Rab13 GTPase在大鼠睾丸中的表达及其与生精上皮周期的关系

目的初步明确Rab13 GTPase在大鼠精子发生及成熟过程中的表达情况和可能发挥的作用。方法首先通过RT-PCR技术检测了Rab13 GTPase在不同日龄大鼠睾丸组织中的表达,又利用RT-PCR和Western-blot检测了Rab13在大鼠不同组织中的表达情况,最后采用免疫组化技术检测Rab13 GTPase在大鼠不同期别生精上皮中的分布。结果 RT-PCR显示Rab13 GTPase mRNA水平在40日龄大鼠睾丸组织中表达达到最高峰;在40日龄大鼠,Rab13 GTPase在心、脑、肺、脾、睾丸等5种组织中均有表达,在肺组织中表达量最多;在精子细胞成熟过程中,Rab13在生精上皮基底部及生精细胞周围都有分布,在精子释放前则主要集中分布于生精上皮基底部。结论 Rab13 GTPase的分布,可能随生精上皮周期的变化而对精子发生过程具有一定的调节作用。

从江香猪生精上皮周期及睾丸发育的形态学分析

试验旨在探究初情期前后生精上皮周期差异及睾丸发育过程中的形态学变化。通过测定15、30、60和90 d睾丸相关指数,结合睾丸组织形态学特征,判断香猪初情期,划分从江香猪生精上皮周期。结果显示,30 d的睾丸指数较15 d极显著升高(P<0.01),睾丸重、长轴及短轴的增长率分别为298.05%、66.42%和65.45%,60和90 d两个阶段睾丸重增长率相对稳定。形态学观察表明,从江香猪30 d时生精小管出现游离精子,完成第一次生精并进入初情期;与15 d相比,30 d生精小管面积和生精上皮厚度极显著增加(P<0.01),增长率分别为136.12%和40.19%,在60和90 d均处于稳定增长状态。睾丸细胞数统计显示,日龄增加不影响支持细胞(setoli cells,SC)数量(P>0.05),而30 d生殖细胞数(germ cells,GC)较15 d极显著增加(P<0.01)。相关分析结果发现,生殖细胞数量增加与生精小管面积增大、生精上皮厚度变化之间呈明显正相关(r=0.994;0.96)。根据生殖细胞组合形式差异,将初情期前后生精上皮分为3和8个阶段。初情期前生殖细胞以第一次减数分裂前期为主,A、B型精原细胞、SC、初级精母细胞(primary spermatocyte,Ps)、前细线期(preleptotene,PI)、细线期(leptotene,L)等生殖细胞在初情期前后生精上皮中均存在,而圆形精子(round spermatids,R)、延伸精子(elongating spermatid,E)、精子细胞(spermatozoa,S)仅存在于初情期后的生精上皮。本研究结果表明,从江香猪30 d初情,睾丸发育以生殖细胞和生精小管面积的迅速增加为主,该结果对从江香猪早熟性状挖掘、种猪选育及开发利用等有重要的指导意义。

树鼩(Tupaia belangeri chinensis)精子发生的细胞学观察

对8只成体树鼩的睾丸进行了精子发生的细胞学和动力学观察。精原细胞可区分为A型和已分化定向的B型。生精上皮周期可分为12个连续阶段,不同阶段典型的细胞组合可被辨认。各阶段的相对持续时间以阶段Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的比率最高,分别为11.43,18.88、15.44;阶段Ⅸ、Ⅹ最低,为3.78和3.87。A型精原细胞在各阶段的数量分布并不保持恒定,阶段Ⅵ—Ⅷ和阶段Ⅸ时,分别出现两次成倍增长。B型精原细胞和前细线期精母细胞与每100个足细胞之比的平均值,在阶段Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ分别为28.89、76.98、196.91。精细胞经14步变态为成熟精子。精子形成过程中顶体发育的形态学变化及成熟精子的形态,与灵长类动物相比具有较多的类似之处;而同啮齿类动物相比,存在明显的形态差异。

羟基脲诱导大鼠生精细胞凋亡的研究

目的:探讨羟基脲(hydroxyurea,HU)诱导大鼠生精细胞凋亡发生的量效关系和时效关系。方法:量效关系研究中,雄性Wistar大鼠25只,分为5组,每组5只,4组为试验组,1组为对照组,4个试验组分别腹腔注射HU100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg,对照组给予磷酸盐缓冲液2ml/kg,给药后12h处死;时效关系研究中,雄性Wistar大鼠20只,分为4组,每组5只,3组均腹腔注射HU400mg/kg,1组为空白对照,分别于给药后6、12和24h处死大鼠。所有大鼠处死后称体重,取睾丸组织并称重,Bouin's液固定后,进行HE染色、原位细胞凋亡检测(TUNEL)、糖原PAS染色,光学显微镜下观察组织结构,计数凋亡细胞并进行生精周期阶段的分析。结果:给药后6、12、24h大鼠体重、睾丸重量与给药前相比,未见明显变化。量效关系研究中,大鼠生精细胞凋亡阳性小管所占比率和凋亡指数随着HU剂量的增加而明显增加,其中以400mg/kg为最高,分别为(38.7±2.0)%和(496.4±66.8)(P<0.01)。时效关系研究中,与对照组比较,给药后12h的每管凋亡阳性生精细胞数和凋亡指数达峰值,分别为(12.9±2.10)和(496.4±66.8)(P<0.01);TUNEL阳性细胞主要存在于生精周期的Ⅰ-Ⅳ时相。结论:HU诱导的大鼠睾丸生精细胞凋亡具有细胞特异性和阶段特异性。

獭兔睾丸组织形态观察

獭兔是一种典型的经济动物,它既是毛皮动物又可食用,普遍应用于人类生产生活。目前已有研究报道了多种哺乳动物生精周期研究,但很少有关于獭兔的报道。本实验对2只完全性成熟的健康獭兔进行睾丸结构,生精周期相对频率,支持细胞效率研究。獭兔睾丸经石蜡包埋,HE染色以便进行组织形态学观察。不同的生殖细胞组合分析显示30%的曲精小管显示两个或两个以上的生精上皮周期阶段。獭兔生精周期阶段频率(%)分别为:阶段1:(15.5±2);阶段2:(14.0±1);阶段3:(11.5±1);阶段4:(8.5±1);阶段5:(10.5±1);阶段6:(18.5±2);阶段7:(13.0±1);阶段8:(8.5±1)。支持细胞效率(圆形精子:支持细胞=7:1)。本研究结果表明獭兔的生精效率较其他哺乳动物高。