早期生长反应基因1启动子介导肿瘤基因-放疗的研究进展

早期生长反应基因1（Egr-1）启动子为Egr-1上游的顺式作用元件,其活性受电离辐射、自由基等诱导剂的调控.Egr-1与治疗基因结合（如肿瘤坏死因子α基因、自杀基因等）构成基因-放射治疗体系,利用辐射在肿瘤局部从时间、空间调控治疗基因的表达,使表达产物局限于肿瘤局部发挥肿瘤杀伤效应,并降低了不良反应.放射治疗与基因治疗的结合为肿瘤治疗提供了新方法.

促肝细胞生长素对大鼠肝星状细胞增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响

目的:探讨促肝细胞生长素(pHGF)对大鼠肝星状细胞HSC-T_6增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响。方法:(1)采用MTT法分析pHGF对HSC-T_6细胞增殖的影响。(2)构建含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列(启动子)与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体 pCOLH1.5,以脂质体法转染HSC-T_6细胞,ELISA法测定不同浓度pHGF作用24 h后,转染了重组体质粒的HSC-T_6细胞的CAT表达量。结果:(1)不同浓度pHGF对HSC-T_6细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。(2)pHGF在200 μg/ml时对转染重组体质粒pCOLH1.5的HSC-T_6细胞的CAT活性具有明显的抑制作用,与对照组相比差异显著(P<0.05);增加pHGF浓度至400μg/ml时,对CAT活性抑制更为明显,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。结论:pHGF对HSC-T_6细胞增殖具有明显的抑制作用;对α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性具有负性调控作用。

生长素基因家族及其启动子、反应因子的研究进展

综述了3个生长素基因家族及其相关蛋白、启动子和反应因子的结构、功能以及表达特性,并对生长素的研究趋势进行了分析。

FOXP3基因启动子区甲基化与肾移植术后Th1/Th2水平和排斥反应的相关性分析

目的:分析FOXP3基因启动子区甲基化与肾移植术后Th1/Th2水平及排斥反应的相关性。方法:将2010年至2019年12月于新疆医科大学第一附属医院行肾脏移植治疗的120例患者纳入研究,根据患者术后3个月是否出现急性排斥反应(AR)将其分为AR组及Non-AR组,比较两组患者基线临床资料,辅助性T细胞1(Th1)、Th2、Th/Th2及FOXP3基因启动子区甲基化水平,采用多因素Logistic回归模型对影响AR的因素进行分析,并采用Pearson相关性模型分析FOXP3基因启动子区甲基化水平与Th1/Th2水平的相关性。结果:AR组患者Th1、Th1/Th2及FOXP3基因启动子区甲基化水平明显高于Non-AR组(t=2.888,2.055,2.984,均P<0.05),Th2及FOXP3蛋白水平明显低于Non-AR组(t=2.665,2.155,均P<0.05);多因素Logistics回归分析示高Th1及FOXP3基因启动子区甲基化水平是AR的独立危险因素(OR=1.390,1355.480,均P<0.05),而高Th2水平是AR的保护因素(OR=0.560,P=0.001);相关性分析显示,FOXP3基因启动子区甲基化水平与FOXP3蛋白呈负相关关系(r=-0.879,P<0.001),与Th1/Th2水平呈正相关关系(r=0.810,P<0.001),而FOXP3蛋白与Th1/Th2水平呈负相关关系(r=-0.881,P<0.001)。结论:FOXP3基因启动子区甲基化水平升高后,FOXP3基因蛋白表达水平降低,影响患者体内Th1/Th2细胞表达,从而使患者体内免疫状态发生变化,进而可能诱发排斥反应。

成纤维细胞生长因子1基因启动子多态性与晚发型阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨成纤维细胞生长因子1(FGF-1)基因启动子多态性是否与晚发型阿尔茨海默病(LOAD)相关。方法收集206例尸体检查的样本,包括100例LOAD和年龄匹配的对照组106例。PCRRFLP(Restrictionfragmentlengthpolymorphism)法分析FGF1基因启动子(-1385A/G)的基因型。结果FGF1基因启动子(-1385A/G)的基因型频率分布是:AA型20例(10%),GA型89例(43%),GG型97例(47%),在LOAD组和对照组之间,不同基因型频率分布有显著性差异(P=0.027);GG基因型与LOAD呈正相关(oddsratio=2.02,95%CI:1.16～3.52)。结论FGF1基因启动子(-1385A/G)多态性与LOAD显著相关。

NM23-H1和NM23-H2可切割血小板起源的生长因子-A基因启动子中的核酸酶敏感成分

PDGF A基因的转录由几个GC丰富的、高度单链的、非B型结构的增强子和沉寂成分所调节 其中一个沉寂子位于PDGF A启动子远上游 5’端 (- 14 18～ - 1388) ,命名为 5’SHS .重组人NM 2 3 H1和NM 2 3 H2可分别在 3’和 5’端切割单链、双链形式的 5’SHS的两条链 ,表明NM 2 3 H1和NM 2 3 H2在不同位点 ,以不同机制切割 5’SHS .NM 2 3 H1和NM 2 3 H2也可分别在 3’和 5’端切割双链形式的PDGF A启动子中的NHE成分 (- 82～ - 5 0 ) ;此外 ,NM 2 3 H1也可在 3’端切割PDGF ANHE成分的无意义链 (Py链 )

梨矮化砧木‘中矮1号’生长素氢转运体基因PcAHS及其启动子的克隆与表达分析

以梨（Pyrus communis L．）紧凑型矮化砧木‘中矮1号’及其母本‘锦香’新梢韧皮部为试材，根据转录组测序结果设计特异性引物，克隆到1个长1239bp的基因序列。该序列在两个品种间不存在差异，均编码412个氨基酸，其氨基酸序列与苹果（np-001280772．1）、梅（xp_008242099．1）、毛果杨（xp_002306421．2）、

碱性成纤维细胞生长因子拮抗转化生长因子-β_1对人α1(I)胶原基因的启动激活

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人α1 ( )胶原基因启动子活性的影响 ,以及与转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )之间的相互作用 ,为防治增生性瘢痕提供依据。 方法 正常皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养。采用 Fu GENE转染试剂 ,分别瞬间转染含人α1 ( )胶原基因 5'端序列 - 2 .5 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体 ph COL2 .5至正常皮肤及瘢痕成纤维细胞。 ELISA法测定 b FGF及 TGF- β1 作用 2 4小时后 ,转染ph COL2 .5的两种成纤维细胞的报告基因 CAT表达量。 结果 b FGF能抑制转染 ph COL2 .5重组体的正常皮肤及瘢痕成纤维细胞 CAT表达量 ,且能拮抗 TGF-β1 对转染 ph COL2 .5重组体的两种成纤维细胞 CAT表达的上调作用。与对照组相比有统计学意义 (P<0 .0 5)。 结论 正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中 ,b FGF均能抑制人 α1 ( )胶原基因的启动转录 ,且能拮抗 TGF-β1 对人α1 ( )胶原基因启动活性的上调作用 ,b

抗纤复方对人α_1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的影响

目的 :探讨抗纤复方 (AFC)对人α1(Ⅰ )前胶原基因启动子活性的作用及其机制。方法 :以含人α1(Ⅰ )前胶原基因上流 2 3kb ,0 8kb ,4 76bp ,173bp启动子片段为研究靶序列 ,以氯霉素乙酰基转移酶(CAT)为报告基因 ,构建基因重组质粒 ,转染成纤维细胞 (NIH3T3) ,建立稳定的α1(Ⅰ )前胶原启动子转染细胞体系 ,用抗纤复方和 (或 )转移生长因子 (TGFβ1)处理NIH3T3细胞 ,测定CAT活性。结果 :(1)抗纤复方能够抑制α1(Ⅰ )前胶原启动子报导基因质粒 phCAT Cα1(Ⅰ ) 2 3,phCAT Cα1(Ⅰ ) 0 8,phCAT Cα1(Ⅰ )0 4的活性 ,不能抑制α1(Ⅰ )前胶原启动子报导基因质粒 phCAT Cα1(Ⅰ ) 0 1的活性 ;(2 )TGFβ1能促进 ph CAT Cα1(Ⅰ ) 2 3的活性 ,抗纤复方能拮抗TGFβ1这一促进作用。结论 :抗纤复方能够作用于胶原α1(Ⅰ )基因调控片段 ,抑制胶原合成。

水稻异淀粉酶基因ISA1及其启动子的表达特性分析

利用实时定量RT-PCR方法研究了水稻异淀粉酶基因ISA1在各组织及不同发育阶段籽粒中的表达模式,结果表明该基因只在发育籽粒中表达。同时,克隆了ISA1基因起始密码子上游1.1kb和2.1kb两个不同长度的启动子片段,并分别与GUS报告基因融合,经农杆菌介导转入水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量结果表明,2.1kb的ISA1启动子具有很好的胚乳表达特异性,与内源基因定量表达分析的结果一致;而1.1kb的ISA1启动子则不具备该表达特性,它在胚乳、茎、茎节及谷壳中都有很高的表达。这可能是因为2.1kb启动子中含有抑制目的基因在茎等组织或器官中表达的顺式作用元件。

TGF-β1启动子基因多态性与中国人自身免疫性肝病的相关性研究

目的:探讨TGF-β1启动子基因多态性与中国人自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)、原发性胆汁性肝硬化(pri-mary biliary cirrhosis,PBC)发病的相关性。方法:采用序列特异性引物PCR(PCR with sequence-specific primers,PCR-SSP)分析44例AIH、95例PBC患者外周血单核细胞基因组DNA TGF-β1启动子-988、-800、-509基因多态性,并与220例正常人比较。结果:PBC组C-988A中CC(88.4％)低于对照组(95.5％)、CA(11.6％)高于对照组(4.0％)(P<0.05);C-509T中,C(43.2％)明显下降、T(56.8％)明显升高,CT降低、TT升高(P<0.05);联合分析-988^-800基因表型C-G／A-G(11.6％)显著高于对照组(4.1 %)(P<0.05)。AIH组C-988A多态性C(90.9％)下降而A(9.1％)上升,CC降低,CA、AA上升(P<0.05);g--988^-800基因单体型C-G89.8％降低、A-G(8.9％)升高(P<0.05);-988^-800基因表型C-G／C-G降低而C-G／A-G(13.6％)显著高于对照组(P<0.05)。结论:PBC、AIH与-988位点、-509位点多态性相关,且与-988^-800的基因表型相关;其作用机制可能均是通过干扰机体正常的免疫调节功能,致使机体对自身抗原的免疫耐受能力降低或丧失。

维拉帕米阻断TGF-β1诱导的α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活

目的 :探讨维拉帕米对α1( )胶原基因启动子活性的影响。方法 :将人α1( )胶原基因启动子重组体 p COL H 1.5、p COL H2 .5转染至大鼠肾小球系膜细胞 ,分别经不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)和维拉帕米处理后 ,EL ISA法测定细胞 CAT表达水平。结果 :TGF- β1作用后 ,p COL H1.5和 p COL H2 .5的 CAT活性明显增加 ,分别为对照组的 1.4 98和 1.5 5 1倍 ;维拉帕米对两个重组体的 CAT表达均有抑制作用 ,与单纯 TGF- β1组比较 ,维拉帕米加 TGF- β1组 p COL H2 .5的 CAT活性明显降低 (维拉帕米低浓度组 P<0 .0 5 ,高浓度组 P<0 .0 1)。结论 :维拉帕米不仅直接抑制启动子的活性 ,而且还部分阻断 TGF- β1诱导的 α1( )胶原基因启动子激活。

急性胰腺炎大鼠早期生长反应基因-1与肝损害的关系

目的研究早期生长反应基因-1与急性胰腺炎(AP)肝脏损害的关系。方法先将24只雄性Wistar大鼠随机均分为A,B,C,D4组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液,3h后处死动物,留取血清和肝脏组织。另将30只雄性Wistar大鼠随机均分为E,F,G,H,I等5组,胆管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液,分别于注射后1,3,6,12,24h处死动物同上法留取标本。检测血清AST,LDH,TNF-α,IL-1β水平,并对肝组织进行EGR-1免疫组化染色。结果(1)A,B,C,D组动物TNF-α,IL-1β,AST及LDH水平均随着牛磺胆酸钠浓度的升高而上升;(2)免疫组化染色显示,在不同注药剂量的AP组,肝组织EGR-1表达量随AP病情的加重而升高,并与肝实质酶、炎性细胞因子水平均呈显著正相关,且表达部位也有所不同。EGR-1在AP造模后不同时间肝组织的表达,具有极明显的细胞种类与部位的差异。结论EGR-1可能与AP时伴发的肝脏损害有关,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关。

早期生长反应基因1在急性胰腺炎肝脏损害机制中的作用

目的研究早期生长反应基因1(Egr-1)在急性胰腺炎肝脏损害机制中的作用。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别用生理盐水,1%、3%及5%牛磺胆酸钠溶液进行相应处理,观察各组大鼠肝组织Egr-1免疫组化染色结果并进行胰腺病理评分,检测血清AST、LDH及TNF-α和IL-1β水平。从正常Wistar大鼠分离培养肝细胞,观察原代培养肝细胞在TNF-α刺激及PD98059预处理后Egr-1mRNA表达情况。结果肝组织Egr-1表达与急性胰腺炎肝损害程度呈正相关,且原代培养肝细胞Egr-1mRNA表达水平与肝细胞损害程度呈正相关。结论Egr-1可能参与急性胰腺炎肝损害过程,并且其作用机制部分依赖于细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)。

肾上腺髓质素对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经元凋亡及早期生长反应基因-1的影响

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对局灶性脑缺血/再灌注（I/R）损伤大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因-1（Egr-1） mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性脑I/R损伤中的作用。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组以及ADM股静脉组、颈内动脉组和侧脑室组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉（MCA）I/R损伤模型,于阻断血流2h后分别经股静脉、颈内动脉和侧脑室3条途径注射ADM进行干预后再灌注22h。应用氯化三苯四唑（TTC）染色法测定梗死体积,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡,用原位杂交法检测Egr-1 mRNA阳性细胞表达。结果大鼠局灶性脑I/R损伤并经股静脉、颈内动脉、侧脑室注射ADM后,脑梗死体积显著小于I/R损伤组;且颈内动脉和侧脑室注射ADM在减少脑梗死体积方面明显优于股静脉注射ADM（P均〈0.05）。I/R损伤组大鼠缺血侧大脑皮质、海马CA1区凋亡阳性细胞数明显多于假手术组（P均〈0.01）,给予ADM后阳性细胞数显著少于I/R损伤组,以ADM颈内动脉组和侧脑室组更为明显（P均〈0.01）。假手术组大鼠大脑皮质有少量Egr-1 mRNA阳性细胞表达,I/R损伤后缺血侧大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞表达多于假手术组（P均〈0.01）,应用ADM的3组大鼠大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞的表达明显多于I/R损伤组（P均〈0.01）,但颈内动脉和侧脑室给予ADM组的Egr-1 mRNA阳性细胞表达增高最为明显（P均〈0.01）。结论股静脉、侧脑室和颈内动脉给予外源性ADM能减少神经元凋亡和梗死体积,激活Egr-1 mRNA,对局灶性脑I/R损伤可能有治疗作用。

早期生长反应基因1敲除对肝癌组织基因表达谱的影响

目的:对比观察早期生长反应基因1(EGR-1)敲除大鼠与野生大鼠肝癌模型基因表达谱的变化,探讨EGR-1基因是否参与调控肝癌的生长与转移。方法:应用cDNA表达芯片对EGR-1基因敲除大鼠和野生大鼠肝癌模型的癌标本组织抽提的mRNA进行芯片杂交,并对两者的基因表达谱进行对比分析。将同一基因在一个模型中的表达高于另一个模型的3倍以上作为基因差异表达的判断标准。结果:野生大鼠肝癌模型与EGR-1敲除大鼠肝癌模型相比较,前者有25条已知基因和2条未知基因表达上调,而后者有41条已知基因和23条未知基因表达上调;其中包括与细胞增殖和肿瘤转移相关的重要基因。结论:EGR-1基因敲除可引起大鼠肝癌模型基因表达谱的明显变化;EGR-1很可能参与了肝癌细胞生长与转移的调控。

早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响

背景:体内外研究已证实肺巨噬细胞合成和分泌肿瘤坏死因子α等参与肺组织局部损伤和炎症反应,但具体发生机制仍不明确。目的:观察核转录因子早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,于2004-06/2006-12在湘雅医学院病理学系完成。材料:标准石英粉尘(SiO2)为Sigma公司产品;早期生长反应基因1抗体为Santa Cruz公司产品;小鼠巨噬细胞系RAW264.7购自中科院上海生物细胞研究所细胞库。方法:实验将巨噬细胞分为正常对照组、二氧化硅刺激组、Egr-1+二氧化硅组和IgG+二氧化硅组,前两组加无血清培养基,后两组分别加入5,10,20mg/L不同浓度的Egr-1和IgG抗体干预。主要观察指标:酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白的水平;反转录-聚合酶链反应检测细胞内肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果:①与二氧化硅刺激组相比,不同浓度Egr-1+二氧化硅组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平均下降(P<0.01),且10mg/L组与5,20mg/L组相比,差异有显著性意义(P<0.05)。不同浓度IgG+二氧化硅组相比,上清液中肿瘤坏死因子α蛋白水平差异无显著性意义(F=1.008,P=0.438)。②二氧化硅刺激组肿瘤坏死因子αmRNA表达高于正常对照组(P<0.01),而Egr-1+二氧化硅组mRNA表达低于二氧化硅刺激组和IgG+二氧化硅组(P<0.01)。结论:二氧化硅致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α增加可能通过激活核转录因子早期生长反应基因1介导的信号通路而实现。

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因—1mRNA的表达(英文)

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。

早期生长反应基因-1在大鼠急性胰腺炎合并肺损伤中的作用

目的探讨早期生长反应基因-1(EGR-1)在急性胰腺炎(AP)合并肺损伤中的作用。方法将24只雄性Wistar大鼠随机均分为4组,分别于胆管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液,3h后处死动物,留取血清、胰腺及肺组织。检测血清TNF-α、IL-1β水平,进行胰腺组织病理评分,测定肺组织湿重/干重比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色。另将原代培养的肺泡巨噬细胞(AM)分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,通过免疫细胞化学染色检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α、IL-1β的浓度。结果肺组织免疫组化染色显示,EGR-1表达随AP病情加重而增强,并与TNF-α、IL-1β、胰腺组织病理评分及肺组织湿重/干重比均呈显著正相关,且表达细胞类型也有所不同。AM表达EGR-1程度与培养液TNF-比、IL-1β水平呈显著正相关,EGR-1在AM中的表达有ERK1/2信号途径的参与。结论EGR-1可能在AP合并肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关。

大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

采用大鼠可逆性大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，应用原位杂交和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）观察大鼠局灶性脑缺血／再灌注（I／R）损伤后早期生长反应基因-1（Egr-1）mRNA动态变化，旨在探讨缺血损伤后Egr-1mRNA表达的细胞种类及规律，为脑I／R损伤的病理生理机制提供实验依据。