长链的非编码RNA生长停滞特异性转录本5在骨关节炎中的研究进展

骨关节炎(OA)是一种以软骨退变、骨重建为主要病理特点的慢性关节疾病。目前没有可治愈该疾病的药物及手段,治疗策略有限的根本原因是对其潜在发病机制的认识不足。长链的非编码RNA(LncRNAs)被认为是许多疾病中的一类新的调控因子,是目前研究OA发病机制的一个重要切入点。LncRNA生长停滞特异性转录本5(Cas5)参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,是一种在软骨细胞中特异性高表达的LncRNA。然而,由于LncRNA Cas5作用机制复杂,其与OA相关具体分子机制目前仍不明确。该文针对LncRNA Cas5在OA中的软骨细胞凋亡、软骨基质代谢成骨分化及治疗方面的作用进行综述。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5在宫颈癌中的作用研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类由RNA聚合酶Ⅱ合成的含200多个核苷酸的RNA。LncRNA在多种恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要生物学功能。生长停滞特异性转录因子5(GAS5)为lncRNA的一种,可发挥肿瘤抑制作用,其在包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤中下调。本文就GAS5在宫颈癌中生物学功能的研究进展进行综述,旨在为宫颈癌的诊断、治疗及预后评估提供参考和方向。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5在妇科恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,已被证明广泛参与各种生理过程以及疾病病理状态。lncRNA生长停滞特异性转录本5(GAS5)作为其中一种lncRNA,能够抑制恶性肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化,促进细胞凋亡,在恶性肿瘤进展中发挥抑癌作用。lncRNA GAS5在宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌中显著低表达,与临床病理特征密切相关,其低表达常预示患者预后不良,并能通过不同作用机制参与妇科恶性肿瘤的发生、发展过程。lncRNA GAS5在宫颈癌和卵巢癌的诊断和治疗中已显示出一定的应用价值,未来可能成为研究热点之一。

子痫前期患者胎盘组织中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5表达水平及临床意义

目的检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2018年6月至2020年5月在监利市人民医院行剖宫产的50例非重度PE患者(非重度PE组)、50例重度PE患者(重度PE组)及50例正常妊娠孕妇(对照组)作为研究对象。分娩后收集胎盘组织,检测胎盘组织螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积;实时荧光定量聚合酶链反应法检测胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平;Pearson法分析PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5水平与螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积的相关性。结果与对照组比较,非重度PE组、重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平均升高,螺旋动脉管腔面积均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与非重度PE组比较,重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平升高,螺旋动脉管腔面积降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平与螺旋动脉管壁厚度存在正相关(r=0.485,P=0.000),与螺旋动脉管腔面积存在负相关(r=-0.614,P=0.000)。结论PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5高表达,可能通过影响螺旋动脉灌注影响PE的发生发展,对其水平进行检测有助于临床判断PE患者病情。

长链非编码RNA生长停滞特异基因5、微小RNA-34a在宫颈癌患者血清中的表达及其预后相关性

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)生长停滞特异基因5(GAS5)、微小RNA-34a(miR-34a)在宫颈癌患者血清中的表达及其预后相关性。方法选取2015年1月至2017年5月西北妇女儿童医院收治的121例宫颈癌患者(宫颈癌组)、137例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者(CIN组)以及103例子宫良性病变患者(对照组)作为研究对象。分析血清LncRNAGAS5、miR-34a水平与宫颈癌患者临床病理特征关系;分析影响宫颈癌患者预后生存状况的因素。结果与对照组比较,CIN组、宫颈癌组血清LncRNA GAS5、miR-34a水平均较低,差异具有统计学意义(P<0.05);与CIN组比较,宫颈癌组血清LncRNAGAS5、miR-34a水平均较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌患者血清LncRNAGAS5、miR-34a水平与病理分级、FIGO分期、间质浸润程度、淋巴结转移均有关(P<0.05)。与LncRNAGAS5高水平患者比较,Ln-cRNAGAS低水平患者生存率较低,总生存期较短,差异具有统计学意义(χ^(2)=8.383,Log-rank值为7.861,P<0.05);与miR-34a高水平患者比较,miR-34a低水平患者生存率较低,总生存期较短,差异具有统计学意义(χ^(2)=13.969,Log-rank值为13.173,P<0.05)。LncRNAGAS5低水平、miR-34a低水平、病理分级为低分化、FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移均是影响宫颈癌患者预后生存状况的独立危险因素(P<0.05)。结论宫颈癌患者血清LncRNAGAS5、miR-34a水平均较低,与患者临床病理特征密切相关,且两者呈负相关,可能为病情及预后评估提供临床参考依据。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5在糖尿病肾病进展中作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)在糖尿病肾病(DN)进展中的作用机制。方法选取10只健康5周龄大鼠为研究对象。将大鼠分为模型组与对照组,每组各5只。构建DN细胞模型,并分为LncRNA GAS5干扰组、LncRNA GAS5过表达组与阴性对照组。通过实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测LncRNA GAS5、miR⁃135a⁃5p及沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达水平。采用双荧光素酶报告实验验证miR⁃135a⁃5p与LncRNA GAS5、SIRT1之间的相互作用。结果模型组肾组织、血清外泌体、人肾小球系膜细胞(HMC)及上清外泌体中LncRNA GAS5表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲减或过表达LncRNA GAS5后,LncRNA GAS5过表达组HMC细胞中miR⁃135a⁃5p表达水平相应高于或低于阴性对照组,而SIRT1表达水平相应低于或高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。感染miR⁃135a⁃5p或转染siSIRT1后,LncRNA GAS5过表达组对HMC细胞增殖的抑制作用及对α⁃平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白、α(I)胶原表达的抑制作用均弱于阴性对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA GAS5可通过miR⁃135a⁃5p/SIRT1通路调控DN的进展。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录子5负调控核仁磷酸蛋白1对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA)生长停滞特异性转录子5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)负调控核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)对胃癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响。方法 选取正常人胃黏膜细胞系GES-1和人胃癌细胞系BG3-823、MGC-803、AGS作为研究对象,qRT-PCR法检测各细胞中LncRNA GAS5水平。诱导AGS细胞DDP耐药(AGS/DDP)后,将实验分为对照组、空质粒组(BC组)、GAS5无义干扰组(pLJM-GAS5NC组)、GAS5过表达组(pLJM-GAS5组),MTT法检测DDP对AGS、AGS/DDP细胞增殖能力的影响;Western blot法检测AGS、AGS/DDP细胞中NPM1、多药耐药基因1 (multidrug resistance 1,MDR1)、耐药基因切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)、多药耐药相关蛋白1 (multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、神经性钙黏附素(N-cadherin)水平。结果 与人正常胃黏膜GES-1细胞相比,人胃癌BG3-823、AGS细胞中LncRNA GAS5水平明显降低,其中AGS细胞中LncRNA GAS5水平最低,因此选择AGS细胞进行后续试验。与对照组相比,BC和pLJM-GAS5 NC组AGS细胞中LncRNA GAS5水平明显降低,NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平显著升高;与BC组和pLJM-GAS5 NC组相比,pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞中LncRNA GAS5水平显著升高,NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平显著降低;同浓度DDP(除0μmol/L外)处理后,与对照组相比,BC、pLJM-GAS5 NC组AGS/DDP细胞增殖抑制率明显降低;与BC、pLJM-GAS5 NC组相比,pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞增殖抑制率显著升高。DDP对pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞48 h的半抑制浓度(IC_(50))为(65.38±5.04)μmol/L,明显低于BC[(120.74±4.17)μmol/L]、pLJM-GAS5 NC组[(120.24±4.29)μmol/L]。结论 上调AGS/DDP细胞中LncRNA GAS5水平,可逆转AGS/DDP细胞耐药性,可能与下调NPM1的表达有关。

长链非编码RNA-GAS5靶向miR-29下调铜转运蛋白CTR1抑制肾脏纤维化的机制研究

目的研究长链非编码RNA-生长阻滞特异转录物5(GAS5)对肾脏纤维化的作用及机制。方法收集临床肾穿刺患者的组织标本,用原位免疫荧光方法检测GAS5在组织上的定位和表达情况;构建小鼠单侧输尿管梗阻肾脏纤维化模型,用原位免疫荧光方法检测GAS5在肾组织上的定位以及表达情况;用转化生长因子-β(TGF-β)刺激肾小管上皮细胞后,用Real-time PCR方法检测GAS5的表达水平;在肾小管上皮细胞中转染GAS5过表达质粒后,用Western印迹法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白3(Col3)、纤连蛋白1(FN1)、铜转运蛋白1(CTR1)和铜离子转运ATP酶α肽(ATP7a)的表达水平,用Real-time PCR方法检测miR-21、miR-29、CTR1和ATP7a的表达。在肾小管上皮细胞中过表达miR-29后,用Western印迹法检测CTR1的表达;在肾小管上皮细胞中过表达miR-21后,用Western印迹法检测ATP7a的表达。结果在不同肾脏纤维化模型中,GAS5均较对照组表达下调。在肾小管上皮细胞中,过表达GAS5抑制Col3和FN1的合成(P<0.05);过表达GAS5可上调miR-29的表达,并下调miR-21的表达(P<0.05)。miR-29在转录后水平抑制CTR1的蛋白表达(P<0.05),且过表达GAS5能够降低CTR1的蛋白表达(P<0.05);miR-21在转录后水平抑制ATP7a的蛋白表达(P<0.05),但过表达GAS5不影响ATP7a的表达。结论长链非编码RNA-GAS5通过上调miR-29,在转录后水平抑制铜转运蛋白CTR1,进而抑制肾脏纤维化。

血清lncRNA GAS5水平对肺炎支原体肺炎患儿严重程度的预测价值

目的研究血清长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)水平对肺炎支原体肺炎(MPP)患儿严重程度的预测价值。方法回顾性选取2019年10月至2021年10月海口市妇幼保健院收治的重症MPP(SMPP)患儿42例(SMPP组)和MPP患儿68例(MPP组)。选择同期在海口市妇幼保健院体检的健康儿童70名为对照组。实时荧光定量PCR检测血清中lncRNA GAS5表达。Pearson法分析lncRNA GAS5表达水平与白细胞计数、中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值、CPIS评分相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA GAS5对SMPP的预测价值。结果与对照组相比,MPP组、SMPP组白细胞计数、中性粒细胞绝对值、IgG、IgA、IgM水平较高,血清lncRNA GAS5相对表达水平、淋巴细胞绝对值较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MPP组相比,SMPP组CPIS评分、白细胞计数、中性粒细胞绝对值、IgG、IgA、IgM水平较高,血清lncRNA GAS5相对表达水平、淋巴细胞绝对值较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson法分析显示,lncRNA GAS5与CPIS评分、白细胞计数、中性粒细胞绝对值呈负相关(r=-0.441、-0.462、-0.507,P<0.05),淋巴细胞绝对值呈正相关(r=0.487,P<0.05)。ROC曲线显示,lncRNA GAS5诊断SMPP的AUC为0.867,其敏感度、特异度分别为82.40%、73.80%。结论MPP患儿血清中lncRNA GAS5表达下调,lncRNA GAS5对MPP患儿严重程度具有预测价值。

LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。

LncRNA GAS5对结直肠癌5-FU耐药的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)对结直肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的作用。方法 选取人结肠癌细胞系HCT-8和SW480,建立5-FU耐药细胞株,构建LncRNA GAS5过表达结直肠癌细胞模型。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测LncRNA GAS5在结直肠癌5-FU耐药细胞系中表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 RT-PCR检测显示,LncRNA GAS5在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中的表达水平低于正常结肠细胞,差异有统计学意义(P<0.05);LV5-GAS5组HCT-8细胞、SW480细胞中LncRNA GAS5表达高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验检测显示,LncRNA GAS5能明显抑制HCT-8细胞和SW480细胞的增殖(P<0.05)。AnnexinV/PI双重染色及流式细胞术结果显示,在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中LV5-GAS5组的细胞凋亡比例高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LncRNA GAS5在结直肠癌5-FU耐药中发挥重要作用,能抑制结肠癌细胞系的增殖,并促进细胞凋亡。

长链非编码RNA-GAS5竞争性结合miR-10调控SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-生长停滞特异性转录5(GAS5)竞争性结合微小RNA-10(miR-10)调控人子宫颈鳞癌(SiHa)细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法选取2021年1月至2022年1月在河北省唐山中心医院接受手术治疗的48例宫颈癌手术患者作为研究对象,提取所有研究对象的肿瘤样本和癌旁正常组织样本中的SiHa细胞,按照转染方式的不同将培养的SiHa细胞分为对照组、GAS5组、miR-10组、血小板反应蛋白(THBS)2组、GAS5+miR-10组和GAS5+miR-10+THBS2组。检测lncRNA-GAS5、miR-10和THBS2在其肿瘤样本和癌旁正常组织样本中的表达水平;采用Starbase、TargetScan数据库预测lncRNA-GAS5和miR-10及miR-10和THBS2的结合位点;检测转染lncRNA-GAS5和THBS2后SiHa细胞的吸光度(A)及侵袭细胞数。结果宫颈癌组织的miR-10表达水平高于癌旁正常组织,而宫颈癌组织的lncRNA-GAS5、THBS2表达水平低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。将lncRNA-GAS5过表达质粒转染进SiHa细胞后,lncRNA-GAS5组miR-10表达水平较对照组明显升高(P<0.05)。转染miR-10后,miR-10组SiHa细胞中的miR-10表达水平比转染前高(P<0.05)。lncRNA-GAS5的3′-UTR有miR-10的结合位点,miR-10在THBS2的3′-UTR上具有潜在的结合位点。相比对照组,miR-10组PMIR-GAS5-WT及PMIR-THBS2-WT野生型质粒荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。相比对照组,GAS5组和THBS2组SiHa细胞的A及侵袭细胞数降低,而miR-10组SiHa细胞的A及侵袭细胞数升高,差异均有统计学意义(P<0.05);相比miR-10组,GAS5+miR-10组SiHa细胞的A和细胞迁移细胞数降低,差异均有统计学意义(P<0.05);相比GAS5+miR-10组,GAS5+miR-10+THBS2组SiHa细胞的A和细胞迁移细胞数降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-GAS5能通过抑制miR-10上调THBS2的表达水平从而抑制宫颈癌细胞的生物学行为。

LncRNAGAS5通过miR-137/SIRT6轴抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建大鼠DCM模型,分为假手术(Sham)组和DCM组。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的病理变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测心肌组织LncRNA GAS5的表达情况。大鼠心肌细胞(H9c2)随机分为对照组、高糖组、高糖+GAS5组、高糖+miR-137 mimics组、高糖+miR-137 mimics+GAS5组、高糖+沉默调节蛋白6(SIRT6)组、高糖+SIRT6+miR-137 mimics组并进行相应处理。qRT-PCR检测LncRNA GAS5、miR-137的表达量;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、SIRT6蛋白表达量;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒8检测细胞活力;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNAGAS5与miR-137、miR-137与SIRT6的靶向作用。结果HE染色和Masson染色结果显示,与Sham组相比,DCM组心肌细胞肥大,排列紊乱,胶原纤维增多,大量炎性细胞浸润。与Sham组比较,DCM组LncRNAGAS5表达降低(P<0.01)。与对照组比较,高糖组LncRNAGAS5表达水平随高糖培养时间延长逐渐降低(P<0.01)。与高糖组比较,高糖+GAS5组LncRNAGAS5表达量、细胞活力、Bcl-2表达增加(P<0.05);miR-137、细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+miR-137 mimics组miR-137、Bax蛋白表达量、细胞凋亡率增加(P<0.05);细胞活力、SIRT6、Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05)。与高糖+miR-137 mimics组相比,高糖+GAS5+miR-137 mimics组细胞活力、Bcl-2表达增加(P<0.01);细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+SIRT6组细胞活力、Bcl-2、SIRT6蛋白表达增加(P<0.01);细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.01)。与高糖+SIRT6组比较,高糖+SIRT6+miR-137 mimics组细胞凋亡率、Bax蛋白表达量升高;细胞活力、Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实LncRNA GAS5和miR-137、miR-137和SIRT6存在靶向关系。结论过表达LncRNAGAS5可通过内源性竞争机制减少miR-137与SIRT6的结合,促进SIRT6表达抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡。

LncRNAGAS5在缺血性脑卒中的表达及临床价值

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)生长阻滞特异转录物5(GAS5)在缺血性脑卒中(IS)患者血清中的表达及临床价值。方法选取90例IS患者作为病例组,按照IS严重程度分为轻度组、中度组、重度组,每组30例;另选取同期健康体检者45例作为健康对照组。收集血清标本,提取总RNA,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定逆转录LncRNA GAS5,分析IS患者LncRNA GAS5相对表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性以及LncRNA GAS5对IS的诊断效能。结果qRT-PCR结果表明:LncRNA GAS5在健康对照组以及轻度组、中度组、重度组中的表达水平分别为(1.12±0.97)、(2.17±1.16)、(3.20±1.24)、(5.07±1.97),轻度组、中度组、中度组LncRNA GAS5表达水平高于健康对照组,且重度组LncRNA GAS5表达水平高于中度组和轻度组,中度组高于轻度组,差异均具有统计学意义(P<0.001)。经Pearson相关性分析表明,病例组患者LncRNA GAS5相对表达水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.63,P<0.01)。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析,LncRNA GAS5的曲线下面积(AUC)为0.893(0.836~0.950),灵敏度为93.3%,特异度为68.9%,截断值为1.18。结论IS患者与健康体检者取新鲜血清检测后发现,LncRNA GAS5表达在IS患者血清中出现明显升高,且患者病情越严重表达水平越高,因此可以将LncRNA GAS5表达水平作为IS的辅助生物诊断指标。

原发性膜性肾病患者外周血lncRNA GAS5-AS1、白细胞介素-27表达及与Treg/Th17平衡的关系

目的检测原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者外周血长链非编码RNA-生长停滞特异性转录本5反义RNA1(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5 antisense RNA1,lncRNA GAS5-AS1)、白细胞介素(interleukin,IL)-27表达,并分析其与患者调节性T细胞/辅助性T细胞17(regulatory T cell/T help 17cells,Treg/Th17)平衡的关系。方法选择2019年9月至2020年9月间河北以岭医院收治的PMN患者94例作为PMN组。另选取同期体检健康者96例作为对照组。收集所有研究对象外周血标本,实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法测定血清lncRNA GAS5-AS1水平、酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法测定IL-27、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)水平,流式细胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞比例,并计算Treg/Th17比值。Pearson法分析PMN患者lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平与IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、Treg/Th17的相关性。结果对照组血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)为(4.03±0.66)mmol/L,PMN组患者BUN为(6.52±1.05)mmol/L;对照组血尿酸(uric acid,UA)为(266.13±44.35)μmol/L,PMN组患者UA为(338.92±56.45)μmol/L;对照组胱抑素C(cystatin C,Cys C)为(0.72±0.12)mg/L,PMN组患者Cys C为(1.38±0.23)mg/L;对照组抗磷脂酶A2受体抗体(phospholipase A2 receptor antibody,PLA2R-Ab)为(9.37±1.92)RU/mL,PMN组患者PLA2R-Ab为(32.92±6.19)RU/mL;对照组24 h尿蛋白定量(0.11±0.02)g,PMN组患者24 h尿蛋白定量(7.96±0.94)g;对照组lncRNA GAS5-AS1为(1.02±0.17),PMN组患者lncRNA GAS5-AS1为(3.46±0.56);对照组IL-27为(62.71±10.44)ng/L,PMN组患者IL-27为(124.76±20.77)ng/L;对照组Th17为(0.75±0.12)%,PMN组患者Th17为(4.86±0.81)%;对照组Th17/Treg为(0.11±0.02),PMN组患者Th17/Treg为(1.43±0.23)。对照组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为(109.22±14.85)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1),PMN组患者GFR为(57.47±10.24)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1);对照组Treg水平为(6.42±1.07)%,PMN组患者Treg水平为(3.21±0.53)%。不同危险程度PMN患者Th17/Treg、IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平差异均有统计学意义(P<0.05);PMN患者外周血lncRNA GAS5-AS1与Th17/Treg、IL-17、TNF-α正相关(r=0.632、0.554、0.572,P<0.05),与IL-10负相关(r=−0.468,P<0.05);IL-27与Th17/Treg、IL-17正相关(r=0.581、0.602,P<0.05),与IL-10、TGF-β1负相关(r=−0.533、−0.436,P<0.05)。结论PMN患者血清lncRNA GAS5-AS1、IL-27均高表达,二者均调节Th17/Treg免疫平衡,在PMN中发挥重要作用,有望成为PMN的研究靶点。

长链非编码RNA生长阻滞特异转录物5／微小RNA 200c-3p／血管紧张素转换酶2信号轴参与呼吸窘迫综合征人肺上皮细胞A549的凋亡

目的探究长链非编码RNA生长阻滞特异转录物5／微小RNA200e-3p／血管紧张素转换酶2（1ncRNAGAS5／miR-200c-3p／ACE2）信号轴是否参与呼吸窘迫综合征（ARDS）肺上皮细胞的凋亡。方法构建ARDS大鼠模型，实验分为对照组（Control组）、LPS处理组（ARDS组）、LPS＋pcDNA处理组（ARDS＋pcDNA组）和LPS＋pcDNA-GAS5处理组（ARDS＋pcDNA-GAS5组）。ARDS大鼠构建6h后收集4组大鼠动脉血及肺组织，血气分析仪进行测定氧分压（PaO2）和二氧化碳分压（PaCO2），并观察GAS5的表达变化。随后，用LPS处理人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549，分为未处理、LPS、LPS＋pcDNA、LPS＋pcDNA-GAS5、LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC和LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c．3pmimic组。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测lncRNAGAS5、ACE2和miR-200c-3p的表达水平；RNA免疫沉淀和RNA下拉（pull-down）实验用于检测GAS5与miR．200c-3p的结合与调控：Westernblotting法检测ACE2的蛋白表达；流式细胞术用于检测A549细胞的凋亡。组间数据比较采用t检验。结果ARDS大鼠实验表明与ARDS＋pcDNA组相比，ARDS＋pcDNA-GAS5组P0，值显著升高[（81．5±3．3）比（57．5±5．1）mmHg，t=4．850，P〈0．05]，PC02值显著降低[（50．6±1．9）比（64．0±1．9）mmHg，t=5．940，P〈0．05]。细胞实验中，与Control组相比，LPS组A549细胞中IncRNAGAS5的表达显著下降（0．43±0．01比1．01±0．01，t=0．242，P〈0．05）。与LPS＋pcDNA组相比，LPS＋pcDNA-GAS5组ACE2的表达水平显著升高（0．85±0．04比0．34±0．02，t=1．800，P〈0．05）：与LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC组相比，LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c-3pmimic组ACE2的表达水平显著降低（0．62±0．01比0．84±0．02，t=9．440，P〈0．05）。与未处理组相比，LPS组A549细胞凋亡百分比明显升高（25．90±0．61比7．90±0．22，t=0．257，P〈0．05）；与LPS＋pcDNA组相比，LPS＋pcDNA-GAS5组凋亡百分比明显降低（10．50±0．37比26．37±0．45，t=1．760，P〈0．05）；与LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC组相比，LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c-3pmimic组细胞凋亡百分比显著升高（19．07±0．56比10．87±0．26，t=0．643，P〈0．05）。结论ARDS模型中，lncRNAGAS5下调促进miR-200c-3p表达，使ACE2表达下降，从而使肺上皮细胞凋亡增加，促进ARDS进展。

lncRNA GAS5通过靶向miR-221抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究lncRNA生长停滞特异性转录因子(GAS)5在骨肉瘤(OS)细胞U2OS中的表达,并深入探讨GAS5对OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法qRT-PCR检测U2OS细胞中GAS5和miR-221的表达;噻唑蓝(MTT)和Transwell小室法分析U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Starbase软件预测GAS5和miR-221的靶向关系,之后采用双荧光素酶报告实验和qRT-PCR分析加以验证。结果与hFOB1.19组相比,GAS5在U2OS细胞中明显低表达;通过在U2OS细胞中转染pcDNA-GAS5可高效过表达GAS5;外源过表达GAS5可抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力;GAS5能够与miR-221通过互补位点相互作用;与hFOB1.19组相比,miR-221在U2OS细胞中明显高表达,且外源过表达miR-221可逆转GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论GAS5通过降低miR-221表达抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力,在骨肉瘤中发挥抑癌作用。