慢性复合应激对大鼠海马生长休止蛋白7表达的影响

目的探讨慢性复合应激对大鼠海马神经元中生长休止蛋白7(Gas7)的表达变化及意义。方法36只大鼠随机分为慢性复合应激组和正常对照组。复合应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学和免疫印迹等方法检测大鼠海马Gas7蛋白表达的变化和神经元凋亡情况。结果Gas7在对照组和实验组大鼠海马各区均有表达,主要表达在海马神经元的胞质和突起内。其中在CA1区和齿状回呈较强阳性表达,CA3区表达则较弱;慢性复合应激组CA1区和齿状回阳性染色加深,平均吸光度明显上升(P<0.05),而CA3区则不明显(P>0.05)。慢性复合应激组中部分切片在下托可见少量Caspase-3免疫反应阳性细胞。免疫印迹检测表明,慢性复合应激组大鼠海马Gas7表达明显增强,与正常对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论Gas7可能参与了在应激情况对神经元的保护作用,以及促进神经元的发生和发育。

生长休止蛋白7在大鼠小脑皮质发育过程中的动态表达

目的研究生长休止蛋白7(Gas7)在大鼠小脑皮质不同发育时期的动态表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Gas7mRNA在大鼠小脑皮质不同发育时期的表达;免疫组织化学方法观察Gas7蛋白在大鼠小脑皮质不同发育时期的表达和分布。结果 RT-PCR结果:Gas7mRNA在大鼠小脑皮质发育时期的表达呈现先增强后减弱的趋势,高峰出现在生后第21d(P21)。免疫组化实验结果:在胚胎第18.5d(E18.5)和E20.5仅Purkinje细胞层有Gas7免疫阳性产物分布;出生当天(P0)外颗粒层出现Gas7阳性神经纤维,Purkinje细胞层出现形态不规则的Gas7免疫阳性细胞;P7外颗粒层和Purkinje细胞层免疫反应增强,内颗粒层出现一些散在的Gas7强阳性细胞,胞体较小,突起清晰可见;P14小脑皮质4层均有Gas7阳性表达;P21小脑皮质3层Gas7免疫阳性反应较P14增强(P<0.01);Adult(2月龄)较P21免疫反应减弱(P<0.01)。结论 Gas7在大鼠小脑皮质发育过程中的动态表达呈现出时空特异性,提示Gas7基因在大鼠小脑皮质发育过程中可能起着重要的调控作用。

生长休止蛋白7在大鼠内嗅皮质发育过程中的表达

研究生长休止蛋白7（Gas7）在大鼠内嗅皮质（EC）不同发育阶段的表达。方法：采用免疫组织化学方法观察Gas7在SD大鼠胚胎第18．5天（E18．5d）、新生第0天（P0d）、P7、P14、P21和成年EC中的表达。结果：Gas7免疫阳性产物出现在E18．5d大鼠ECⅡ板层的表面，至P7d向Ⅱ板层内分布，并可见清晰的Gas7阳性细胞，Gas7免疫阳性产物表达于胞膜和胞质。到P14d，Gas7阳性细胞深染并向内扩散至Ⅵ板层，其中Ⅱ板层阳性细胞最密集，形态上以锥体样细胞和星形细胞多见。P21d大鼠内嗅皮质各板层Gas7免疫阳性反应均弱于P14d，至成年，Gas7免疫阳性细胞基本上局限于Ⅱ板层内，呈中等度着色。Gas7在围产期大鼠EC的表达呈现先增高后降低的趋势，最高点在P14d，至P21d其表达强度和分布接近成年水平。结论：Gas？在大鼠内嗅皮质发育过程中的表达呈现时空特异性，提示Gas7可能参与了内嗅皮质发育过程中结构形成和功能成熟的调控。

Gas7在大鼠斜角带核发育过程中的表达

目的研究大鼠发育过程中,生长休止蛋白7(growth arrest-specific protein 7,Gas7)在斜角带核(diagonal band nucleus,DB)的表达。方法应用RT-PCR方法、Western blot方法和免疫组织化学方法观察胚胎期16.5天(E16.5)、E20.5、出生当天(P0)、生后7天(P7)、P14、P21和2月龄(成年)大鼠DB的Gas7表达及定位。结果 RT-PCR和Western blot检测显示,在E16.5时Gas7表达最弱,其后逐渐增强,至P21时达到高峰;免疫组织化学染色显示,斜角带核水平支(horizontal limb of the diagonal band,HDB)在E16.5和E20.5时出现Gas7免疫反应阳性产物,Gas7阳性神经元出现于P0,至P21时阳性神经元数量最多,染色最深;斜角带核垂直支(vertical limb ofthe diagonal band,VDB)至P14时Gas7阳性神经元最多,P21和成年均有所减少。结论 Gas7的表达在大鼠DB发育过程中具有时间和空间上的特异性,提示Gas7可能参与大鼠DB的发育过程。

Gas7在大鼠关节软骨中的表达及意义

目的探讨生长休止蛋白7(Gas7)在成年大鼠关节软骨中的表达及意义。方法雄性SD大鼠(3个月、12个月)各12只。取膝关节和股骨上端关节部分,经脱钙石蜡包埋并切片,采用HE染色和免疫组化SABC法检测。检测各关节软骨组织中Gas7的表达及其定位。结果关节软骨切线层与移行层Gas7的表达呈现强阳性,而在辐射层及软骨钙化层则弱阳性或阴性。结论Gas7在成年大鼠关节软骨各层细胞的表达不同。

电针对脑缺血大鼠丘脑腹后外侧核神经生长因子和生长休止特定蛋白7表达的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血大鼠丘脑腹后外侧核(VPL)神经生长因子(NGF)和生长休止特定蛋白7(Gas 7)表达的影响,探讨电针治疗局灶性脑缺血继发性损伤的可能机制。方法:采用随机数字表法将48只SD大鼠分为正常组、假手术组、模型组和缺血后电针治疗组(简称电针组),每组12只。采用线栓法复制右侧大脑中动脉栓塞模型。电针组电针"百会"和左侧"足三里"穴,每天1次,每次30 min,连续21d。免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠右侧VPL中NGF和Gas 7的表达;尼氏染色法观察VPL神经元形态。结果:尼氏染色结果显示,正常组及假手术组右侧VPL结构清晰完整,胞核居中,核仁清楚;模型组VPL神经元染色较深,细胞核固缩;电针组神经细胞形态与正常组接近。免疫组织化学和Western blot检测结果一致,假手术组右侧VPL中NGF和Gas 7蛋白的表达与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,模型组缺血侧VPL中NGF和Gas 7蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组缺血侧VPL中NGF和Gas 7蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:局灶性脑缺血大鼠缺血侧VPL中NGF和Gas 7的表达增强,可能参与了机体代偿性恢复的某些过程;电针可上调缺血侧VPL中NGF和Gas 7的表达,可能是电针改善脑缺血继发性丘脑损害的机制之一。

电针对脑缺血大鼠海马CA3区NGF和Gas7表达的影响

目的:观察电针对脑缺血大鼠CA3区神经生长因子(NGF)和生长休止特定蛋白7(Gas7)表达的影响,分析其可能的保护机制。方法:24只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和造模后电针治疗组,采用线栓法复制右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。造模成功1周后,电针组给予电针"百会"和左侧"足三里"穴,每天1次,每次30 min,连续21 d。采用尼氏染色法观察各组缺血侧CA3区神经元形态,并用免疫组织化学方法检测CA3区NGF和Gas7的表达。结果:(1)尼氏染色结果显示正常组与假手术组CA3区神经元轮廓清晰、淡染;模型组CA3区神经元形态周缘不规则,细胞核固缩;电针组神经元形态与正常组接近。(2)免疫组化结果:正常组、假手术组大鼠海马CA3区NGF和Gas7的免疫反应阳性表达强度差异无统计学意义(P>0.05);模型组CA3区NGF和Gas7的免疫反应阳性表达比正常组增强(P<0.01);电针组CA3区NGF和Gas7的免疫反应阳性表达比模型组增强(P<0.01)。结论:电针可通过上调缺血侧海马CA3区NGF和Gas7的表达,对神经元起到一定保护作用。

Gas7在大鼠前额叶皮质发育过程中的表达

目的探讨生长休止特定蛋白7(Gas7)在大鼠大脑前额叶皮质发育过程中的表达及机制。方法采用免疫组织化学方法和免疫印迹(Western blot)方法检测Gas7在SD大鼠胚胎第18天(E18)、出生后P1(第1)、P7、P14、P21和P60各时期大脑前额叶皮质中的表达。同胞鼠1/2用于免疫组化实验,1/2用于Western blot检测。结果免疫组织化学方法显示,前额叶皮质在E18时即出现Gas7免疫阳性产物,Gas7免疫阳性神经元出现于P1-P60,P7时Gas7免疫阳性神经元轮廓已比较清晰,至P14时Gas7阳性反应最强,细胞突起也较长;之后,P21至P60时Gas7阳性反应逐渐减弱,均弱于P14(P<0.05)。Western blot检测显示,在E18时Gas7表达较弱,P1至P14Gas7表达逐渐增强,至P14时达到高峰,之后又逐渐减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Gas7在大脑前额叶皮质的表达具有时间和空间上的差异性,提示Gas7可能在前额叶皮质结构形成和功能成熟方面起着重要的调控作用。

电针对局灶性脑缺血大鼠基底外侧杏仁核前部Gas7和NGF表达的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血大鼠基底外侧杏仁核(Basolateral amygdala,BLA)前部生长休止特定蛋白7(growth arrest-specific protein 7,Gas7)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和电针组。采用线栓法复制大鼠脑缺血模型,造模成功后用电针刺激电针组“百会”穴和“足三里”穴,连续治疗14 d,免疫组织化学染色法检测大鼠右侧BLA前部的Gas7和NGF的表达。结果:假手术组Gas7和NGF阳性神经元数量以及平均灰度值与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);模型组Gas7和NGF阳性神经元数量与正常对照组相比增加(P<0.05),平均灰度值降低(P<0.05);电针组Gas7和NGF阳性神经元数量与模型组相比增加(P<0.05),平均灰度值降低(P<0.05)。结论:电针上调了脑缺血大鼠患侧BLA前部Gas7和NGF的表达,表明电针可能具有修复受损神经元的作用。

电针对局灶性脑缺血大鼠弓状核Gas7和NGF表达的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血大鼠弓状核(ARC)内生长休止特定蛋白7(Gas7)和神经生长因子(NGF)表达的影响,探究电针在局灶性脑缺血治疗中的可能作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为4组,即正常组(12只)、假手术组(12只)、模型组(14只)和电针组(12只)。模型组、电针组采用线栓法复制右侧大脑中动脉栓塞模型,假手术组切开颈部后缝合,不作其他处理。电针组予以电针"百会"和左侧"足三里"穴,每日1次,每次30 min,连续电针21 d;正常组、模型组及假手术组不予干预。用免疫组织化学方法和Western blot方法检测缺血侧ARC中Gas7和NGF的表达,并用尼氏染色法观察ARC的神经元形态变化。结果:正常组与假手术组ARC神经元形态无明显变化,模型组神经元细胞体积明显萎缩,细胞排列不规则,电针组ARC神经元形态趋近正常组;免疫组织化学方法和Western blot方法结果均显示,模型组大鼠ARC内Gas7和NGF免疫阳性神经元和蛋白的表达较正常组和假手术组明显升高,电针组二者的表达较模型组进一步增强(均P<0.05)。结论:Gas7和NGF在局灶性脑缺血中可能参与了机体的部分保护代偿过程;电针可上调弓状核内Gas7和NGF的表达,这可能是电针在治疗脑缺血过程中的神经保护机制之一。