转化生长因子-β2诱导人Tenon囊成纤维细胞转化及其在瘢痕形成中的作用

背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患者的Tenon囊组织，并用组织块培养法在含质量分数10％胎牛血清的DMEM中培养，培养的细胞贴壁后达到70％～80％亚融合状态时更换为无血清培养基饥饿培养24h，然后分别加入质量浓度1、2、5、10、20Ixg／LTGF-β2诱导HTFs24h，另用2tzg／L或5μg／LTGF-β2 诱导HTFs6、24、48、72h，阴性对照组培养基中不加TGF-β2 用Westernblot法检测HTFs中α-平滑肌肌动蛋白（n—SMA）和pSmad2蛋白的表达，采用细胞免疫荧光技术检测“-SMA及纤维状肌动蛋白（F—actin）表达的定位，采用凝胶收缩实验检测培养细胞收缩力的变化。结果不同质量浓度TGF—B，组HTFs中0I—SMA表达的强度均明显强于阴性对照组，2tzg／L、5μg／LTGF—B，作用24～48h后HTFs中d—SMA表达强度达峰值，10μg／L、20μg／LTGF-β2组较2μg／L、5μg／LTGF-β2组α—SMA蛋白表达强度减弱。对照组HTFs中有少量α—SMA及F—actin表达，1、2、5μg／LTGF-β2组d—SMA及F—actin荧光表达明显增强，阳性细胞数明显增加，10μg／LTGF-β2组α—SMA及F-actin荧光表达较低质量浓度组减弱。2μg／LTGF-β2作用后pSmad2表达强度明显强于PBS组和FBS组，在作用后30rain～2h表达较强，2h后开始出现下降。对照组HTFs收缩凝胶面积所占原面积的百分数为（78．00-3．13）％，1、2、5、10tzg／LTGF-β2组分别为（63．88±1．78）％、（20．69±O．65）％、（19．49±O．54）％、（16．24~0．84）％，HTFs收缩凝胶面积占原面积的百分数随着TGF-β2质量浓度的增加而明显增加（F组别=859．400，P=0．000）。结论TGF-β2可诱导成纤维细胞转分化，一定程度上其作用呈质量浓度依赖性和时间依赖性，且细胞收缩力随质量浓度的增加而增强，可能是青光眼滤过术后滤过通道建立失败的重要机制。

雷帕霉素对转化生长因子-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化的抑制作用及其机制

背景转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）上皮细胞-肌成纤维细胞转化（EMT）过程是后发性白内障（PCO）的主要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。目的观察雷帕霉素（RAPA）对人LECs增生和TGF-β2诱导的EMT的抑制作用。方法采用含质量分数10％胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液对人LECs系SRA01／04进行体外培养，换以无血清培养液培养后分别用TGF-β2（5mg／L）、TGF-β2＋10nlg／LRAPA、TGF-β2＋100mg／LRAPA、TGF-β2＋1000mg／LRAPA、TGF-β2＋10000mg／LRAPA共培养SRA01／0472h，仅用无血清培养液培养的SRA01／04作为对照组。采用MTT法检测各组SRAOI／04的吸光度（A490）值以评估SRA01／04的增生情况，并计算RAPA对细胞生长的抑制率。各组细胞作用48h后，采用逆转录PCR（RT-PCR）法和Westernblot法分别检测LECsETM的标志物-α平滑肌肌动蛋白（d-SMA）和上皮性钙黏附蛋白（E-cad）的表达。选取TGF-β2＋400mg／LRAPA分别作用于培养的SRA01／0424、48、72h，采用Westernblot法检测SRA01／04中α-SMA、E-cad的表达水平。结果MTT法检测结果显示，对照组、TGF-β2组、TGF-β2＋10ing／LRAPA组、TGF-β2＋100mg／LRAPA组、TGF-β2＋1000ing／LRAPA组和TGF-β2＋10000mg／LRAPA组SRA01／04的A490值分别为0．680＋0．020、0．550±0．013、0．480＋0．014、0．400＋0．011和0．200＋0．019，表明随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04增生值降低，差异有统计学意义（F=101．920，P=0．000），且RAPA的抑制率逐渐增加。RT-PCR和Westernblot检测结果表明，阴性对照组SRAOI／04中α-SMAmRNA（α-SMAmRNA／β-actinmRNA）及其蛋白（α-SMA／β-actin）仅有少量表达，TGF．B，组可见SRAOI／04中01．SMAmRNA及其蛋白表达量明显增加，但不同质量浓度的RAPA作用于SRA01／04后，随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04中α-SMAmRNA及蛋白的表达量均逐渐减少，但E-cadmRNA及其蛋白表达逐渐增多，各组间的总体差异均有统计学意义（α-SMAmRNA：F=294．660，P=0．000；α-SMA蛋白：F=346．950，P=0．000；E-cad mRNA：F=264．250，P=0．000；E-cad蛋白：F=317．327，P=0．000）。400mg／LRAPA作用于SRA01／04后，随着作用时间的延长，α-SMA蛋白的表达量逐渐下降，而E-cad蛋白的表达量逐渐增加，差异均有统计学意义（α-SMA：F=693．864，P=0．000；E-cad：F=369．286，P=0．000）。结论RAPA可抑制体外培养的SRA01／04增生，其作用呈剂量依赖性，此外RAPA具有抑制TGF-β2诱导的LECsETM作用，其作用呈剂量和时间依赖性。

转化生长因子-β2对实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响

背景以往对近视眼巩膜力学特性变化的研究局限于其巩膜整体和条带的力学特性变化方面，目前对近视眼细胞水平力学特性的研究日益受到重视。目的明确TGF-β2对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响。方法2周龄豚鼠12只，随机选取一侧眼用镜片诱导方法制备近视动物模型，对侧眼为对照。造模30d后，用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞并传2代，采用免疫组织化学法以兔抗鼠波形蛋白、结蛋白、角蛋白、S-100抗体进行细胞鉴定。将不同质量浓度的TGF-β2（分别为0、1、10、100mg／L）加入无血清DMEM中作用24h，利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的力学特性。结果模型眼0mg／LTGF—p：组与对照眼0mg／LTGF—p：组比较，模型眼的巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数明显升高，二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。模型眼与对照眼在TGF-β2作用下，0mg／L组与1mg／L组、10mg／组比较，细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型眼和对照眼培养细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数与TGF-β2的质量浓度均呈正相关（r=0．743、r=0．533；r=0．654、r=0．576），模型眼和对照眼中的0mg／L组与100mg／L组比较细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均无统计学意义（P〉0．05），模型眼1mg／L组、10mg／L组与对照眼1mg／L组、10mg／L组比较，巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数之间差异有统计学意义（P〈0．05）；模型眼组100mg／LTGF-β2与对照眼的100mg／LTGF-β2组比较，巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随着TGF—B，质量浓度的增加，近视眼巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数值明显升高，1mg／L和10mg／LTGF-β2可以降低正常巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量及黏弹性参数，导致细胞力学特性的更大变化。

胰岛素样生长因子-1及转化生长因子-β2对幼年及成年兔软骨细胞合成糖胺多糖的影响

目的观察胰岛素样生长因子(IGF)-1及转化生长因子(TGF)-β2对体外培养的幼年及成年兔软骨细胞合成糖胺多糖的影响。方法取2月龄幼年及12月龄成年雄性新西兰大白兔,采用酶消化法取兔软骨细胞并培养于第2代软骨细胞,随机分为四组进行培养,分别为空白对照组;IGF-1组;TGF-β2组;IGF-1+TGF-β2组。每周传代1次,连续5 w,用Alcian blue法分别测定留取培养液中GAG的含量;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况,比较各组的变化。结果幼年组GAG的分泌能力优于成年组;第二代传代细胞分泌GAG的能力最强;IGF-1及TGF-β2均可促进传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质,IGF1+TGF-β2组明显优于其他组(P<0.05)。结论外源性IGF-I和TGF-β2可促进不同年龄兔关节软骨细胞增殖和GAG的分泌,联合应用发挥协同作用,提示外源性生长因子可抑制软骨细胞在体外培养的老化过程。

抑肽酶对跟腱断裂白兔模型跟腱修复中转化生长因子-β2表达的影响

目的 观察抑肽酶对白兔跟腱断裂修复的影响。方法 选用60只新西兰白兔，随机分为三组（正常对照组、模型损伤组、抑肽酶治疗组），于造模后第3天及第1、2、3、4周采集标本，RT-PCR方法检测转化生长因子-β2（TGF-β2）mRNA表达，免疫组化染色观察TGF-β2蛋白表达。结果 抑肽酶组在3dTGF-β2mRNA表达明显高于模型组（P〈0.05），在1w后，抑肽酶组TGF-β2mRNA表达低于模型组，但无统计学意义。在第2-3周时，抑肽酶组中表达量明显低于模型组（P〈0.05）。TGF-β2蛋白在正常白兔跟腱有少量表达，术后第3天时抑肰酶治疗组表达量高于模型组，第1周抑肽酶组中表达量明接近模型。2-4w时抑肽酶组中表达量明显减少且低于模型组。结论 抑肽酶可减轻炎症反应，早期可通过调控TGF-β2的表达量，促进跟腱断裂的修复。

转化生长因子-β2在糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究(英文)

目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy,DR)是糖尿病在眼部的主要并发症,为我国四大致盲眼病之一。DR的病理基础是微血管病变,研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义。而转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽,具有多种生物学作用。本研究选择转化生长因子-β2(TGF-β2)为研究对象,检测其在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况,观察和分析TGF-β2的动态表达变化,探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。方法:选10w龄正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型,血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠,于第4,8,12,16,20,24wk分别分离视网膜,液氮保存,应用RT-PCR检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。结果:(1)制备大鼠视网膜总RNA,甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降解,能够用于基因表达分析。(2)用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型。(3)与正常对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA表达于4wk时升高,但统计学上差异无显著性(P>0.05);8wk时则下降,差异有显著性(P<0.05);12wk时仍下降,差异有显著性(P<0.05),较8wk时已出现上升趋势;16wk时与正常对照组无明显差异(P>0.05);20wk时则开始升高,但差异无显著性(P>0.05);24wk时继续升高,差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8wk、12wk时明显降低,第24wk时明显升高,可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性。一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点,另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用。

不同程度哮喘急性发作患者外周血白介素-17及转化生长因子-β2的检测及其意义

目的:探讨不同程度哮喘急性发作患者外周血白介素-17(IL-17)及转化生长因子-β2(TGF-β2)的检测及其意义。方法:选取2014年3月至2016年3月在我院就诊的哮喘急性发作患者81例,根据病情严重程度,分为轻度组、中度组、重度组。同时选取20例健康志愿者作为对照组,比较分析四组的一般资料差异、肺功能、外周血IL-17、TGF-β2水平及相关性分析。结果:四组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。四组FEV1%pred、IL-17、TGF-β2水平组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,哮喘轻度、中度、重度组FEV1%pred水平显著降低,IL-17、TGF-β2水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着哮喘病情加重,FEV1%pred水平越低,IL-17、TGF-β2水平越高,差异有统计学意义(P<0.05)。患者IL-17、TGF-β2水平与哮喘患者FEV1%pred均呈负相关(r=-0.687、-0.471,P <0. 01);与患者年龄、BMI无相关性(P> 0.05);外周血IL-17与TGF-β2水平呈正相关(r=0.434,P<0.01)。结论:外周血TGF-β2、IL-17水平与哮喘患者肺功能呈负相关,且病情越重,TGF-β2、IL-17水平越高。

骨形态发生蛋白-2及转化生长因子-β2在大鼠角膜成长过程中的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β2(TGF-β2)在正常大鼠角膜生长发育过程中的表达及作用。方法用免疫组织化学方法观察TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2分别在大鼠胚胎17d,出生当天,出生后4、7、10 d和11周角膜蛋白水平的表达。结果BMP-2和TGF-β2在大鼠胚胎17 d时有表达,于出生当天至出生后10 d及成年鼠角膜生长发育过程中呈动态变化过程。结论TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2在鼠角膜的表达随着角膜的生长发育而调节,BMP-2可能与角膜的生长发育及维持出生后角膜的动态平衡有关。

叶黄素对转化生长因子-β2诱导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化的影响

目的·建立转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigmentepithelium cell,RPE)上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)模型,探讨叶黄素的作用及其机制。方法·体外培养ARPE-19细胞,分为空白组、TGF-β2组、TGF-β2+叶黄素组、叶黄素组。采用real-time PCR检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、上皮钙黏素(E-cadherin)mRNA的表达。Western blotting检测各组细胞中α-SMA、FN、闭合蛋白(occludin)的蛋白表达。采用免疫荧光检测α-SMA的表达。同时用Western blotting检测TGF/Smad通路下游Smad3的磷酸化水平。结果·TGF-β2+叶黄素组EMT程度有明显减轻。纤维化指标α-SMA、FN的mRNA、蛋白表达下降,与TGF-β2组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。同时,上皮细胞相关指标E-cadherin mRNA、occludin蛋白的表达上调(均P<0.05)。免疫荧光结果显示,叶黄素可明显抑制上皮细胞转化为肌成纤维细胞。此外,TGF-β2诱导ARPE-19细胞EMT过程中发生Smad3磷酸化水平升高现象可被叶黄素干预(P=0.001)。结论·叶黄素通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制ARPE-19细胞EMT过程,具有潜在的抑制视网膜下纤维化的作用。

转化生长因子-β2促进牙髓干细胞增殖和分化的作用研究

目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)对牙髓干细胞(DPSCs)增殖和分化的影响。方法分离、培养DPSCs,分为阴性对照组、阳性对照组和TGF-β2组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力,碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测细胞内ALP活性,蛋白质印迹法检测Runt相关转录因子2(Runx2)、骨涎蛋白(BSP)和骨桥蛋白(OPN)的表达,免疫组织化学染色检测Runx2阳性表达。结果与阳性对照组相比,TGF-β2作用3、7、10 d后DPSCs的活力不断升高,细胞内ALP活性上调,Runx2、BSP和OPN蛋白表达水平升高,Runx2阳性表达程度升高(P<0.05)。结论TGF-β2可促进DPSCs增殖及成骨分化。

骨形态发生蛋白-6对转化生长因子-β2所致视网膜色素上皮细胞迁移的影响

目的探讨骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对转化生长因子-β2(TGF-β2)所致视网膜色素上皮(RPE)细胞迁移的影响。方法RPE细胞常规培养后,用5μg·L-1 TGF-β2处理48 h,Western blot检测细胞中BMP-6蛋白水平的变化,Transwell法检测细胞迁移能力变化。随后,筛选BMP-6 siRNA抑制率最高的片段用于后续实验,构建BMP-6过表达质粒并进行鉴定后用于后续实验,RPE细胞随机分组,即(1)对照组加入正常培养基培养48 h;(2)TGF-β2组培养基中加入5μg·L-1 TGF-β2培养48 h;(3)BMP-6 siRNA组转染BMP-6-homo-1087后培养48 h;(4)BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒后培养48 h;(5)TGF-β2+BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒24 h后,加入5μg·L-1TGF-β2继续培养48 h。Transwell法检测细胞迁移数的变化,倒置显微镜观察细胞形态的变化。结果TGF-β2组迁移细胞数为(122.00±5.57)个,与对照组(63.67±4.04)个相比差异有统计学意义(P=0.000)。TGF-β2组BMP-6蛋白表达水平为0.41±0.13,与对照组(0.70±0.08)相比差异具有统计学意义(P=0.031)。BMP-6 siRNA组迁移细胞数为(115.67±1.53)个,与对照组(57.00±7.00)个相比差异具有统计学意义(P=0.000)。BMP-6过表达组迁移细胞数为(44.33±5.51)个,与对照组(60.00±6.25)个相比差异无统计学意义(P=0.076)。TGF-β2+BMP-6过表达组迁移细胞数为(90.33±3.51)个,与TGF-β2组(112.00±9.64)个相比差异具有统计学意义(P=0.016)。结论BMP-6可以阻止TGF-β2所致的RPE细胞的迁移,为增生性玻璃体视网膜病变的防治提供新的视角。

转化生长因子-β2在促进胚胎干细胞分化成心肌细胞过程中对GATA6表达的影响

目的:研究转化生长因子-β2(TGF-β2)在促进胚胎干细胞(ESCs)分化成心肌细胞中对GATA6表达的影响。方法:用"悬滴"法研究ESCs分化成心肌细胞。将ESCs(CGR8)分为对照组、TGF-β2(2 ng/ml)处理组和TGF-β2(10 ng/ml)处理组。第7天测量拟胚体(EBs)的直径,第14天统计贴壁拟胚体自发节律性跳动的百分数,免疫组织化学和免疫印迹检测GATA6的表达变化。结果:TGF-β2(10 ng/ml)可显著促进拟胚体生长,提高贴壁拟胚体跳动的百分数和促进高贴壁拟胚体中GATA6的表达。结论:TGF-β2促进ESCs分化成心肌细胞,可能与其上调GATA6表达相关。

转化生长因子-β2 与支气管哮喘

支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性非特异性炎症性疾病。转化生长因子-β1在哮喘患者气道中表达增高，它通过刺激气道平滑肌增殖、诱导气道肌成纤维细胞转化、促进细胞外基质合成而参与气道重建，同时也直接参与哮喘气道炎症。

转化生长因子-β2在小鼠过敏性气道炎症及重塑中的作用与干预潜能

目的探讨转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)在过敏原引起的哮喘气道炎症和重塑中的作用及其靶向干预的治疗潜能。方法以呈现TGF-β2肽表位的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)/TGF-β2病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)免疫6只雌性BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中TGF-β2特异的IgG应答,细胞试验检测抗体对TGF-β2活性的中和能力。卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)短期刺激诱导急性气道过敏性炎症,细胞试验检测小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中TGF-β活性水平;ELISA法检测小鼠血清中OVA特异的IgE水平;光学显微镜下进行BALF中炎性细胞总数及分型计数,并用ELISA法检测BALF中细胞因子水平。经OVA慢性刺激诱导气道纤维化,肺组织切片Masson’s trichrome检测胶原积累,并用Sircol胶原检测试剂盒进行可溶性胶原含量定量分析。结果VLPs免疫诱导了TGF-β2特异性IgG应答,抗血清可有效中和TGF-β2活性。小鼠急性气道过敏性炎症模型中,VLPs免疫下调了气道活性TGF-β水平,显著促进了血清中OVA特异性IgE产生,对气道以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润显示抑制作用,显著促进了Th2炎性细胞因子在气道中的积累。慢性肺纤维化模型中,VLPs免疫显著下调了肺组织胶原沉积及可溶性胶原水平。结论HBcAg/TGF-β2 VLPs免疫是调控TGF-β2作用的有效手段,TGF-β2在过敏原诱导的炎症应答中总体显示抑制作用,但在纤维化中发挥促进作用。

新生血管性青光眼患者内皮素-1、趋化因子受体7、转化生长因子-β2、白细胞介素-6水平变化及其相关性分析

目的探讨新生血管性青光眼患者血清内皮素-1、趋化因子受体7(CXCR7)、转化生长因子-β2(TGF-β2)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化及其相关性。方法本研究为前瞻性队列研究,选取2019年6月至2023年8月西电集团医院眼科收治的82例新生血管性青光眼患者作为病例组,男43例,女39例,年龄(55.49±4.32)岁,年龄范围为34~68岁。根据其临床分期情况分为Ⅰ期组(n=25)、Ⅱ期组(n=30)和Ⅲ期组(n=27)。另选取同期西电集团医院眼科收治的110例年龄相关性白内障患者作为对照组,男57例,女53例,年龄(55.37±4.41)岁,年龄范围为33~68岁。比较病例组与对照组、不同临床分期新生血管性青光眼患者的内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6水平,采用Pearson相关性分析新生血管性青光眼患者血清内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6水平之间的相关性,绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析血清内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6单一及联合检测对新生血管性青光眼的预测价值。结果Pearson相关性分析结果显示,新生血管性青光眼患者血清内皮素-1水平与血清CXCR7、TGF-β2、IL-6水平呈正相关(r=0.513、0.492、0.486,P<0.05);血清CXCR7水平与血清TGF-β2、IL-6水平呈正相关(r=0.526、0.489,P<0.05);血清TGF-β2水平与血清IL-6水平呈正相关(r=0.504,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6联合检测预测新生血管性青光眼的曲线下面积为0.916,高于内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6单一检测(0.797、0.830、0.724、0.819,P<0.05)。结论内皮素-1、CXCR7、TGF-β2、IL-6在新生血管性青光眼患者中呈高表达,四者可参与患者疾病进展过程,且四者联合检测预测新生血管性青光眼的价值更高。

转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。

转化生长因子-β_2体外诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的观察

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)在转化生长因子(TGF-β2)诱导下向软骨细胞表型转化的能力,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可能性。方法抽取兔髂骨骨髓液3～4ml,进行原代和传代培养,传代后实验组以高糖DMEM无血清特定培养液诱导,培养液含TGF-β210ng/ml、地塞米松10-7mol/L、维生素C50μmol/L;对照组以高糖DMEM无血清培养液培养,相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变,诱导21d后细胞形态变化最为显著,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色深而均匀。结论TGF-β2可有效诱导MSCs向软骨细胞表型转化,分泌软骨细胞特异性基质,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。

特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)特异性短发夹RNA(shRNA)对人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000)。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为(543.58±25.32)、(400.26±30.74)、(202.72±23.24)ng/L,明显低于阴性对照组的(659.78±20.95)、(547.45±24.65)、(442.87±17.43)ng/L及空白组的(721.75±30.19)、(756.61±30.19)、(787.60±18.37)ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000)。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。

转化生长因子-β_2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨。方法出生3d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度。免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达。结果形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义(P<0·01),遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少(P<0·01),TGF-β2mRNA的表达下调。结论TGF-β2参与调控FDM形成。

胰岛素对人RPE细胞增殖及转化生长因子-β_2分泌的影响

目的:探讨胰岛素对RPE细胞增殖和分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响。方法:将不同浓度的胰岛素(0.1～10×103U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0～48h)。采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况;采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β2的情况,Real-time PCR法检测TGF-β2mRNA的表达情况。结果:MTS结果显示,作用12h后,各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05)。ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β2,并呈时间及剂量依赖性。Real-time PCR结果显示,胰岛素作用24h后,TGF-β2mRNA表达上调(P<0.01),且10×103U/mL胰岛素组TGF-β2mRNA表达明显高于0.1×103U/mL胰岛素组(P<0.01)。结论:RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β2的重要来源,胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β2进行信号传递,促进近视发生。