临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR分析

目的确定临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力和生物膜相关基因之间的关系,为生物膜形成的机制研究提供依据。方法96孔板番红染色法检测生物膜的形成,icaAD、icaBC、sar、agr和sigB的PCR扩增,并对产物进行测序和同源性比较。结果27株金黄色葡萄球菌中共有17株形成了肉眼可见的生物膜,其中以X387和X409两株最明显;有22株扩增出icaAD和icaBC,全部菌株扩增出sar、agr和sigB。结论ica是形成金葡菌生物膜的关键基因,但ica在形成生物膜过程中需要其他基因的协同作用。

鸽屠宰加工环节金黄色葡萄球菌肠毒素、生物膜形成能力及其相关基因的检测

为了解鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌的肠毒素、生物被膜形成能力、肠毒素及生物被膜形成相关基因的情况。采用金黄色葡萄球菌肠毒素酶联免疫分析试剂盒和结晶紫染色法检测41株金黄色葡萄球菌的肠毒素含量和生物被膜形成能力,同时通过PCR方法扩增金黄色葡萄球菌12种肠毒素基因和10种生物被膜形成相关基因。41株金黄色葡萄球菌在肠毒素酶联免疫法检测中,有30株为产肠毒素的菌株。肠毒素基因的检测中,有35株菌含肠毒素基因,检出率为85.36%,且有携带一种或多种肠毒素基因的情况。经典肠毒素基因的检出率分别为:sea(29.27%)、seb(29.27%)、sec(4.88%)、sed(65.85%)和see(2.44%);新型肠毒素基因的检出率分别为:sel(36.59%)、seg(29.27%)、sem(17.07%)、seu(17.07%)、sei(14.63%)、seh(7.32%)和sek(0.00%)。结晶紫染色法测定菌株生物被膜形成能力弱、中等和强的检出率分别为39.02%、43.90%和17.07%。生物被膜形成相关基因的检测中,clfB、luxS和clfA的检出率最高均为100.00%,其次是sarA和ccp均为97.56%,sigB、cna、icaA、agrC的检出率分别为85.37%、65.85%、41.46%、2.44%,bap未检出。此外,所有菌株均有携带多种生物被膜相关基因的情况,以携带7种基因的菌株最多(15/41,36.59%)。鸽屠宰加工环节污染中金黄色葡萄球菌存在较多的肠毒素且生物被膜形成能力较高,预测该鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌具有致病性,存在引起食物中毒的潜在风险。

鲍曼不动杆菌生物膜形成能力与生物膜相关基因及耐药性之间的关系

目的 探讨临床分离鲍曼不动杆菌菌株生物膜形成能力及生物膜相关基因的分布情况,分析其与细菌耐药表型的关系.方法 采用前瞻性研究方法,收集山东省成武县人民医院2012年10月至2013年10月分离的70株鲍曼不动杆菌,采用96孔聚苯乙烯板构建生物膜模型,结晶紫染色法定性、定量分析生物膜形成能力,比较不同生物膜形成能力鲍曼不动杆菌对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南、头孢吡肟、头孢哌酮舒巴坦、甲氧苄啶、左氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、头孢唑肟、氨曲南、哌拉西啉、头孢曲松、头孢呋辛等15种抗菌药物的耐药性.运用聚合酶链反应（PCR）技术扩增及检测生物膜相关基因Bap、bfs和intI1的表达.结果 70株鲍曼不动杆菌中40株为多重耐药菌（57.14％）,6株为泛耐药菌（8.57％）.68株具有生物膜形成能力（97.14％）,其中弱阳性14株,阳性20株,强阳性34株.鲍曼不动杆菌对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南、头孢吡肟的耐药率较低,分别为30.00％、32.86％、38.57％及41.43％,对其他常用抗菌药物的耐药率均在50％以上.随着生物膜形成能力的增强（弱阳性、阳性、强阳性）,鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星（85.71％、45.00％、38.24％,x2=9.225,P=0.010）、头孢吡肟（71.43％、45.00％、29.41％,x2=7.222,P=0.027）、庆大霉素（78.57％、55.00％、38.24％,x2=6.601,P=0.037）的耐药率显著降低.生物膜呈弱阳性、阳性和强阳性的鲍曼不动杆菌Bap基因阳性率分别为50.00％、65.00％和79.41％ （x2 =4.244,P=0.120）,bfs基因阳性率分别为35.71％、65.00％和88.24％（x2=13.602,P=0.001）,intI1基因阳性率分别为42.86％、75.00％和91.18％（x2=12.902,P=0.002）.生物膜相关基因阳性组对抗菌药物耐药率大多高于基因阴性组,但仅intI1基因阳性组对阿米卡星的耐药率显著高于基因阴性组（40.38％比11.11％,x2=5.194,P=0.023）.结论 鲍曼不动杆菌多重耐药情况严峻,且生物膜形成能力较强,随着生物膜形成能力的增强其耐药性降低;Bap、bfs、intI1基因参与了生物膜的形成.

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜相关基因分析及耐药性研究

目的了解单增李斯特菌1/2c血清型菌株与其他血清型菌株的生物膜相关基因和抗生素耐药性是否有差异。方法采用聚合酶链反应技术对19个生物膜相关基因全长扩增测序分析,并与参考菌株EGD-e序列进行比对确定基因变异情况;根据K-B纸片法对选取的实验菌株进行药敏实验。结果氨基酸序列比对发现1/2c血清型菌株的fla A基因编码的氨基酸在141位点发生突变,其他血清型菌株则没有,1/2c血清型菌株在prf A基因编码的89氨基酸位点、lux S基因编码的112和140氨基酸位点都不发生突变,其他血清型菌株则发生突变。78.43%的1/2c血清型菌株对头孢西丁中度敏感,对氨苄西林、米诺环素、利福平和呋喃妥因有不同程度的耐药。结论不同血清型单增李斯特菌的fla A、lux S、prf A 3个基因编码的氨基酸在某些位点突变有一定的规律性;1/2c血清型单增李斯特菌对某些抗生素呈现不同程度的耐药。

金黄色葡萄球菌生物被膜形成与生物被膜相关基因的调查研究

以分离自全国9个省(市、区)的102株奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌为研究对象,应用刚果红法(congo red agar,CRA)和半定量黏附试验(semi quantitative adherence assay,SQAA)检测了生物被膜形成情况,应用PCR法检测了8种生物被膜相关基因分布情况。结果发现,携带7种基因的菌株占有绝对优势,其次是携带6种基因的菌株;最流行的基因组合是Sig B-icaR-ica A-ica D-sar A-rbf-Sas G,比例高达66.7%;北京、内蒙古、宁夏、甘肃、广西、上海等地生物被膜形成与生物被膜相关基因的分布高度一致。以上研究结果表明,多种生物被膜相关基因组合是奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌流行的主要特点,生物被膜形成和生物被膜相关基因的分布在大多数地区表现高度一致性,rbf和Sig B基因可能在金黄色葡萄球菌生物被膜形成和乳房感染过程中发挥着重要作用。本研究结果将为金黄色葡萄球菌性乳房炎的防治提供一定的科学参考。

致羔羊脑炎粪肠球菌生物被膜形成能力及相关基因检测研究

为观察致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05株生物被膜(BF)的形成能力并检测致羔羊脑炎粪肠球菌BF形成相关基因的携带情况,本研究以XJ05为研究对象,运用96孔板建立不同时间BF模型,染色后酶标仪测定D595nm值,并用倒置显微镜观察BF形态。同时检测11株菌中与BF形成相关基因(gelE、esp、ace、asa1、asa373、efaA、ef0591、ef3314、ahrc、eep)的携带情况,并对相关基因片段做同源性分析。结果显示,在不同时间段XJ05株BF的生成量与空白对照组相比差异显著(P<0.05),24h时D595nm值最高且与其他各个时间段相比均差异显著(P<0.05)。显微镜下观察6h时BF初具规模,可见散落的网状结构,12~24h矩阵网格结构明显,24h时形成高度有序的网格结构,24h后网状结构逐渐脱落,BF开始降解。11株菌中10种相关基因的携带情况不同,有6株携带8种基因,1株携带7种基因,1株携带6种基因,1株携带2种基因,有2株未检测到10种基因的任何一种。检出的基因片段同源性均在93.3%~100.0%之间。结果表明,XJ05株能形成完整的BF,11株分离的致羔羊脑炎粪肠球菌中有9株携带部分与BF形成相关的基因。

食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜的形成及相关基因的检测

为了解食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus,MRSA)生物被膜形成能力及其相关基因携带情况。采用刚果红琼脂法和96孔板法测定22株食源性MRSA菌株(包括:原料乳分离株4株,鸡肉、速冻水饺和即食食品分离株各6株)的生物被膜形成能力,同时通过PCR方法对MRSA菌株生物被膜形成相关的15个基因进行检测分析。22株MRSA菌株中,刚果红琼脂法和96孔板法分别检测出21株(95.45%)和22株(100.00%)有生物被膜形成能力。96孔板法测定菌株生物被膜形成能力弱、中等和强的检出率分别为54.55%、40.91%和4.55%。MRSA菌株生物被膜相关基因clfA、fib和eno的携带率最高均为95.45%,其次是clfB(90.91%)、fnbB(54.55%)、icaBC和ebpS(都为45.45%)、agr(27.27%)、icaAD和cna(都为22.73%)、fnbA(13.64%),sar,bbp和sigB(都为4.55%)。此外,来自原料乳和即食食品的MRSA菌株较生鸡肉和速冻水饺MRSA菌株生物被膜形成能力强(p<0.05)。结果表明,96孔板法能够进行定性和定量检测生物膜的形成,而刚果红琼脂法只能定性检测生物被膜的形成,两者的定性检测结果存在一定的差异。通过96孔板法定量检测的结果表明食源性MRSA菌株普遍能形成生物被膜,其中存在一些生物被膜形成能力强的MRSA菌株,同时大部分MRSA菌株不依赖ica途径形成生物被膜,提示产肠毒素MRSA菌株形成生物被膜定植在食品加工过程的环境中,不易清除,成为食品安全中的潜在隐患。

绵羊大肠埃希菌生物被膜形成及相关基因的检测

检测绵羊大肠埃希菌中的XJ10生物被膜(biofilm,BF)形成情况并确定与BF形成相关基因的携带情况。采用96孔聚苯乙烯微孔板培养XJ10观察BF的形态和测定OD值分析XJ10BF在不同的时间段形成的情况,采用PCR方法检测BF 12种形成相关基因的分布情况。结果表明,在37℃,BF的OD值从2 h开始逐渐升高,24 h左右接近最高峰,维持至36 h后,OD值开始缓慢下降,直至72 h仍维持较高水平,在整个检测时间段内XJ10BF OD值显著高于对照组,且差异显著(P<0.05);6 h时BF形成初具形态,8 h^10 h呈现不完整的网格结构,12 h时BF形成较明显的网状结构,24 h^36 h形成有序的较为密集的网格结构,48 h后网状结构开始解离和脱落。同时在XJ10中检测到了其中8种与BF形成相关的基因,测序结果与GenBank公布的相应序列同源性为97.2%以上。试验表明XJ10具有形成BF的能力,但形成能力较弱,且携带8个与BF形成相关的基因。

食品中金黄色葡萄球菌生物被膜形成基因分析及影响因素研究

分析金黄色葡萄球菌食品分离菌株生物被膜形成相关基因,研究茶多酚和乳酸链球菌素(Nisin)对不同菌株生长及生物被膜形成的影响。以实验室保存的16株金黄色葡萄球菌食品分离菌株为研究对象,采用聚合酶链式反应(PCR)检测14种生物被膜形成相关基因;通过微孔板法研究不同浓度茶多酚和Nisin对不同菌株生长的抑制作用,确定最小抑菌浓度(MIC);在此基础上进一步研究茶多酚和Nisin对生物被膜形成能力影响。结果表明:14种生物被膜形成相关基因中有10种被检出,其中cna、ebp S、fib和ica AD基因检出率为100%,sas C为87.5%、fnb A为68.75%、sas G为68.75%、clf B为68.75%、eno为62.5%,ica BC为56.25%;16株菌株中均不携带bbp、bap、clf A和fnb B基因。16株菌株均能形成生物被膜,但形成能力有差异,其中F23、F44、F58、F64、F71、F86、F107和F109等8株菌株为被膜强形成菌株,F7、F19、F40、F46、F60、F99、F101、F106等8株菌株为被膜弱形成菌株。茶多酚和Nisin对16株金黄色葡萄球菌食品分离菌株的MIC范围分别为0.1~0.2 g/L和0.125~1 g/L,茶多酚和Nisin在1/2MIC和1/4MIC浓度下对生物被膜形成抑制作用明显(p<0.05),且茶多酚抑制效果强于Nisin。本研究结果为食品中金黄色葡萄球菌生物被膜形成控制具有参考意义。

替加环素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的清除作用

目的探讨不同浓度替加环素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的清除作用及其机制,为临床治疗及院感防控提供新思路。方法微量肉汤稀释法检测替加环素对MRSA的最低抑菌浓度(MIC)和最低生物被膜清除浓度(MBEC),结晶紫染色法检测亚抑菌浓度替加环素及亚生物膜清除浓度替加环素对MRSA生物膜的作用,RT-PCR法检测分析不同浓度替加环素作用下MRSA生物膜形成量与生物膜相关基因之间的相关性。结果亚抑菌浓度的替加环素(1/8、1/4、1/2、1MIC)对MRSA作用下可显著抑制MRSA体外生物膜形成,所有检测的菌株在亚抑菌浓度的替加环素作用下的生物膜形成能力均降低。亚生物膜清除浓度的替加环素对膜有微弱的消除作用,1/2、1/4、1/8MBEC替加环素的消除作用没有差异性(P>0.05)。生物膜形成量和其基因表达量存在一定的相关性。结论亚抑菌浓度、亚生物膜清除浓度的替加环素均可抑制MRSA生物膜的形成,菌株间存在差异性,不同浓度替加环素作用下产生的生物膜量有所不同,抑制比例也不同,生物膜形成量和其特定基因表达量存在一定的相关性。不同浓度替加环素作用于MRSA生物膜的机制比较复杂。

金黄色葡萄球菌的耐药性及生物被膜形成能力研究

为分析金黄色葡萄球菌的耐药情况及生物被膜形成能力,以70株金黄色葡萄球菌为研究对象。利用纸片扩散法分析其耐药谱,组合利用刚果红平板测试法和结晶紫染色法分析其生物被膜形成能力。应用PCR技术检测生物被膜形成相关基因,并分析这些菌株耐药谱与其生物被膜形成能力强弱之间的关系。结果表明:金黄色葡萄球菌菌株耐药情况较为严重,其中97.14%的菌株具有耐药性;所有菌株均能形成生物被膜,能形成强、中等与弱粘附生物被膜能力的菌株分别占71.43%、18.57%和10%;生物被膜相关基因fnbA、fnbB和clfB的检出率分别为57.14%、20.00%和44.29%;生物被膜形成能力强的菌株,其耐药谱更广,且对利奈唑胺的耐药率差异有统计学意义(p<0.05)。临床来源的金黄色葡萄球菌多重耐药性和生物被膜普遍存在,已成为食品安全中的隐患来源,研究结果为控制金黄色葡萄球菌感染提供理论依据。

抗菌肽抑制金黄色葡萄球菌的黏附及生物被膜形成研究

为了研究抗菌肽对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的生物被膜形成的影响,本试验检测了抗菌肽(T-La(FS)、RGD-T-La(FS)、T-La(S)、RGD-T-La(S))对金黄色葡萄球菌的生物被膜形成的抑制作用。通过对耐热核酸酶基因nuc以及生物被膜形成相关基因(icaA,fib)进行检测;检测抗菌肽对金黄色葡萄球菌生物被膜中胞外蛋白含量的影响;扫描电镜观察其生物被膜的形态及结构。结果表明金黄色葡菌球菌耐热核酸酶基因nuc以及生物被膜相关基因(icaA,fib)PCR结果为阳性;扫描电镜观察抗菌肽能够抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成;荧光定量PCR法结果表明,抗菌肽作用后降低金黄色葡萄球菌生物被膜基因的转录水平;抗菌肽能抑制金黄色葡萄球菌生物被膜胞外蛋白合成与分泌。因此,抗菌肽主要通过影响生物被膜胞外蛋白合成与分泌和相关基因转录水平来抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。

老年导尿管相关尿路感染生物被膜菌分布特征及生物被膜形成相关基因

目的 分析老年导尿管相关尿路感染(CAUTI)患者生物被膜菌分布,并探讨生物被膜形成相关基因与耐药性的关系。方法 选取2018年8月-2021年8月海口市中医医院196例老年CAUTI患者为研究对象,收集患者拔管后导尿管标本,分别筛选生物被膜菌株和相应浮游菌株;采用VITEK-32微生物自动分析仪鉴定菌种,并检测分离菌株对常用抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链式反应(PCR)法检测ebpA、gelE和fsrB基因表达。结果 196例CAUTI患者共培养分离病原菌384株,其中浮游菌株353株(91.93%),生物被膜菌31株(8.07%)。31株生物被膜菌在普通MH培养基和泊洛沙姆培养基上的耐药率比较,除头孢西丁和多西环素外,其余均有统计学差异(P<0.05)。生物被膜粪肠球菌ebpA基因阳性率高于相应浮游粪肠球菌,而gelE和fsrB基因阳性率低于相应浮游粪肠球菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 老年CAUTI患者生物被膜菌主要为粪肠球菌和金黄色葡萄球菌,其在泊洛沙姆培养基上的耐药性相比普通MH培养基具有显著差异;ebpA可能是粪肠球菌生物被膜形成的促进因子,而gelE和fsrB可能是生物被膜形成的抑制因子。

乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力及多位点序列分型分析

试验以55株乳源金黄色葡萄球菌为研究对象,通过结晶紫染色法分析其生物被膜形成能力,应用PCR技术检测乳源金黄色葡萄球菌的所携带的耐药基因和生物被膜形成相关基因。结果表明,55株金黄色葡萄球菌中34株生物被膜形成能力较强,17株生物被膜形成能力较弱,4株无生物被膜形成能力;55株细菌中17株(31%)携带mecA耐药基因,17株金黄色葡萄球菌分为9个ST型,均属于已发现的ST型,其中ST97和ST398为优势株。上述来源相近的金黄色葡萄球菌分型后,基本位于ST97和ST98两个大簇,说明该地区引起奶牛乳房炎的细菌型别相对较集中。生物被膜相关基因Ica A、Ica D、Ica R、Eno、Atl、aap、Bap和sig B基因的检出率分别为44%、36%、27%、89%、60%、42%、18%和25%。研究表明,乳源金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力较强,生物被膜形成能力较强的菌株均携带多个生物被膜形成相关基因,说明生物被膜的形成过程可能是受多个基因共同调节。

建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因信息分析及PCR检测方法

目的建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因物信息分析及PCR检测方法。方法用DNASTAR软件进行核苷酸多重序列比对和基因扩增技术,对某株(ATCC 19606)鲍曼不动杆菌全长生物膜合成基因片段进行扩增和测序,并通过其他菌株检测进行验证。结果鲍曼不动杆菌不同株中均存在与某株的生物膜合成基因高度同源的序列,相似度均达到97%以上。该生物膜合成基因蛋白中存在两个跨膜区,含有与生物膜形成相关的超家族保守功能结构域。所克隆的生物膜合成基因核苷酸和氨基酸序列相似性都为100%。所建立的基于生物膜合成相关基因PCR仅对鲍曼不动杆菌DNA模板呈阳性扩增结果,其检测灵敏度可达10 cfu/m l。对临床分离菌株的检测与临床生化鉴定结果一致。结论鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因存在于各株鲍曼不动杆菌中,其编码蛋白为膜蛋白与生物膜形成有密切关系。所建立的基于鲍曼不动杆菌生物膜合成基因PCR具有特异、敏感、稳定等优点,可用于临床实验室鲍曼不动杆菌感染的快速诊断以及各种医疗器械带菌状况的检测。

鲍曼不动杆菌生物被膜形成与相关基因的研究

目的 分析鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力与生物被膜相关基因之间的关系.方法 采用结晶紫染色法检测菌株生物被膜形成能力,并应用聚合酶链反应（PCR）方法检测菌株生物被膜相关基因的表达情况.结果 66.13％的鲍曼不动杆菌可形成生物被膜.生物被膜形成相关基因csuC、csuD、csuE、bap、bfms及aba I扩增阳性率分别为87.9％、91.1％、79.0％、50.8％、70.2％、60.5％.除csuC、abaI基因外,生物被膜形成能力阳性株csuD、csuE、bap、bfms基因阳性率高于生物被膜形成能力阴性株（P＜0.05）.结论 鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力与csuD、csuE、bap、bfms基因密切相关.

冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制机制

【背景】金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,易在食品及加工器具表面形成生物膜,引起食品腐败和疾病的传播,威胁食品安全。【目的】研究冬凌草甲素抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的作用机制。【方法】使用结晶紫染色法和扫描电镜观察冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制作用,刚果红平板法定性检测冬凌草甲素对细胞间多糖黏附素(polysaccharideintercellular adhesion,PIA)合成的影响,分光光度法测定冬凌草甲素对供试菌株胞外DNA(eDNA)释放量的影响,RT-PCR技术检测冬凌草甲素对供试菌株ica A、cid A、agr A和sar A基因表达量的影响。【结果】冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜形成有较强的抑制作用;冬凌草甲素能显著抑制PIA的合成,且呈浓度剂量依赖;冬凌草甲素能抑制供试菌株e DNA的释放量,其中1/4最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌16 h后,与对照组相比,e DNA的释放量降低了48.62%;冬凌草甲素可显著抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因的表达,其中1/2MIC的冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌16 h后,ica A、cid A、agr A和sar A基因的表达量分别比对照降低了91.6%、94.7%、77.6%和70.4%。【结论】冬凌草甲素通过抑制ica A和cid A基因的表达,影响PIA的合成和eDNA的释放,进而干预生物膜的形成。

和厚朴酚抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜形成

【目的】研究和厚朴酚(HNK)抑制MRSA生物被膜(BF)形成的作用机制。【方法】使用TTC法测定了HNK对供试菌株BF的形成和成熟BF的抑制作用;刚果红平板法定性检测了HNK对PIA合成的影响;分光光度法测定了HNK对供试菌株eDNA释放量的影响;RT-PCR技术检测了HNK对供试菌株icaA、cidA以及agrA基因表达量的影响。【结果】HNK对MRSA 41573 BF的形成和成熟BF均有较强的抑制作用,其中,HNK抑制MRSA 41573 BF形成的MIC和MBC分别为10μg/mL和20μg/mL;抑制成熟BF的MIC和MBC分别为50μg/mL和100μg/mL。当用亚抑菌浓度的HNK与万古霉素联合作用后,可显著提高成熟BF对万古霉素的敏感性。HNK能显著抑制PIA的合成,且呈浓度剂量依赖。HNK能抑制供试菌株eDNA的释放量,其中1/8 MIC的HNK作用供试菌株16 h后,与对照组相比,e DNA的释放量降低了28.3%。HNK可抑制供试菌株BF形成的相关基因,其中1/2 MIC的HNK作用供试菌株16 h后,与对照相比,icaA的表达量降低了59.1%,cidA的表达量降低了56%,agrA的表达量降低了72.3%。【结论】HNK能显著抑制MRSA 41573 BF的形成,其作用机制主要是通过抑制icaA和cidA基因表达量,影响PIA和eDNA的合成,进而抑制BF的形成。此外HNK也可通过调控细菌的QS系统影响BF的形成。

牛乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成与耐药性的研究

为探讨金黄色葡萄球菌生物被膜形成与耐药性之间的关系,本研究对分离于宁夏地区牛乳腺炎的50株金黄色葡萄球菌进行药敏试验,采用刚果红琼脂法检测金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力,同时用PCR方法对菌株的生物被膜相关基因进行检测。结果显示,金黄色葡萄球菌耐药情况严重,普遍存在多重耐药现象;受试菌株有36株菌（72%）为生物被膜阳性菌株,有14株菌（28%）为生物被膜阴性菌株;受试菌株生物被膜相关基因的检出率分别为icaA（96%）、sarA（76%）、fnbA（100%）、fnbB（100%）;生物被膜阳性菌株对大多数抗菌药物的耐药率高于生物被膜阴性菌株,但二者只对克林霉素的耐药率具有统计学意义（P〈0.05）。本研究结果表明,金黄色葡萄球菌生物被膜的形成机制复杂,生物被膜的形成在金黄色葡萄球菌的耐药性方面起到了一定的促进作用。

黄颡鱼暴发性出血病病原菌的分离鉴定及其生物膜形成特性

【背景】安徽省当涂县某池塘养殖黄颡鱼发生暴发性出血病,而当前对该病的病原存在争议。【目的】确定引起黄颡鱼暴发性出血病的病原菌,并明确分离菌株的生物膜形成特性,为从抗生物膜形成角度防治病原菌感染提供参考。【方法】取濒死期黄颡鱼病变脏器分别接种EPC细胞与培养基(TSB琼脂平板和血琼脂平板)分离病原,并通过人工感染回归试验确定其致病性;采用表型鉴定与16S rRNA基因序列分析相结合的方法鉴定分离菌株,并对其生物膜形成最佳条件、成膜能力及携带的生物膜形成相关基因进行研究。【结果】从病变脏器中分离纯化到一株优势菌株(HSY-2),对黄颡鱼的半数致死量为1.05×10^6 CFU/mL。经形态学、生化特性和细菌16S rRNA基因测序等分析确定分离株HSY-2为简达气单胞菌。其形成生物膜的最佳条件是将细菌接种TSB培养基于30℃培养静置96 h,可形成中等强度的生物膜。同时,分离菌株携带气单胞菌甘油-3-磷酸脱氢酶D编码基因glpD、S-核糖同型半胱氨酸裂解酶基因luxS和LuxI家族蛋白同系物编码基因ahyI三种生物膜形成相关基因,但未检测到甘露糖敏感型血凝素菌毛合成蛋白Q编码基因。【结论】本实验为进一步研究简达气单胞菌生物膜形成的调控机制打下基础,并且从抗生物膜形成角度防治简达气单胞菌感染提供了参考。