生物素-链霉亲和素系统检测乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群

应用生物素-链霉亲和素方法检测了乙型病毒性肝炎(HBV)患者外周血T淋巴细胞亚群。旨在探讨乙型病毒性肝炎患者的T淋巴细胞的功能,其结果为各患者的CD_6^+、CD_4^+、CD_3^+和CD_4^+/CD_4^+均明显高于正常人,其与正常人相比较,差别均有高度显著性(P<0.01)。表明乙型病毒性肝炎主要是杀伤性T淋巴细胞(T_c)参与了肝损害。

生物素-链霉亲和素系统压电传感实时响应特性研究

主要阐述了流式细胞仪在无脊椎动物血细胞分类、细胞免疫学、定量流式细胞分析、染色体核型分析、细胞核、细胞受体分析等研究中的应用,供研究无脊椎动物的科技工作者参考。生物素与链霉亲和素之间具有高度亲合力和高度特异性,将其用于压电传感研究,反映出了生物素-链霉亲和素系统的压电传感实时响应特性。分别讨论了体系pH对生物素与链霉亲和素吸附行为的影响,链霉亲和素包被浓度、包被时间、结合反应时间等因素对生物素-链霉亲和素结合实验的影响以及结合反应的特征。结果表明,pH=7.4时以100μg/mL链霉亲和素包被8 h后效果最好;结合反应中,生物素的浓度在0.11~1.65μg/mL范围内,传感器的响应频率值与溶液浓度成线性关系。

生物素-链霉亲和素系统在检测人PBMC IL-2R_α中的应用

本文报道用自制生物素-链霉亲和素系统配以抗IL-2R_aMcAb,建立检测人PBMCIL-2R_a的方法,并对本法中的关键条件进行探索,确定生物素化二抗和链霉亲和素的最适浓度以及多种诱导物的最适诱导时间和浓度。用本法对比检测了健康献血者和肿瘤患者PBMC IL-2R_a的表达水平,表明未经诱导的肿瘤患者PBMC IL-2R_a百分率显著高于正常人(P<0.01)。

实时生物分子相互作用分析技术用于链霉亲和素-生物素化抗体的层层组装研究

使用生物分子相互作用分析 ( Biomolecular interaction analysis,BIA)技术实时监测了在链霉亲和素表面层层组装亲和素 -生物素化抗体多层膜的过程 ,结果表明 ,通过链霉亲和素与生物素之间的强亲和作用 ,能够在表面形成均一的多层膜 ,并用实时 BIA技术求得了每层蛋白质的表面浓度 .对于生物素化抗体 ,单层吸附表面浓度为 1 .32 ng/mm2 ;对于链霉亲和素 ,单层吸附表面浓度为 2 .93ng/mm2 .

应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮

采用基于生物素（Biotin）-链霉亲和素（Strepavidin）的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）检测方法。以strepavidin包被板条，加入生物素化的ZEN—BSA，结合在板条上的ZEN—BSA与标准／样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体，用稀土离子Eu“标记的羊抗鼠IgG进行示踪，建立了间接竞争的ZEN-TRFIA。该方法的检测灵敏度为0．2ng／ml，测量范围是0．2～200．0ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．7％和8．3％，平均回收率为91．1％。与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12．3％，与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应，说明该方法的特异性较好。相关试剂在4℃放6个月后各检测参数基本无变化，说明该方法稳定。样品同时用ZEN—TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量，两者的相关系数为0．9664，说明该方法测量准确。ZEN—TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点，适合于ZEN大量筛查的应用。

斑点免疫金渗滤试验、生物素-链霉亲和素一步法与培养法检测淋球菌抗原的对比

目的 探讨斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测淋球菌抗原的优缺点。方法 同时用DIGFA、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测临床疑诊淋病患者 110例泌尿生殖道标本中的淋球菌抗原 ,并相互比较。结果 DIGFA和生物素 链霉亲和素一步法的敏感性、特异性分别为 97.53 %、92 .85%和 96.2 9%、89.2 8%。配对计数资料 χ2 检验 ,两法分别与培养法比较差异均无显著性 (P >0 .0 5)。结论 检测淋球菌抗原的DIG FA、生物素 链霉亲和素一步法是一种简易、快速、敏感。

利用生物素-链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞的表面标记

背景:目前尚缺乏高效、无创的方式将干细胞植入靶器官,探索引导干细胞到达靶器官或组织的途径以及提高干细胞归巢效率是现今干细胞研究的重点领域之一。目的:利用生物素-链霉亲和素反应体系建立一种简单可行的细胞表面化学修饰方法,并评价此方法进行骨髓间充质干细胞表面标记的效率及其对细胞生物学功能的影响。方法:全骨髓培养法得到第3代骨髓间充质干细胞,采用流式细胞仪鉴定;以磺化生物素-N-羟基琥珀酰亚胺、生物素、链霉亲和素将黏附分子配体唾液酸化的路易斯抗原装备到骨髓间充质干细胞表面;通过荧光显微镜评估骨髓间充质干细胞表面标记的效率,锥虫蓝染色法检测骨髓间充质干细胞的活性,CCK-8比色法检测骨髓间充质干细胞的增殖功能;成脂、成骨诱导检测骨髓间充质干细胞多分化功能。结果与结论:(1)全骨髓培养法培养2周,可得到第3代骨髓间充质干细胞,细胞表达CD90,CD29,不表达CD34和CD45。(2)以生物素及链霉亲和素成功将黏附分子配体唾液酸Lewis X(Sle X)装备到骨髓间充质干细胞表面,且对细胞活性、增殖、分化功能影响不大。(3)运用这种方法对细胞进行表型修饰,操作技术简单,修改效率可达88%,有望提高骨髓间充质干细胞的归巢率,未来会有广泛和重要的应用价值。

生物素-链霉亲和素技术一步法检测淋球菌抗原的研究

目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本的 4.71± 2 .1 3μg/ L ,阳性率 0 % (P均 <0 .0 1 ) ,本法检测灵敏度 0 .6 2 5 μg/ L,特异性 1 0 0 % ,敏感性 97.2 %。结论 :该法可作为灵敏、快速诊断淋球菌的新的辅助方法。

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅲ 链霉亲和素-碱性磷酸酶标记生物素检测系统

使用链霉亲和素(sA)结合碱性磷酸酶标记生物素(B-Ap)对斑点杂交结果进行检测。先摸索出sA和B-Ap的最佳浓度比。当反应液中sA浓度为1μg/ml,sA和B-Ap浓度比为1.7～2.0时,斑点杂交检测敏感性可达到pg水平。

地高辛的生物素-链霉亲和素免疫法测定方法的建立

目的：将生物素链霉亲和素免疫反应系统引入地高辛血药浓度监测中，准确地监测地高辛血药浓度。方法：将生物素与抗ＤＩＧＩｇＧ化学连接，ＤＩＧ通过ＨＳＡ与ＨＲＰ连接，建立了生物素链霉亲和素免疫反应系统测定地高辛的竞争反应模型。结果：以０５、１、２、３、５μｇ／Ｌ五个标准点建立了竞争反应曲线，同时将ＢＮＨＳＩｇＧ作了１：４００、１：８００、１：１６００、１：３２００的稀释，探讨了竞争反应曲线的规律性变化，运用流行的四参数曲线拟合法对竞争曲线作了拟合。同时做了方法学评价。结论：流行的生物素链霉亲和素技术可以引入被动的酶联免疫吸附法中。

生物素-链霉亲和素免疫学法测定地高辛的研究

采用国产链霉亲和素直接包被塑料板孔 ,生物素标记抗体 ,建立的竞争酶联免疫吸附试验的方法测定血中地高辛浓度 .其测定灵敏度为 0 0 964μg/L ,最低检测限为 0 2 2 51 μg/L ,测定三份低、中、高浓度的血清标本 ,批内变异系数为 8 9% ,5 9% ,2 4 % ;批间变异系数为 1 5 8% ,1 0 1 % ,9 2 % ,测定回收率在 89 1 %～ 1 0 7 2 2 %之间 ,此法与FPIA方法相关良好 (r=0 94 88)

生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究

目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸(FA)。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体(FR)靶向QD探针,比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况,并验证其靶向特异性;对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果;比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果:BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞,且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强,同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论:制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

生物素-链霉亲和素-过氧化物酶法快速诊断呼吸道合胞病毒感染

目的：建立检测下呼吸道感染婴幼儿粘膜细胞呼吸道合胞病毒（RSV）抗原的方法。方法：以生物素标记兔抗RSV抗体，鼻咽部粘膜细胞涂片与该抗体作用后加链霉亲和素-过氧化物酶反应，二氨基联苯胺显色，显微镜下观察结果。结果：RSV抗原总阳性率为41．6％，临床典型和可疑病例抗原检出率分别为47．9％和44．9％，临床不典型者阳性率12．5％（X2=7．9，P＜0．05）。阳性标本中细胞着成棕色，易与阴性标本相区别。结论：本法简便、快速，具有一定敏感性和特异性，适合于基层推广应用。

链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌诊断中的临床应用

目的分析链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌检测当中的临床价值。方法选取2009年3月至2013年1月在孝感市中心医院就诊具有高度鼻咽癌危险的患者326例,分别进行链霉亲和素-生物素放大免疫酶法和常规免疫酶法检验,对链霉亲和素-生物素放大免疫酶法与常规免疫酶法在鼻咽癌患者117例与鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者209例的IgA/VCA和IgA/EA的检出率进行观察。结果在鼻咽癌患者中,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为99.16%,高于常规免疫酶法的92.31%,IgA/EA检出阳性率为78.63%,高于常规免疫酶法的56.41%(P<0.05)。鼻咽癌高危人群但是无鼻咽癌患者,链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出阳性率为24.88%,与常规免疫酶法检出阳性率(23.92%)差别无统计学意义(P>0.05),IgA/EA检出阳性率为3.83%,而常规免疫酶法为0。结论链霉亲和素-生物素放大免疫酶法能够较常规免疫酶法更为灵敏地诊断鼻咽癌。

利用生物素-链亲和素系统筛选重症急性胰腺炎肝损伤大鼠HMGB1启动子结合蛋白

目的:筛选重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肝损伤大鼠高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)的启动子结合蛋白.方法:牛黄胆酸钠胆胰管逆行注射法制备SAP大鼠模型,与对照组同时处死,取肝组织提取细胞核蛋白,PCR扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针,将核蛋白与HMGB1探针孵育,然后用链亲和素磁珠分离HMGB1启动子-蛋白复合物,分别用0.25 mol/L和1 mol/L NaCl洗脱探针上结合的蛋白,用SDS-PAGE电泳分离样本蛋白,SilverQuest银染试剂染色,比较SAP组和对照组的差异条带并做质谱鉴定.结果:对照组和SAP组共有14条差异条带,质谱鉴定这些差异条带得到H2A、H2B、H3、H4、S100A9转录相关蛋白.结论:该研究筛选到一些SAP肝损伤特异性的HMGB1启动子结合蛋白,对于下一步研究HMGB1在SAP肝损伤过程中的转录调控机制具有重要意义.

生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统干扰的研究进展

外源性生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统的干扰现象,近几年广受关注。使用该系统方法进行检测的常规项目,如激素、心肌标志物和肿瘤标志物,可受到生物素不同程度的干扰,导致结果异常,甚至造成疾病的误诊或误治。该文对生物素的应用及其干扰生物素-链霉亲合素免疫分析系统的情况进行概述,并分析消除干扰的对策。

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的 建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法（BSA—ICC）并作临床初步应用。方法 从健康人外周血单个核细胞（PBMC）中富集CD4细胞，加入莫能霉素，用不同浓度的佛波醇酯（PMA）和钙离子载体（A23817）诱导CD4细胞不同时间，比较其胞内表达白细胞介素-2（IL-2）／白细胞介素-4（IL-4）的细胞百分率，确定最适诱生条件；用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG（bio-SAMIgG）和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（HRP-SA）作棋盘配比试验，确认McAb、bio-SAMIgG和HRP—SA的最适浓度，根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA—ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2／IL-4细胞的百分率。结果 诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2．0μmol／L，诱导高峰时间分别为5和7h，BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1：20和1：40，bio—SAMIgG和HRP-SA浓度分别为10～15μg/ml和15μg/ml。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为（45．90±4．39）％、（37．28±2．67）％和（25．19±3．49）％，分泌IL-4的细胞百分率分别为（10．5±1．50）％、（9．94±1．06）％和（16．13±2．50）％，IL-2^＋CD4^＋／IL-4^＋CD4^＋比值分别为3．65±0．94、3．55±0．76和1．27±0．26。结论 所建方法可用于T辅助（Th）细胞亚型的测定，从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化，呈Th2反应，可能与恶性肿瘤的发生有关。

建立一种基于BAS化学发光技术检测血清β-hCG,Prog水平的抗生物素干扰方法

目的在基于生物素-链霉亲和素(biotin-avidin/streptavidin,BAS)的化学发光技术检测人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-human chorionic gonadotropin,β-hCG)和孕酮(progesterone,Prog)时,建立一种简易、有效的抗生物素干扰方法。方法采用两种浓度链霉亲和素磁珠(streptavidin coated magnetic micro particles,M)检测不同生物素浓度的高、中、低水平的β-hCG和Prog血清,通过回收试验评价两种浓度M的抗生物素干扰能力以及采用低浓度M的校准曲线时高浓度M检测的准确度。结果①β-hCG和Prog的抗生物素干扰能力在低浓度M(0.72 mg/ml)时分别为100和25 ng/ml,在高浓度M(1.44 mg/ml)时分别为500和50 ng/ml。②使用和低浓度M相同的校准曲线时,高浓度M对于生物素浓度在500 ng/ml以下的β-hCG三个水平的回收率均在90%~110%之间;对于生物素浓度在50 ng/ml以下的高、中水平的Prog,其回收率在90%~110%之间。结论在基于BAS化学发光技术检测血清β-hCG和Prog时,采用高浓度M(1.44 mg/ml)是一种简易、有效且可靠的抗生物素干扰方法。

利用生物素-链亲和素系统筛选呼吸机所致肺损伤HMGB1启动子结合蛋白

目的:筛选呼吸机所致肺损伤(VILI)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的启动子结合蛋白.方法:制备VILI大鼠模型,与正常对照组大鼠同期处死,取肺组织提取细胞核蛋白.用PCR法扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针,将细胞核蛋白与制备的HMGB1启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离HMGB1启动子-蛋白反应复合物,分别用0.25mol/L和1mol/LNaCl洗脱探针上结合的蛋白,SDS-PAGE电泳分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较VILI组与正常对照组的差异条带.结果:两组细胞核蛋白中共观察到24条差异条带.分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,机械通气后有6个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有2个蛋白的结合力减弱;在高亲和力作用水平,有10个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有6个蛋白的结合力减弱.结论:筛选到一些VILI特异性HMGB1启动子结合蛋白,对于研究HMGB1的转录调控机制具有重要意义.

生物素—链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用

采用生物素—链霉亲和素系统(BSA)试剂建立测定MHV抗体的BSA-ELISA法,并与SPA-ELISA法比较。结果表明,前者本底极低,敏感性比后者提高4倍,阳性检出率提高1倍,且经阻断试验证明其特异性高。因此,该法在检测实验动物的特异性抗体方面,具有很大的应用潜力。