未来单分子DNA的大规模快速制备奠定了基础。

基于生物条形码结合杂交链式反应双重信号放大检测蓖麻毒素

建立了一种基于生物条形码结合杂交链式反应扩增的高灵敏、特异性检测蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)的方法。使用RT多克隆抗体(p Ab)及条形码DNA (Barcode DNA)制备功能性金纳米探针(GNPs),通过与RT单克隆抗体(m Ab)共同识别作用,形成"m Ab-RT-pAb/Au NPs/Barcode DNA"三明治夹心结构,进一步利用条形码DNA作为引发链触发生物素标记的发卡探针进行杂交链式扩增,形成一条具有重复单元的长双链DNA。当使用辣根过氧化物酶标记链霉亲和素与长链DNA上的生物素结合后,通过鲁米诺与过氧化氢的化学发光底物发光进行测定。结果表明,本方法检测RT的线性范围为0.61 ng/m L～5.00μg/m L,检出限为0.52 ng/m L(S/N=3),本方法具有较宽的检测范围及较低的检出限,测定饮用水及脱脂牛奶样品中RT的加标回收率在83.4%～112.4%之间,相对标准偏差在2.2%～5.4%之间,表明本方法实用性良好,在食品和饮用水安全控制及防范生物恐怖袭击方面具有良好的应用前景。

超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响

目的探讨超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响。方法应用生物素-链霉亲和素连接系统,使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)与特异性抗血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体相连接,用间接免疫荧光法检测抗体与微泡的连接,用马尔文激光粒径分析仪分别测定生物素化处理前后微泡的粒径,采用超声诊断仪评价微泡靶向化构建前后的显像效果。结果 SonoVue与特异性抗体成功连接,间接免疫荧光检测呈阳性。生物素修饰后的微泡粒径分布变窄,与普通微泡的超声显像效果略有差异。结论通过生物素-链霉亲和素系统可以成功靶向化构建超声微泡,靶向化处理因素对微泡的粒径有一定影响,对微泡的超声显影效果略有影响。

链霉亲和素修饰的量子点联合生物素标记的叶酸在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用

目的 :探讨链霉亲和素(streptavidin,SA)修饰的量子点(quantum dots,QDs)联合生物素标记的叶酸(folic acid,FA)在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用价值。方法 :采用活泼酯法合成SA-QDs复合物,并用同样的方法以聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)树状分子为载体合成生物素化FA-PAMAM。采用生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记叶酸受体(folate receptor,FR)高表达的SKOV3细胞,同时以采用游离FA预处理的SKOV3细胞和FR低表达的肺腺癌A549细胞为对照,验证该荧光探针靶向SKOV3细胞的特异性。随后,以未用PAMAM为载体[生物素化FA-聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)联合SA-QDs荧光探针]或无生物素-链霉亲和素放大系统的荧光探针(FA-PAMAM-QDs)为对照,验证该探针的荧光信号双重放大效应。结果 :FR高表达的SKOV3细胞可被生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs的荧光探针特异性识别,平均荧光强度高达114.92±2.87,显著高于FA预处理后再用该探针进行检测的SKOV3细胞(57.86±7.59)和FR低表达的肺腺癌A549细胞(14.94±0.83)(P值均<0.000 1)。在双重放大效应的验证实验中,生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的平均荧光强度为120.89±3.80,其荧光强度明显高于生物素化FA-PEG联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的77.50±2.43和FA-PAMAMQDs荧光探针标记的SKOV3细胞的47.81±1.35(P值均<0.000 1)。结论 :构建获得了一种特异性靶向卵巢癌SKOV3细胞的生物素化FAPAMAM联合SA-QDs荧光探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

生物素对免疫检测干扰的分析研究

目的探究生物素对免疫检测的干扰及大剂量服用生物素对免疫指标的影响。方法招募哈尔滨医科大学附属第一医院体检健康的志愿者34名,并将其分为5组:对照组(10例)、低剂量组(6例)、中剂量组(6例)、高剂量组(6例)和超高剂量组(6例)。同期选择本院10例慢性心衰稳定期随访者作为稳定心衰组,采用化学发光法自动化检测平台检测心肌肌钙蛋白I、肌钙蛋白T水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA )方法检测生物素水平。结果与对照组相比,稳定心衰组患者第1日至第5日生物素浓度明显降低,肌钙蛋白I、肌钙蛋白T水平明显升高,差异具有统计学意义(t1d=11.40、13.33、63.60,t2d=17.11、6.67、63.42,t3d=14.10、13.33、64.71,t4d=16.67、6.67、62.43,t5d=15.80、13.33、66.05,P值均<0.001)。与用药前相比,服用5 mg生物素后低剂量组、服用10 mg生物素后中剂量组、服用20 mg生物素后高剂量组、服用50 mg生物素超高剂量组肌钙蛋白I、肌钙蛋白T及生物素浓度均明显升高,组间差异均具有统计学意义(F=148.11、53.08、38.39、147.26、57.47、42.63、152.82、69.26、58.63、152.68、62.57、48.27,P值均<0.001)。结论生物素会干扰链霉亲和素捕获目标分析物的能力,从而导致检测结果的假性升高或者降低,影响临床判断。