氦氖激光对人胚腱细胞生长分泌的影响

目的 阐明氦氖激光促进人胚腱细胞增殖及分泌胶原的机制。方法 将传代培养的人胚腱细胞分为对照组、照射 1日组、照射 3日组及照射 5日组。在氦氖激光照射的不同时相点 ,分别测定细胞DNA含量 ,cAMP水平及胶原分泌量。结果 在氦氖激光作用早期 (1～ 3日 ) ,细胞cAMP水平与DNA合成均呈明显升高 (P <0 0 5 ) ,细胞内信使物质合成及细胞增殖加快 ,但胶原分泌无变化 ,而在氦氖激光作用晚期 (3～ 5日 ) ,当cAMP水平及DNA合成都不再改变时 ,腱细胞分泌胶原量显著增加 (P <0 0 1)。结论 氦氖激光可能通过作用于cAMP蛋白激酶A信号转导系统 ,从而调控人胚腱细胞增殖及胶原分泌。提示临床应用氦氖激光促进肌腱愈合宜从早期开始 。

Epac在生长激素分泌性垂体腺瘤细胞中过表达并促进其对奥曲肽耐药的分子机制研究

目的探索生长激素分泌性垂体腺瘤(GHPAs)对奥曲肽耐药的分子机制。方法收集临床GHPAs患者肿瘤及旁侧正常组织标本各10例。采用qPCR法、Western blot法和免疫组织化学(IHC)法检测上述各10例标本中cAMP直接激活的交换蛋白(Epac)的表达情况。在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中过表达Epac。CCK-8法测定过表达Epac前后及给予奥曲肽处理前后细胞增殖能力的变化;ELISA测定细胞分泌生长激素(GH)情况的变化;qPCR法和Western blot法测定细胞中SSTR2和ZAC1表达水平的变化。慢病毒转染GH3细胞过表达Epac并进行BALB/c裸鼠荷瘤实验,测定过表达Epac前后及给予奥曲肽治疗前后,裸鼠荷瘤增殖能力的变化;Western blot测定促肿瘤增殖关键通路蛋白Ras-1和ERK1/2的表达情况变化。结果针对临床标本的研究,相较于旁侧正常组织,GHPAs组织中Epac mRNA和蛋白质表达水平均明显升高(P<0.05)。体外(in vitro)细胞水平实验,与pcDNA3.1组GH3细胞相比,pcDNA3.1+octreotide组GH3细胞增殖能力明显降低,GH分泌量明显下调,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平明显升高(P<0.05);而pcDNA3.1-Epac组GH3细胞增殖能力明显升高,GH分泌量明显增加,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平被明显抑制(P<0.05)。与pcDNA3.1-Epac组相比,pcDNA3.1-Epac+octreotide组GH3细胞增殖能力,GH分泌量,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平均无明显差异(P>0.05)。在体(in vivo)裸鼠荷瘤实验,与pSLenti组相比,pSLenti+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量明显较小,Ras-1和ERK1/2的表达被明显抑制;pSLenti-Epac组的荷瘤体积和质量明显较大,上述两种蛋白质的表达明显升高(P<0.05)。与pSLenti-Epac组相比,pSLenti-Epac+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量,以及Ras-1和ERK1/2的表达没有明显变化(P>0.05)。结论临床部分GHPAs患者出现对奥曲肽的耐药性,其可能的分子机制为肿瘤细胞通过上调Epac,以抑制SSTR2和ZAC1的表达,并增强Ras-1和ERK1/2的表达,实现其高速增殖和对奥曲肽的耐药性。

生长激素释放肽及其受体的异常表达在肿瘤诊治中的应用

生长激素释放肽(ghrelin)是一种胃源性肽,也被称为饥饿素,可刺激垂体释放生长激素,是一种调节能量代谢的关键多肽,以酰基化生长激素释放肽与无活性的非酰基化生长激素释放肽两种形式存在。酰基化的生长激素释放肽与生长激素促分泌素受体结合,介导多种生理功能。除了刺激食欲增加食物摄入的作用外,生长激素释放肽还可以保护心脏功能,防止肌肉萎缩,增加骨密度,调节应激与焦虑,抑制炎性细胞因子产生,生长激素释放肽及其受体成为多种疾病的潜在治疗靶点。近年来,越来越多的研究证明生长激素释放肽及生长激素促分泌素受体在多种肿瘤中异常表达,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、自噬等功能产生直接作用;也可通过调节炎症反应、雌激素产生和代谢的间接作用,与肿瘤的发生与发展密切相关。生长激素释放肽及其受体异常表达可作为多种肿瘤诊断、疗效预测和预后评估的标志物。靶向生长激素释放肽药物也逐渐被研发,并在抗肿瘤和肿瘤患者支持治疗的临床前研究和临床试验中显示了良好疗效。本文将讨论生长激素释放肽及受体在肿瘤发生发展中的作用及其作为肿瘤标志物与治疗靶点的潜力,并对其相关药物在肿瘤患者中的应用进行综述。

黄鳝胃肠的生长抑素分泌细胞及超微结构

在肠卷石蜡法切片上 ,用ABC免疫组织化学方法 ,显示消化管全长的生长抑素分泌细胞 (又称D细胞 ) ,结果只在胃体部显现 ,主要散在分布于胃腺中 ,个别出现在粘膜上皮。消化道内分泌细胞根据基部有否胞质突起 ,可分为 4种类型 ,在黄鳝胃中均有 ,其中Ⅲ型数量最多 ,Ⅰ、Ⅳ型次之 ,而Ⅱ型数量最少。由于产生生长抑素的D细胞在消化道内分泌细胞中作用多并且类型复杂 ,故黄鳝胃还是一个十分重要且复杂的内分泌器官。应用透射电镜 ,对黄鳝的胃肠作超薄切片观察显示在胃腺上皮细胞内含大量的微管泡系和一定量的酶原颗粒 ,表明其兼有泌酸及产生酶原的功能 ,属泌酸胃酶细胞。在肠上皮细胞游离面 ,含有大量微绒毛 ,但幼鳝比成鳝的长、密且整齐 ,提示幼鳝的肠上皮比成鳝有更强的吸收能力。

生长激素促分泌素受体(GHS-R)的发现及影响

生长激素的分泌不仅受到GHRH、SRIF的调节 ,还受到GHS R及其配体GHS的作用。本文综述了GHS R的发现背景、结构特点以及生理功能 ,讨论了GHS R促GH分泌的分子机制及其对多种组织器官可能影响 ,同时还探讨了除Ia和Ib亚型外还存在其它GHS R亚型的可能性。

苜蓿根瘤菌溶磷和分泌植物生长素能力研究

对甘肃庆阳、天水、定西、武威和甘南5个不同生态区域栽培的陇东苜蓿和阿尔冈金苜蓿根瘤菌资源进行调查、分离和纯化,获得730多个分离物。分离物回接到原宿主植物检测其促生能力,筛选出29个较好的根瘤菌株,对其溶磷、分泌植物生长素能力进行了初步研究。结果表明,供试菌株都能够溶解有机磷(蛋黄卵磷脂EYPC),而不能溶解无机磷[Ca3(PO4)2];均能够分泌植物生长素(IAA),其中34.5%分泌能力较强,55.2%分泌能力中强,10.3%分泌能力较弱,分泌IAA的菌株数量比率高于禾本科根际分泌IAA菌株数量比率。

大口黑鲈生长激素促分泌素cDNA结构和早期发育阶段表达谱分析

研究采用RT-PCR、RACE和PCR技术从大口黑鲈胃组织中克隆得到ghrelin基因的cDNA。该基因全长434bp,其中开放阅读框(open reading frame,ORF)321bp,编码107个氨基酸的前肽,20个氨基酸的成熟肽位于第27位到第46位氨基酸处。前肽和成熟肽的氨基酸与已报导的舌齿鲈进行同源性分析,相似性分别为85%和90%。为进一步了解ghrelin基因在鱼体早期发育阶段的表达,本实验采用实时定量PCR(real-time PCR)方法检测了ghrelin基因在大口黑鲈胚胎和仔鱼发育过程的表达谱。结果显示,ghrelin基因在受精卵时期就有少量表达,但直到体节出现之前表达量均较低。出膜第4天ghrelin基因出现大量表达,第12天ghrelin基因表达量更显著增加,出膜第4天和第12天的表达量分别是受精卵时期表达量的206.77倍和531.20倍。出膜第4天正是大口黑鲈仔鱼"开口觅食期",仔鱼消化系统初步发育成型,由完全利用卵黄囊营养转为从外界觅食阶段,到出膜第12天,仔鱼消化系统已发育完善,完全依靠外界营养提供能量,由ghrelin基因的表达量变化可推测其可能参与了鱼类早期发育阶段的摄食调节。

生长激素促分泌素受体对小鼠结肠动力的影响和机制

目的:探讨生长激素促分泌素受体及其激动剂GHRP-6对小鼠结肠动力的影响及机制。方法:小鼠随机分组后,分别注射生理盐水、GHRP-6(20、50、100、200μg/kg),用炭末推进实验的方法研究GHRP-6对小鼠结肠推进的影响。小鼠近端结肠环形平滑肌条安置在恒温灌流肌槽中,并用SMUP-E生物信号处理系统记录肌条的自发收缩活动,观察不同浓度的GHRP-6(0.01、0.1、1和10μmol/L)对肌条自发收缩幅度的影响,以及神经阻断剂TTX和GHS-R阻断剂D-lys3-GHRP-6孵育肌条情况下,GHRP-6对肌条自发收缩幅度的影响。结果:GHRP-6注射剂量在50、100、200μg/kg时均能显著提高小鼠的结肠推进(P<0.05)。GHRP-6浓度在0.1、1和10μmol/L时均能显著增加小鼠近端结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度(P<0.05),在TTX和D-lys3-GHRP-6孵育肌条下,Ghrelin不能增加小鼠结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度。结论:GHRP-6可以显著增加小鼠的结肠推进,其机制可能是通过肠肌间神经丛的的GHS-R受体而起作用。

丹参对体外培养成纤维细胞自分泌生长因子的影响

目的 探讨丹参作用于成纤维细胞 ,减轻创面过度愈合的作用机制。方法 体外培养的成纤维细胞第4～ 6代 ,经不同浓度丹参 (40、80、1 60和 32 0μg/ ml)及不同时间 (1、2、3、4和 5天 )培养后 ,加入丹参 (浓度 60μg/ ml)作用后 ,采用 ELISA法和放射免疫法测定其自分泌转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )及表皮生长因子 (EGF)的变化规律。 结果 丹参可抑制成纤维细胞自分泌 TGF- β1 ,且随浓度的增大及作用时间的延长而增强 ,具有统计学意义 (P<0 .0 5) ;但对EGF的自分泌无抑制作用 (P>0 .0 5)。 结论 丹参可选择性抑制 TGF-β1 的自分泌 ,抑制成纤维细胞的增殖及减少细胞外基质的沉积 。

9种WADA禁用生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测及尿中稳定性研究

目的:选取世界反兴奋剂机构(WADA)禁用的7种生长激素释放肽(GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Hexarelin和Alexamorelin)和2种生长激素促分泌素(Anamorelin和Ipamorelin)为研究对象,建立人尿中的HPLC-MS/MS检测方法,进行稳定性实验。方法:使用Oasis?WCX固相提取小柱(1cc,30mg)对尿样进行化学前处理,尿样加入内标后离心,取1m L加入小柱,依次用5%NH4OH和20%CH3CN清洗后,用含2%甲酸的水/乙腈(1/3)洗脱液洗脱,35℃氮气流下吹干,复溶后进样于LC-MS/MS。使用1290/6470液相色谱质谱仪和Zorbax 300SB-C18色谱柱进行定性分析,流动相采用含0.2%甲酸的水/乙腈体系。结果:检测限根据不同物质分布在0.01~0.5 ng/m L(S/N>3)。回收率分布在40%~76%之间,日内精密度和日间精密度均小于15%,尿中基质无明显干扰。室温,冷藏条件储存和反复冻融对Anamorelin、GHRP-2、GHRP-4和GHRP-5有明显影响。结论:建立了尿中9种生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测方法,方法简单,特异性、灵敏度均可满足WADA实验室国际标准和技术文件要求。现已应用于我实验室的常规检测。尿样在传送、检测及实验室长期保存过程中应尽量避免反复冻融。

神经内镜辅助经蝶显微手术对分泌生长激素的脑垂体腺瘤患者生长激素及预后的影响

目的分析神经内镜辅助经蝶显微手术对分泌生长激素(growth hormone,GH)的脑垂体腺瘤患者GH及预后的影响。方法选择2008年2月—2015年7月邢台市人民医院收治的采用神经内镜辅助经蝶显微手术治疗的分泌GH的脑垂体腺瘤33例作为研究组,另选择该院同期资料匹配采用经蝶显微手术治疗的分泌GH的脑垂体腺瘤33例作为对照组。统计比较两组手术情况、肿瘤切除率、手术前后GH水平、并发症发生率及疾病复发率。结果研究组手术时间长于对照组,术后卧床时间及住院时间均短于对照组,肿瘤完全切除率高于对照组,总并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。手术前两组GH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);手术后两组GH水平均较手术前显著改善,且研究组明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后1年随访,两组疾病复发率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论神经内镜辅助经蝶显微手术治疗分泌GH的脑垂体腺瘤效果显著,可缩短术后卧床及住院时间,改善GH水平,提高肿瘤完全切除率,且总并发症发生率较低。

生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

目的建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板,用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础。

生长激素促分泌素受体-1a基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的表达

目的观察生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨GHSR-1a基因在脂肪细胞分化中的作用。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0-8天),通过形态学观察、油红O染色测定脂肪细胞分化程度及脂滴积聚情况,化学比色法测定脂肪细胞三酰甘油(TG)总量,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脂肪细胞中GHSR-1a基因mRNA的表达水平。采用SPSS12.0软件进行组间t检验。结果3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化前呈梭形的成纤维细胞形态,胞浆内无脂滴;诱导分化后细胞逐渐由梭形变为圆形,胞体变大变圆,胞浆内出现明显的脂滴。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化第4天细胞内TG水平已明显升高,第8天TG水平升高更加明显,与前脂肪细胞相比均有显著统计学意义(Pa<0.01)。同时GHSR-1a基因mRNA低表达于3T3-L1前脂肪细胞和分化第1天的脂肪细胞,随着3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,分化第4天和第8天GHSR-1a基因mRNA的表达逐渐增加,GHSR-1a基因的表达水平除在诱导分化第0-1天和第1-4天内差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点表达水平比较均有统计学意义(Pa<0.05)。结论3T3-L1脂肪细胞分化过程中GHSR-1a基因表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程一致,可能参与了脂肪细胞分化过程。

刺槐根瘤菌溶磷和分泌植物生长素特性的研究

采用溶磷圈法、钼锑抗比色法和Salkowski比色法,对分离自陕西6个区(县)的25株刺槐根瘤菌菌株进行了溶磷和分泌植物生长素(IAA)能力的定性和定量测定。在溶磷能力的定性测定中,菌株SLCH171对有机磷和无机磷的溶解能力均最强;在定量测定中,菌株SLCH171对有机磷的溶解能力最强,SLCH184对无机磷的溶解能力最强,有10株菌既能溶解无机磷又能溶解有机磷。分泌IAA测定显示,有21个菌株具有分泌IAA的能力,以SLCH184的分泌能力最强;各菌株分泌IAA能力的定量测定结果与定性测定结果基本相符。

Ghrelin,一个促生长激素分泌及调节能量代谢的新多肽

Ghrelin是一个由 2 8个氨基酸组成的多肽 ,3位丝氨酸上有酰化基团。它是第一个被发现的生长激素促分泌剂受体 (GHS R)的内源性配体。Ghrelin主要由胃分泌 ,下丘脑、肾脏、胎盘均有分泌。GHS R分布在多种组织 ,而且有不同的亚型 ,它有很强的促生长激素 (GH)释放的作用 ,可使循环中GH迅速、显著而持久地增加 ,甚至比生长激素释放激素的作用还强。Ghrelin是促进食欲的脑肠肽 ,参与下丘脑。

神经内分泌生长轴及其对畜禽的生长调控

畜禽的生长发育受到神经内分泌生长轴的调控，其生长发育要依赖下丘脑一垂体一靶器官通路来完成：下丘脑接收并整合体内外传入的信息，通过分泌生长激素释放激素（growthhormonereleasinghormone，GHRH）和生长抑素（somatostatin。ss），以双重作用于垂体，控制生长激素（growthhormone，GH）的分泌；GH经血液循环至肝脏，与细胞膜表面的生长激素受体（growthhormonereceptor，GHR）结合，启动细胞内的信号转导机制，促进类胰岛素生长因子（insulin—likegrowthfactors，IGFs）的表达；IGFs再通过血液循环到达机体的局部组织，促进组织细胞的生长和分化。

白血病细胞自分泌生长特性研究

正常造血细胞的增殖分化是在一系列特定造血生长因子(CSF)调控下进行的,而白血病细胞却能无限制地恶性增殖。目前已有资料提示,白血病细胞可以合成它自身增殖所需的生长因子(自泌素),从而失去对外源性刺激因子的依赖性,这可能是其恶性增殖的方式之一。本文就白血病细胞自泌素产生能力、自泌素来源以及抗GM-CSF抗体中和自泌素的作用进行了实验研究,以探讨白血病细胞自分泌生长的生物特性,寻求白血病患者生物治疗的理论依据。