‘玉露香梨’生长素烟酰胺合成酶基因GH3克隆及其生物信息特征研究

[目的]‘玉露香梨’果实萼片宿存严重降低其商品价值,筛选并鉴定其果实萼片发育关键基因,可为从分子水平培育萼片脱落的梨果实提供参考基因。[方法]以棚架栽培的‘玉露香梨’为试材,结合前期BSA基因定位测序数据,对候选基因表达特征进行验证、克隆并分析2个生长素酰胺合成酶基因GH3家族生物信息特征。[结果]基因PbGH3.3(Pbr007550)和PbGH3.4(Pbr030571)在萼片的表达量排名第二;PbGH3.3和PbGH3.4 CDS长度均为1806 bp,编码601个氨基酸,其中二者存在7个氨基酸序列的差异,编码的蛋白PbGH3.3和PbGH3.4序列与苹果MdGH3.1的同源性最高;属于不稳定性蛋白,无信号肽的存在,定位于细胞质;利用NCBI网站CCD工具分析发现均具有GH3蛋白家族的GH3 superfamliy保守结构域,蛋白质三级建模后发现为GH3.1 AUXIN缀合酶,涉及生长素稳态,属于GH3蛋白家族。STRING互作网络蛋白成员GO和KEGG功能富集分析表明PbGH3.3参与植物激素尤其是生长素信号通路,推测PbGH3.3和PbGH3.4可能在‘玉露香梨’果实萼片脱落中通过IAA信号通路发挥生物学功能。

人工合成成骨生长肽对正常小鼠造血的促进作用和体外造血活性测定

目的 通过观察sOGP在体内的促造血活性和体外促进造血祖细胞增殖的作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节及机制。方法 正常小鼠连续 14d皮下注射sOGP ,观察外周血象、骨髓有核细胞数及骨髓有核细胞分类计数的变化 ;又应用离体骨髓细胞培养方法观察sOGP对正常小鼠和人骨髓粒系祖细胞集落形成的影响。结果 sOGP能升高正常小鼠骨髓有核细胞数和外周血白细胞数分别为2 0 %和 40 % ,红细胞和血小板也有增加趋势 ,骨髓细胞增生较空白对照组活跃 ,粒系增生较明显。体外CFU G集落培养实验进一步证实了sOGP具有直接刺激小鼠和人骨髓粒系祖细胞增殖的作用 ,1× 10 -14 mol·L-1浓度时已有明显的效果 ,sOGP和阳性对照药rhG CSF在相近浓度时效果相接近。结论 sOGP可能具有促进小鼠骨髓全系细胞增生的作用 ,以促进粒系造血为主 ,其机制可能是直接作用于造血干 /祖细胞或改善造血微环境促进造血 ,提示sOGP在促进放

利用家蚕表达合成人表皮生长因子(EGF)及产物对胃粘膜损伤的修复作用

基于家蚕杆状病毒密码子的偏爱性,对人表皮生长因子基因(hEGF)的部分密码子进行修改后合成一个新的基因,命名为CSEGF。所合成的CSEGF能编码同hEGF完全一致的氨基酸序列,并被重组进家蚕杆状病毒获得重组Bm-BacCSEGF。重组病毒感染家蚕后,该基因在家蚕中的表达量达28.4μg/mL幼虫血淋巴及33.07μg/mL蛹血淋巴。将表达CSEGF的蚕蛹经冻干直接制成EGF冻干粉胶囊,经测定冻干粉中EGF的质量比达140μg/g。动物模型试验显示该冻干粉对酸诱导的急性胃粘膜损伤的SD大鼠有显著的修复作用,对大鼠裸鼠的肾细胞生长也有明显的促进作用。

人工合成成骨生长肽对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用

目的 探讨人工合成成骨生长肽 (sOGP)对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用 ,阐明其剂量 效应关系。方法 以 4 .0和 7.5Gy13 7Csγ射线照射小鼠为模型 ,采用皮下注射和肌肉注射 2种给药途径连续 8d给予sOGP ,剂量范围为 0 .0 39～ 6 4 0nmol/(kg·d) ,观察外周血象、骨髓有核细胞数、骨髓粒系造血祖细胞集落形成(CFU G)、骨髓细胞分类和骨髓切片组织学等的变化。结果 sOGP能加快受照小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞数的恢复 ,在一定的剂量范围内呈明显的剂量依赖性 ,并能刺激髓外造血 ;促进 (CFU G)形成作用显著高于重组人粒系集落刺激因子 (rhG CSF)约 2倍 ;骨髓病理学观察显示sOGP能加快受照小鼠骨髓造血组织损伤的恢复 ,刺激骨髓粒系增生。结论 sOGP可明显促进受照射小鼠造血功能的恢复 ,其机制可能是通过作用于早期造血阶段或 (及 )改善微环境进而促进造血。

生长素合成相关基因YUC1和YUC2在两种倍性草莓中的比较

【目的】为了研究FMO酶编码基因在草莓生长发育过程中的可能功能,【方法】以二倍体森林草莓‘黑龙江3号’为材料,基于八倍体栽培草莓‘久香’中已克隆基因序列,利用同源克隆技术获得了2个FMO酶编码基因:FvYUC1和FvYUC2基因;并运用DNAMAN软件和RT-PCR技术,分析比较了同源YUC基因在这两种倍性草莓中的分子特征和表达模式特征。【结果】同源性分析结果表明:在两种倍性草莓中YUC1氨基酸序列的一致性为99.31%,YUC2为99.02%;FvYUC1和FvYUC2之间的序列一致性为60.82%。定量RT-PCR分析表明,YUC1和YUC2在栽培草莓和森林草莓的各个组织中均表达,但表达模式差异很大,YUC1的优势表达组织在森林草莓中是幼叶、在栽培草莓中是根;而YUC2在森林草莓中的优势表达组织是匍匐茎,在栽培草莓中是小绿果。【结论】森林草莓和栽培草莓中存在高度保守的YUC同源基因,但它们在这两种倍性草莓中的主要功能可能有较大变异,将森林草莓功能基因研究结果推导至栽培草莓必须谨慎。

草莓生长素合成限速酶FaYUC11基因的克隆和功能分析

【目的】克隆草莓YUC家族新基因,探究其在草莓中的具体调控作用。【方法】以‘久香’草莓为材料,利用同源克隆技术克隆草莓果实大小调控相关的新基因,利用病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)结合定量RT-PCR技术,分析新基因在草莓果实膨大调控中的作用。【结果】从‘久香’草莓果实中克隆到1个草莓果实大小调控相关的新基因,命名为FaYUC11(Gen Bank登录号:JX417083.1),用草莓幼果微注射法建立了病毒诱导FaYUC11基因沉默的转基因草莓体系,结果发现,FaYUC11基因沉默后果实的膨大和正常生长均受到影响,并且导致果实瘦果(种子)中游离生长素含量下降、果实纵横径增长率降低。【结论】FaYUC11基因是草莓生长素合成途径中的关键基因,该基因通过调控生长素的合成继而调控果实的膨大。

人工合成植物生长调节剂促进插条生根的研究现状

植物生长调节剂(Plant growth regulators)包括天然的植物激素(Phytohormone)和人工合成的植物生长调节剂(artilocial synthetic plant growth regulators)两大类。它们都以不同的方式、作用部位和浓度对植物生长和发育起促进或延缓作用。50年代以来,几乎全世界都用人工合成的植物生长调节剂如NAA、IAA和IBA来促进难以生根或生根缓慢的树种生根。但研究多着重于生长调节剂的浓度问题。

亚硒酸钠对转绿小麦叶片内叶绿素生物合成和某些抗氧化作用的影响

亚硒酸钠能提高转绿叶片的抗氧化作用，而有助于叶片内叶绿素的积累和其前体ＡＬＡ的形成。但施用亚硒酸钠的浓度范围较窄，若使用适量的亚硒酸纳有利于调节植物的生长发育。

合成生长素对温州蜜柑果实生长及解剖特征的影响

宽皮桔类果实,由于果小导致利润显著下降,增大果实成为人们的愿望。为此,世界不同地区已推荐并成功地应用了疏果措施。疏果还可防止隔年结果,但也会降低产量;倘未出现隔年结果时,产量降低则导致利润下降,西班牙的温州蜜柑和克力迈丁桔通常属此情况。在这些情况下,通过直接刺激幼果生长以增大果实似更有益。

沸石膜合成方法研究进展

介绍了几种沸石分子筛膜的合成方法,有原位水热合成法、二次生长合成法、微波加热合成法和其他合成法。其中二次生长合成法又包括浸涂法、打磨法、旋转喷涂法和喷涂法。并介绍了相关文献研究内容。指出良好的沸石膜品质应该均匀连续、薄、定向生长。原位水热合成法只能做到使膜薄,而二次生长合成法可以做出质量合格的膜。

人血管内皮细胞生长因子基因体外转染皮肤成纤维细胞后的表达效应

目的:观察外源性人血管内皮细胞生长因子基因导入正常真皮成纤维细胞后,能否表达及分泌血管内皮细胞生长因子,为进一步构建转VEGF165基因组织工程皮肤在创伤修复中的应用提供新移植物。方法:实验于2001-06/2005-06在长春吉林大学完成。①真核表达载体pcDNA3.0-hVEGF165的扩增、纯化和鉴定过程为大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备→pcDNA3.0-hVEGF165质粒DNA细菌转化→pcDNA3.0-hVEGF165质粒大量制备(碱裂解法)→质粒纯化→质粒含量纯度测定。提取的质粒载体用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定。②选取清洁级新生日本大耳白兔2只,无菌条件下取新生兔皮肤,尽量去除皮下组织,切成宽0.3cm小条块,Ⅰ型胶原酶消化,进行真皮成纤维细胞的分离与培养。脂质体介导真核表达质粒pcDNA3.0-hVEGF165转染体外培养的兔皮肤成纤维细胞,经G418筛选,获得阳性转染细胞克隆,并进行传代扩增。③酶联免疫吸附法检测转染后不同时间段的血管内皮细胞生长因子蛋白表达水平;原位杂交显示转基因细胞内VEGF165mRNA的表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况;透射电子显微镜观察转染后真皮成纤维细胞的超微结构。结果:①质粒酶切鉴定结果:提取的质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定后可得到5.4kb和0.57kb两个片段,与原质粒图谱符合,表明所提取的质粒为重组质粒pcDNA3.0-VEGF165。②pcDNA3-hVEGF165基因转染真皮成纤维细胞情况:共进行15次转染试验,35孔(皿)均有G418抗性集落形成,表明pcDNA3.0-hVEGF165经脂质体介导可有效转染正常皮肤成纤维细胞。③血管内皮细胞生长因子蛋白的表达:pcDNA3.0-hVEGF165转染成纤维细胞后,24h即有较高水平的血管内皮细胞生长因子蛋白表达,高达(3280±2054)ng/L,并于48,72h呈下降趋势。④血管内皮细胞生长因子cDNA原位杂交检测结果:转染后成纤维细胞可见散在的阳性细胞表达hVEGFmRNA。G418应用2～4周后,可成功筛选出转基因成纤维细胞克隆,筛选后可见大量阳性的转染细胞表达hVEGFmRNA。⑤成纤维细胞的细胞周期分布及凋亡检测:转染后成纤维细胞S期细胞比例增加,G1和G2期细胞减少,表明细胞DNA的合成以及细胞的增殖活动加强。但细胞凋亡率逐渐升高,转染前为1.26%,转染后2d为2.64%,至12代时高达17.35%。⑥转染后成纤维细胞超微结构观察:细胞表面有较多微绒毛,核呈不规则形,胞质内可见较多的粗面内质网、线粒体,沿膜可见一些膜包被颗粒。结论:真核表达质粒pcDNA3.0-hVEGF165成功导入家兔皮肤成纤维细胞,在短时期内可高水平地表达分泌血管内皮细胞生长因子,在治疗缺血性疾病和促进创伤修复及以其作为种子细胞构建转基因组织工程皮肤治疗皮肤缺损等方面显示出较好的应用前景。

Mn^(2+)作为控制剂对银纳米线的合成的影响

采用一步多元醇还原法以MnCl2和KBr复合金属盐为控制剂制备银纳米线。研究了Mn2+对银纳米线的尺寸和形貌的影响,并通过建立吸附模型对Mn2+在银纳米线生长过程中的影响方式进行了探讨。使用MnCl2和KBr作为控制剂时,在Mn2+浓度为(0.3~0.5)mmol/L得到的银线长径比和均匀性都相对较好,但是Mn2+浓度为0.5 mmol/L时会出现团聚现象。通过模拟Mn2+在银纳米线不同的晶面上的吸附作用,可得到Mn2+在银纳米线的生长合成过程中主要有两种作用:一是Mn2+能够使得更多的Ag+被还原为Ag,促进晶核的形成;二是Mn2+能够抑制(100)晶面的生长,而在(111)晶面上银原子大量堆积,使所得银线的长径比明显升高。

非小细胞肺癌组织中p15基因纯合性缺失和血管内皮生长因子过表达的研究

目的:探讨p15基因纯合性缺失和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)过表达的相关性及两者与非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)生物学特征之间的关系。方法:提取DNA,采用PCR技术,分别对97例NSCLC组织和20例癌旁正常组织进行p15基因纯合缺失检测;提取组织RNA,采用RT-PCR技术分析VEGF基因表达水平。结果:NSCLC组织中p15基因纯合缺失率和VEGF表达率分别为44.3%(43/97)和66.0%(64/97),显著高于癌旁正常组织的5%(1/20)和10%(2/20),P<0·05。p15基因纯合缺失与TNM分期(P=0·001)和淋巴结转移相关(P=0·018),而与组织学类型无相关性,P=5·731;VEGF过表达与TNM分期和淋巴结转移相关,P值均<0·01;而与组织学类型无相关性,P=2·113。p15基因纯合缺失与VEGF表达呈正相关。结论:p15基因纯合缺失和VEGF基因过表达可能在NSCLC的发生及恶性进展中发挥一定的作用。

转化生长因子β1和雌激素调节蛋白PS2在乳腺癌中的表达及其对预后的意义

目的研究转化生长因子β1(transform ing grow th factor-β1,TGF-β1)和雌激素诱导蛋白PS2在乳腺癌中的表达及其与转移复发和预后的关系。方法应用TGFβ1及PS2抗体免疫组化法对110例有完整随访资料的乳腺癌进行检测。结果TGFβ1和PS2在110例乳腺癌中阳性率分别为56.4%、44.5%;乳腺癌组织中TGFβ1蛋白的表达与组织学分级(χ2=4.503,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=8.959,P<0.01)均相关,而在各组织学类型中表达差异无显著性。PS2表达则与临床病理指标均无显著相关性;乳腺癌中PS2蛋白和TGFβ1蛋白的表达与ER、PR分别呈正相关(P<0.05)和显著负相关(P<0.01);除PS2蛋白,TGFβ1、ER及PR阳性表达组转移和复发的发生率与阴性组存在显著差异(P<0.05);作为预后不良的指标,TGFβ1阴性者平均生存时间为(109.25±34.438)个月,5年生存率为97.9%,明显高于阳性者,PS2则无此差异。将TGFβ1和PS2与年龄、淋巴结转移、组织学分级、组织学类型等预后相关指标进行COX多因素分析,结果显示TGF-β1是相对独立的预后因子。结论与PS2相比,TGFβ1与乳腺癌发生发展的关系更加密切。TGFβ1可以作为预测乳腺癌转移和复发独立的预后指标。

被动吸烟影响仔鼠小脑皮质神经生长因子含量及牛磺酸的干预作用(英文)

背景:被动吸烟致对胚胎神经系统发育影响的报道比较少见,并缺乏有效的防治措施。我们以往实验证明,被动吸烟可致仔鼠海马组织神经生长因子含量减少,学习能力下降。小脑皮质也是胚胎期神经生长因子水平较高的部位之一,被动吸烟也可能降低小脑皮质神经生长因子的含量。牛磺酸在哺乳类动物的脑内含量丰富,神经元和神经胶质细胞可能通过选择性储存和释放牛磺酸,以维持脑组织的正常活动,牛磺酸的合成和摄入受阻可能导致其功能异常。因此推测胚体内一定水平的牛磺酸与神经生长因子含量具有相关性,而小脑皮质神经生长因子含量的减少可能是仔鼠脑损伤的原因之一,故设计此实验。目的:探索被动吸烟对仔鼠所致脑损害机制及牛磺酸的干预作用。设计:随机对照动物实验。单位:山西医科大学汾阳学院。材料:实验于2001-03/2001-12在山西医科大学汾阳学院中心实验室进行。选Wistar雌性大鼠21只,体质量150～210g,采用编号随机分组方法分为3组,每组7只:被动吸烟组,被动吸烟+牛磺酸组,正常对照组。3组大鼠均于受孕的第2天起进行处理至自然分娩。被动吸烟组给予连续实验性吸烟,每日吸烟前用生理盐水0.65mL/只灌胃;被动吸烟+牛磺酸组于每日吸烟前用牛磺酸500mg/kg灌胃;正常对照组不予吸烟,每日用生理盐水0.65mL/只灌胃。方法:各组孕鼠分娩的仔鼠称量体质量后断头法处死,分离出脑并称重,在沸生理盐水中煮5min。再分离出小脑,用免疫放射测定法测神经生长因子含量。以小脑皮质神经生长因子蛋白变化为指标观察被动吸烟及牛磺酸对其的影响。主要观察指标:各组仔鼠体质量、脑质量和小脑神经生长因子蛋白的比较。结果:21只孕鼠的147只仔鼠检测数据进入结果分析。被动吸烟组仔鼠的体质量、脑质量和小脑神经生长因子蛋白水平分别与正常对照组和被动吸烟+牛磺酸组比较均显著降低(P<0.001);被动吸烟+牛磺酸组仔鼠的3项指标与正常对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:被动吸烟可能是导致仔鼠小脑皮质神经生长因子水平下降的因素;牛磺酸可能对被动吸烟所致仔鼠脑损害具有保护作用。

过量表达OsYUC2转基因水稻幼苗对干旱和H2O2胁迫的生长生理应答

OsYUC2基因是控制水稻生长素合成的关键基因家族OsYUCs成员之一。本研究以过量表达pUbi-OsYUC2-GUS转基因水稻(G3株系)和野生型水稻(WT,Oryza sativa L .sppj.aponica,v.nipponbare,日本晴)为材料,分别比较了二者在干旱和 H2O2 胁迫下生长生理的变化。结果显示,20%PEG-6000和0.06% H2O2 处理条件下,G3的株高、初生根上侧根的长度(特别是不定根上侧根的数量和长度)都大于WT的;而G3的MDA和H2O2积累量则都少于WT的。与对照组比,PEG和H2O2处理后G3根系的GUS活性都降低且由均匀分布变为梯度分布,说明PEG和H2O2影响OsYUC2基因的表达部位和空间分布。相同处理条件下,G3根系与DR5-GUS转基因水稻根系GUS活性和分布样式的变化类似,显示PEG和H2O2减少生长素的积累并影响其梯度分布。OsYUC2过量表达在一定程度上缓解了由于PEG和 H2O2 胁迫导致生长素减少引起的伤害,转基因水稻幼苗的抗逆水平有所提高。

血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及与微血管生成的关系

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在乳腺癌中的表达及其与血管生成和病理参数的关系。方法 :采用S P免疫组织化学染色法检测 5 6例乳腺癌及 10例癌旁正常组织的VEGF表达 ,并对血管进行Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色 ,记数微血管密度。对 10例乳腺癌进行VEGFmRNA原位杂交检测。结果 :乳腺癌组织VEGF表达阳性率高于其癌旁正常组织 ,差异有显著意义 ,P <0 0 5。VEGF的表达与乳腺癌的病理分级密切相关 ,P <0 0 1。有淋巴结转移的VEGF表达率明显高于无淋巴结转移 ,P <0 0 5 ;而且随着VEGF表达的增强 ,乳腺癌组织内微血管密度明显增高 ,P <0 0 1。结论 :癌组织VEGF表达增强在肿瘤血管生成、生长及转移中起重要作用。

血管内皮生长因子及其受体mRNA在前列腺癌组织中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)及其受体Flt1、KDRmRNA在前列腺癌组织中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应技术对手术的33例前列腺癌和11例正常前列腺组织标本中VEGF及其受体KDR、Flt1mRNA的表达进行检测。结果在78.79%(28/33)前列腺癌组织和63.64%(7/11)正常前列腺组织中检测到VEGF121、VEGF165mRNA的表达,表达水平分别为1.03±0.54和1.39±0.66,显著高于正常前列腺组织的0.38±0.31和0.54±0.26,t值分别为3.73和3.89,P值分别为0.0006和0.0002。KDR、Flt1mRNA在部分前列腺癌组织中表达,分别为48.48%(16/33)和33.33%(11/33),而在正常前列腺组织组织中未见表达;VEGFmRNA表达与KDRmRNA、Flt1mRNA表达密切相关,P值分别为0.002和0.000。结论前列腺癌组织中VEGF121、VEGF165及其受体KDR、Flt1mRNA表达水平升高,且VEGF表达与其受体KDR及Flt1表达密切相关。提示VEGF及其受体KDR、Flt1在前列腺癌发生发展过程中起重要作用。

表皮生长因子受体EGFR和Ki67在非小细胞肺癌中的表达及其相关性研究

目的 :探讨表皮生长因子受体 (epi dermalgrowthfactorreceptor ,EGFR)和Ki67在非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及其与NSCLC发生、发展及预后的关系。方法 :对经随访资料完整的术后NSCLC组织标本 60例、癌旁组织 2 0例和肺正常组织 5例 ,采用SP免疫组化法检测EGFR和Ki67。对术后辅助性化疗 3 6例 ,分析疗效与EGFR和Ki67表达的关系。结果 :NSCLC中EGFR表达阳性率为 65 % ,阳性细胞的棕黄色颗粒位于细胞质 ;Ki67表达阳性率为 81 67% ,阳性细胞的棕黄色颗粒位于细胞核 ;2 0例癌旁组织及 5例正常肺组织未见阳性染色细胞。癌组织EGFR和Ki67表达与癌旁组织相比差异有统计学意义 ,P <0 0 1。NSCLC中EGFR和Ki67阳性表达与年龄、性别、吸烟与否、肿瘤细胞的病理类型差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;与肿瘤大小、病理分级、淋巴结转移和TNM分期密切相关 ,P <0 0 5。EGFR和Ki67表达阳性者 3年生存率分别为19 86%和 3 1 3 3 % ,低于阴性表达 70 11%和90 91% ,P <0 0 5 ;接受术后辅助性化疗的患者 ,EGFR和Ki67阳性表达复发转移率分别为 70 3 7%和 62 5 0 % ,高于阴性表达 11 11%和 0 ,P <0 0 5。结论 :EGFR和Ki67在NSCLC中的异常或过度表达与肿瘤发生、发展密切相关 。

N-(1,3,4-噻二唑-2-基)-N′-芳酰基脲的合成及其生物活性

2-氨基噻二唑与芳酰基异氰酸酯反应合成了13种N-(1,3,4-噻二唑-2基)-N'-的芳酰基脲,产率为54.5%～86.2%. 用核磁共振氢谱、红外光谱和元素分析确证了目标化合物的结构,室内的生物活性测定试验表明,目标化合物中的2b、2c、2e和2h具有优良的植物生长调节活性.