有氧运动对ApoE^(-/-)小鼠生物钟基因Cry1表达的影响及其抗动脉粥样硬化机制

目的观察有氧运动对ApoE^(-/-)小鼠主动脉生物钟基因Cry1表达的影响并探讨其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制。方法研究实施时间:2022年3月至2022年11月。22只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分成模型组(11只)和运动组(11只),运动组进行12周的跑台运动,每2周对小鼠称重并记录体质量变化情况。比色法测定血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度;组织化学染色法观察主动脉组织斑块形成及脂质沉积程度;real-time PCR和免疫组织化学染色检测主动脉管壁Cry1基因表达情况。采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果与模型组相比,运动组小鼠的体质量降低(P<0.01),血清LDL-C、TC、TG、IL-1β、IL-6、TNF-α含量下降(均P<0.01),HDL-C含量升高(P<0.01),主动脉斑块面积及脂质沉积情况减轻(均P<0.01),主动脉组织中Cry1基因mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.01)。结论有氧运动可以提高ApoE^(-/-)小鼠主动脉管壁生物钟基因Cry1的表达水平,降低血脂及相关炎性因子的浓度,并抑制动脉粥样硬化斑块的形成,提示有氧运动的抗动脉粥样硬化作用可能与其上调小鼠主动脉血管壁生物钟基因Cry1的表达有关。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马IL-6,TNF-α的影响

目的:通过观察生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠学习记忆、下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探索生慧汤改善学习记忆和睡眠障碍的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为模型组、正常组、褪黑素组、生慧汤高剂量组和生慧汤低剂量组。采用自主活动分析系统检测各组小鼠自主活动;采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习能力及空间记忆能力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠下丘脑区钟基因Bmal1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Bmal1蛋白表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马区IL-6,TNF-α含量;采用皮尔森(Pearson)分析方法分析IL-6,TNF-α与Bmal1的相关性。结果:自主活动结果显示,与正常组比较,模型组小鼠活动次数和活动路程显著减少(P <0. 01);与模型组比较,各给药组小鼠活动次数和活动路程均明显增加(P <0. 05,P <0. 01),生慧汤低剂量组无显著性差异。Morris水迷宫结果显示,与正常组比较,模型组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程显著延长(P <0. 01),穿越平台次数与目标象限时间显著减少(P <0. 01),第1次抵原平台时间明显增加(P <0. 05);与模型组比较,各给药组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程明显减少(P <0. 05,P <0. 01),穿越平台次数与目标象限时间明显增加(P <0. 05,P <0. 01),第1次抵原平台时间明显减少(P <0. 05,P <0. 01)。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1 mRNA表达上调;与模型组比较,各给药组小鼠Bmal1 mRNA表达下调。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1蛋白表达显著升高(P <0. 01);与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高、低剂量组Bmal1蛋白表达显著降低(P <0. 01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组小鼠IL-6,TNF-α含量显著升高(P <0. 01);与模型组比较,各给药组IL-6,TNF-α含量显著降低(P <0. 01)。Pearson分析结果显示,IL-6,TNF-α与Bmal1具有相关性,且呈负相关关系。结论:生慧汤可能通过上调下丘脑区Bmal1基因的表达来降低海马区炎症因子IL-6,TNF-α蛋白含量,从而改善阿尔兹海默症(AD)和昼夜节律紊乱。