长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向miRNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

目的探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型,实验分为正常对照(Con)组、高糖组(HG)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照(si-NC)+HG组(si-NC+HG组)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)+HG组(si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列(miR-NC)+HG组(miR-NC+HG组)、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物(miR-374a-3p mimics)+HG组(miR-374a-3p+HG组)、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-374a-3p)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)。qRT-PCR法检测LncRNA DLX6-AS1、miR-374a-3p表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β水平,双荧光素酶报告实验检测LncRNA DLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系,Western blot法检测人平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)、I型胶原α1链(COL1a1)、COL3a1蛋白表达量。结果转染si-LncRNA DLX6-AS1或miR-374a-3p mimic可降低TNF-α、IL-1β水平和α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白水平(P<0.05)。LncRNA DLX6-AS1可靶向调节miR-374a-3p表达。共转染anti-miR-374a-3p与si-LncRNA DLX6-AS1可恢复转染si-LncRNA DLX6-AS1对HG诱导的HK-2细胞炎症及纤维化作用。结论干扰LncRNA DLX6-AS1表达可通过上调miR-374a-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及纤维化。

长链非编码RNA DLX6-AS1调控微小RNA-15b和磷脂酶D1影响口腔鳞状细胞癌侵袭转移的分子机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(growth arrest specific protein 6-antisense RNA1,DLX6-AS1)对口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁组织中DLX6-AS1、微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)和磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)mRNA的表达水平。转染DLX6-AS1小干扰RNA至口腔鳞癌细胞HSC3,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell小室和Western印迹法(Western blot)检测抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达的影响。分别共转染miR-15b抑制剂或PLD1过表达载体与DLX6-AS1小干扰RNA至HSC3细胞,用上述相同方法观察抑制miR-15b或过表达PLD1对DLX6-AS1表达抑制的HSC3细胞增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证DLX6-AS1与miR-15b及miR-15b与PLD1的调控关系。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中DLX6-AS1和PLD1 mRNA表达水平升高(P<0.001),miR-15b表达水平降低(P<0.001)。抑制DLX6-AS1表达可降低HSC3细胞存活率、迁移和侵袭,以及MMP-2的蛋白表达水平(P<0.001),提高p21和E-cadherin蛋白表达水平(P<0.001)。抑制miR-15b表达或过表达PLD1均可降低抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的存活率、迁移和侵袭及P21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。DLX6-AS1在HSC3细胞中靶向负调控miR-15b,miR-15b靶向负调控PLD1。结论:抑制DLX6-AS1表达可能通过靶向调控miR-15b和PLD1轴抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

原发性膜性肾病患者外周血lncRNA GAS5-AS1、白细胞介素-27表达及与Treg/Th17平衡的关系

目的检测原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者外周血长链非编码RNA-生长停滞特异性转录本5反义RNA1(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5 antisense RNA1,lncRNA GAS5-AS1)、白细胞介素(interleukin,IL)-27表达,并分析其与患者调节性T细胞/辅助性T细胞17(regulatory T cell/T help 17cells,Treg/Th17)平衡的关系。方法选择2019年9月至2020年9月间河北以岭医院收治的PMN患者94例作为PMN组。另选取同期体检健康者96例作为对照组。收集所有研究对象外周血标本,实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法测定血清lncRNA GAS5-AS1水平、酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法测定IL-27、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)水平,流式细胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞比例,并计算Treg/Th17比值。Pearson法分析PMN患者lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平与IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、Treg/Th17的相关性。结果对照组血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)为(4.03±0.66)mmol/L,PMN组患者BUN为(6.52±1.05)mmol/L;对照组血尿酸(uric acid,UA)为(266.13±44.35)μmol/L,PMN组患者UA为(338.92±56.45)μmol/L;对照组胱抑素C(cystatin C,Cys C)为(0.72±0.12)mg/L,PMN组患者Cys C为(1.38±0.23)mg/L;对照组抗磷脂酶A2受体抗体(phospholipase A2 receptor antibody,PLA2R-Ab)为(9.37±1.92)RU/mL,PMN组患者PLA2R-Ab为(32.92±6.19)RU/mL;对照组24 h尿蛋白定量(0.11±0.02)g,PMN组患者24 h尿蛋白定量(7.96±0.94)g;对照组lncRNA GAS5-AS1为(1.02±0.17),PMN组患者lncRNA GAS5-AS1为(3.46±0.56);对照组IL-27为(62.71±10.44)ng/L,PMN组患者IL-27为(124.76±20.77)ng/L;对照组Th17为(0.75±0.12)%,PMN组患者Th17为(4.86±0.81)%;对照组Th17/Treg为(0.11±0.02),PMN组患者Th17/Treg为(1.43±0.23)。对照组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为(109.22±14.85)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1),PMN组患者GFR为(57.47±10.24)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1);对照组Treg水平为(6.42±1.07)%,PMN组患者Treg水平为(3.21±0.53)%。不同危险程度PMN患者Th17/Treg、IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平差异均有统计学意义(P<0.05);PMN患者外周血lncRNA GAS5-AS1与Th17/Treg、IL-17、TNF-α正相关(r=0.632、0.554、0.572,P<0.05),与IL-10负相关(r=−0.468,P<0.05);IL-27与Th17/Treg、IL-17正相关(r=0.581、0.602,P<0.05),与IL-10、TGF-β1负相关(r=−0.533、−0.436,P<0.05)。结论PMN患者血清lncRNA GAS5-AS1、IL-27均高表达,二者均调节Th17/Treg免疫平衡,在PMN中发挥重要作用,有望成为PMN的研究靶点。

系统性红斑狼疮患者血清学指标水平与病情严重程度的关系

目的 探讨血清血小板反应蛋白-1(TSP-1)、β2-微球蛋白(β2-MG)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、颗粒蛋白前体(PGRN)、同型半胱氨酸(Hcy)、生长停滞特异性基因6(Gas6)水平与系统性红斑狼疮患者病情的相关性,为临床后续治疗该疾病提供一定的参考依据。方法 回顾性选取2020年1月至2022年3月沧州市中心医院收治的系统性红斑狼疮患者98例作为观察组,根据系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)将其分为活动期组(51例,SLEDAI≥5分)和缓解期组(47例,SLEDAI <5分);并选取同期健康体检志愿者49例作为对照组。比较对照组和观察组研究对象血清TSP-1、β2-MG、HMGB1、PGRN、Hcy、Gas6水平;比较活动期组和缓解期组患者上述血清学指标水平;分析血清学指标与病情严重程度的相关性。结果 与对照组比,观察组患者血清TSP-1、β2-MG、HMGB1、PGRN、Hcy水平均升高,血清Gas6水平降低;与缓解期组比,活动期组患者血清TSP-1、β2-MG、HMGB1、PGRN、Hcy水平均升高,血清Gas6水平降低;血清TSP-1、β2-MG、HMGB1、PGRN、Hcy水平与系统性红斑狼疮患者病情严重程度均呈正相关(r=0.621、0.583、0.526、0.531、0.627),血清Gas6水平与系统性红斑狼疮患者病情严重程度呈负相关(r=-0.432)(均P<0.05)。结论 系统性红斑狼疮患者血清TSP-1、β2-MG、HMGB1、PGRN、Hcy水平与患者的病情严重程度存在显著的正相关关系,血清Gas6水平与其存在负相关关系,早期联合检测可对患者的病情进行判断,为临床后续治疗提供一定的参考依据。

参芪降糖胶囊联合地特胰岛素治疗妊娠糖尿病的临床研究

目的探讨参芪降糖胶囊联合地特胰岛素注射液治疗妊娠糖尿病的临床疗效。方法选取2022年2月—2024年1月在天津北大医疗海洋石油医院就诊的83例妊娠糖尿病患者,按随机数字表法将所有患者分为对照组(41例)和治疗组(42例)。对照组每日晚间皮下注射地特胰岛素注射液,1次/d,初始剂量10 UI/次,根据个体需要调整剂量。治疗组在对照组基础上口服参芪降糖胶囊,3粒/次,3次/d。两组患者持续治疗3个月。比较总有效率、血糖指标达标时间、血清炎症因子。结果治疗后,治疗组的总有效率为95.24%,对照组的总有效率为80.49%,组间比较差异显著(P<0.05)。治疗后,治疗组空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)达标时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组的空腹胰岛素(FINS)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)明显升高,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显降低(P<0.05),且治疗组的FINS、HOMA-β明显高于对照组,HOMA-IR明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组的血清亮氨酸丰富α2-糖蛋白1(LRG1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、生长停滞特异性蛋白6(GAS6)水平显著降低(P<0.05),且治疗组的血清LRG1、NLRP3、GAS6水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论参芪降糖胶囊联合地特胰岛素注射液可提高妊娠糖尿病的临床疗效,改善血糖和胰岛素功能,降低炎症反应。