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不同生长底物对体外培养脊髓运动神经元的影响 被引量:1
1
作者 宋学琴 吴淑玉 +2 位作者 王丽琴 王晓绢 李春岩 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-104,F004,共4页
关键词 生长底物 体外培养 脊髓运动神经元 微环境 细胞外基质
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GDNF及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元的作用 被引量:1
2
作者 文灿 李淑蓉 +2 位作者 张艳玲 王晗知 苏炳银 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期882-884,共3页
目的探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响。方法取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cel... 目的探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响。方法取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF),并选取不同方法溶解多聚-D-赖氨酸(poly-D-lysine,PDL)包被培养盖片,观测交感神经元的存活和突起生长状况。结果用0.01mol/L硼酸溶解的PDL进行包被,细胞存活和突起生长最好,且神经元分散好,优于其他各组;GDNF对培养交感神经元的存活、突起生长具有显著的促进作用,且与其浓度存在量效关系,但它并不能阻止培养前5d存活神经元数量的减少。结论用0.01mol/L硼酸溶解PDL包被是一种良好的生长底物处理方法,GDNF能促进离体培养的交感神经元的存活和突起生长。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 生长底物 交感神经元
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表皮生长因子受体通路底物8疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能机制 被引量:2
3
作者 涂三芳 李玉华 +2 位作者 宋朝阳 邓兰 黄睿 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期55-61,共7页
目的:探索表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能的机制。方法:Western blotting检测EPS8蛋白在小鼠乳腺癌4T1细胞株中的表达。通过基因重组、表达和... 目的:探索表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能的机制。方法:Western blotting检测EPS8蛋白在小鼠乳腺癌4T1细胞株中的表达。通过基因重组、表达和纯化等技术制备特异性的小鼠源性EPS8,以EPS8蛋白为靶点制备抗肿瘤疫苗并免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定免疫前后不同时间小鼠血清内抗EPS8抗体效价;流式细胞术检测免疫前后的脾T淋巴细胞亚群比例。建立乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠模型并接种EPS8疫苗,接种佐剂作为对照,比较2组荷瘤小鼠的生存期、肿瘤体积、肿瘤重量,计算EPS8疫苗抑瘤率;流式细胞术检测荷瘤小鼠脾T淋巴细胞亚群比例,LDH法检测其细胞毒性T细胞(CTL)杀伤率。结果:EPS8蛋白在乳腺癌4T1细胞株中高表达。成功构建的EPS8蛋白疫苗免疫小鼠后产生抗EPS8抗体,且随着免疫次数的增加,小鼠体内抗EPS8抗体滴度呈上升趋势。乳腺癌4T1细胞接种于经EPS8疫苗或佐剂免疫后的小鼠后,与佐剂对照组相比,EPS8疫苗组小鼠生存期显著升高[中位生存时间:44(38~50) vs 37 (34~40) d; t=2.477, P=0.043],肿瘤质量显著降低[(2.21±0.35)vs(3.31±0.88)g;t=3.574,P=0.009],EPS8疫苗的抑瘤率为33.23%。EPS8疫苗组小鼠脾CD4+T比例和CD4+/CD8+比值均显著高于佐剂对照组(P〈0.001),EPS8疫苗组CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞的比值显著低于佐剂对照组(P〈0.001)。效靶比为20〖DK〗∶1时,EPS8疫苗组CTL对靶细胞的杀伤活性即显著高于佐剂对照组[(19.05±4.41)% vs (13.36±3.10)%;t=2.263,P=0.040] 。结论:EPS8疫苗不仅具有诱导小鼠产生体液免疫应答的功能,还能够降低荷瘤小鼠体内Treg细胞比例,激活机体内T细胞免疫功能;EPS8疫苗可抑制肿瘤的生长、有效延长荷瘤小鼠的生存期。 展开更多
关键词 肿瘤疫苗 表皮生长因子受体通路8 乳腺癌 4T1细胞
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表皮生长因子受体通路底物8、硫酸乙酰肝素酶以及基质金属蛋白酶在急性白血病的表达及其相关性研究 被引量:1
4
作者 白学琴 云雁 +3 位作者 张冬霞 卢艳 贾国荣 韩轩茂 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第S01期79-82,共4页
目的通过分析急性白血病(AL)患者骨髓液表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、硫酸乙酰肝素酶(HPSE)以及基质金属蛋白酶(MMP)表达水平,评估3种指标联合检测对患者病情及预后的预测价值。方法将2017年10月—2018年10月于内蒙古科技大学包头... 目的通过分析急性白血病(AL)患者骨髓液表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、硫酸乙酰肝素酶(HPSE)以及基质金属蛋白酶(MMP)表达水平,评估3种指标联合检测对患者病情及预后的预测价值。方法将2017年10月—2018年10月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院血液科治疗的60例患者分为两组:急性白血病患者为实验组(AL组)和缺铁性贫血患者为对照组,每组30例。收集每组患者骨髓标本,应用RT-PCR法检测EPS8、HPSE以及MMP-2的mRNA表达水平,应用流式细胞检测技术检测骨髓细胞表面EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平。通过比较两组EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平,应用多因素Logistic回归分析进一步探讨急性白血病完全缓解与未缓解组的因子表达及其临床相关意义。结果急性白血病患者骨髓液中EPS8、HPSE以及MMP-2因子表达水平与对照组存在显著差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,MMP-2、EPS8是随访1年患者是否完全缓解的影响因素(P<0.05)。结论急性白血病患者骨髓EPS8、HPSE以及MMP-2表达水平升高,且联合检测患者骨髓白血病细胞中EPS8、MMP水平能较好地评估AL患者的临床转归及预后。 展开更多
关键词 急性白血病 表皮生长因子受体通路8 硫酸乙酰肝素酶 基质金属蛋白酶
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肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物过表达促进心肌细胞自噬
5
作者 王添乐 李振华 +1 位作者 杨晓 王剑 《生物技术通讯》 CAS 2017年第6期737-741,共5页
目的:构建和包装携带肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(Hgs)全长基因的重组腺病毒,并研究Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响。方法:PCR扩增Hgs全长cDNA,将其连接到pMD18-T载体上,测序确认正确后将其克隆到腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV,... 目的:构建和包装携带肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(Hgs)全长基因的重组腺病毒,并研究Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响。方法:PCR扩增Hgs全长cDNA,将其连接到pMD18-T载体上,测序确认正确后将其克隆到腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV,该载体线性化后转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAd Easy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-Hgs;将pAd-Hgs线性化后经脂质体转染293A细胞进行Ad-Hgs病毒的包装与扩增;用得到的Ad-Hgs腺病毒感染心肌细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western印迹、real-time PCR确认病毒感染的有效性以及Hgs过表达情况;通过Western印迹检测自噬标志物LC3的转换(LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ),以分析Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响。结果:包装了携带Hgs基因的重组腺病毒Ad-Hgs;Ad-Hgs重组腺病毒感染心肌细胞后,荧光显微镜观察到明显的GFP表达;real-time PCR、Western印迹结果显示Hgs在心肌细胞中得到过表达;Western印迹结果证明,Hgs过表达导致心肌细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高。结论:通过包装携带Hgs cDNA的重组腺病毒,发现Hgs过表达促进心肌细胞自噬。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶(Hgs) 重组腺病毒载体 心肌细胞 自噬
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肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物对胰岛素表达和分泌的影响 被引量:4
6
作者 蒋成燕 巴俊强 +2 位作者 虞萌 徐台林 徐子辉 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1119-1123,共5页
目的探讨肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)对胰岛素表达和分泌的影响。方法检测HGS,胰岛素和胰升血糖素在小鼠胰岛中的分布。检测不同浓度葡萄糖(5.5、11.1及16.7mmol/L)培养24h后NIT-1细胞HGS表达水平和胰岛素的分泌。观察siRN... 目的探讨肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)对胰岛素表达和分泌的影响。方法检测HGS,胰岛素和胰升血糖素在小鼠胰岛中的分布。检测不同浓度葡萄糖(5.5、11.1及16.7mmol/L)培养24h后NIT-1细胞HGS表达水平和胰岛素的分泌。观察siRNA沉默HGS表达后48h NIT-1细胞胰岛素的表达和分泌的变化。结果 HGS免疫阳性细胞特异性分布于小鼠胰腺的胰岛,并与胰岛素共定位于胰岛β细胞中,未见HGS和胰高血糖素阳性荧光双标细胞。不同浓度葡萄糖培养NIT-1细胞24h,5.5mmol/L组为(25.07±0.93)μIU/mg,11.1mmol/L组为(32.28±0.93)μIU/mg,16.7mmol/L组为(41.77±1.39)μIU/mg,NIT-1细胞分泌胰岛素水平逐渐增加(P<0.01)。各组HGS蛋白水平也随葡萄糖浓度增加而逐渐增加(P<0.05)。siRNA沉默HGS表达后NIT-1细胞内胰岛素的表达水平无明显变化,但胰岛素分泌水平减少(P<0.05)。结论 HGS选择性表达于胰岛β细胞中,并调节胰岛素的分泌。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶 胰岛素 胰岛Β细胞
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Eps8在恶性血液肿瘤细胞株中的表达分析 被引量:9
7
作者 熊文艳 陆志刚 +3 位作者 涂三芳 吴海燕 宋朝阳 李玉华 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第12期9-11,共3页
目的探讨表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在人类恶性血液肿瘤细胞株中的表达情况及其差异。方法分别利用实时荧光定量RT-PCR法及Western blot法检测6种恶性血液肿瘤细胞株中Eps8 mRNA及蛋白的表达情况。结果 ARH-77细胞株中Eps8 mRNA... 目的探讨表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在人类恶性血液肿瘤细胞株中的表达情况及其差异。方法分别利用实时荧光定量RT-PCR法及Western blot法检测6种恶性血液肿瘤细胞株中Eps8 mRNA及蛋白的表达情况。结果 ARH-77细胞株中Eps8 mRNA为健康者外周血单个核细胞(PBMNCs)中的(1.278 6±0.188 0)倍(P=0.008),Raji细胞株中为PBMNCs中的(0.011 0±0.001 0)倍(P=0.000)。EPS8蛋白在KG1a、ARH-77细胞株中高表达,在其他4种细胞株及健康正常人PBMNCs中均未见Eps8蛋白表达。结论本研究首次发现了Eps8在部分恶性血液肿瘤细胞株中高表达,为恶性血液肿瘤治疗新靶点的筛选提供了理论依据。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体通路8 血液肿瘤 细胞系
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血管生成素1对大鼠血-脊髓屏障功能的增强作用 被引量:1
8
作者 徐婉茹 《神经损伤与功能重建》 2017年第4期290-293,共4页
目的:探讨血管生成素1(Ang1)对大鼠血-脊髓屏障功能的增强作用,及表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在此增强过程的作用。方法:分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型。以Ang 1处理的SCMEC为Ang1处理组,未处... 目的:探讨血管生成素1(Ang1)对大鼠血-脊髓屏障功能的增强作用,及表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在此增强过程的作用。方法:分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型。以Ang 1处理的SCMEC为Ang1处理组,未处理的为对照组。于Ang1处理后于不同时间点(0 h、4 h、8 h、12 h)测定各组跨内皮电阻(TEER)值,比较2组Eps8蛋白的表达水平。再将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Angl组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang 1处理,比较不同组间Eps8蛋白的表达水平与TEER值。结果:Ang1处理组4 h、8 h、12 h SCMEC的TEER值均明显高于对照组(P<0.05),Eps8蛋白的表达水平均高于对照组(P<0.05)。Eps8 siRNA组SCMEC中Eps8蛋白的表达水平明显低于对照siRNA组(P<0.05),而与Eps8 siRNA+Ang1组间差异无统计学意义(P>0.05);Eps8 siRNA组不同时间点TEER值均明显低于对照siRNA组(P<0.05);Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组间TEER值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Ang1可增强大鼠血-脊髓屏障的功能,其机制可能与Eps8有关。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体通路8 血管生成素1 血-脊髓屏障功能 大鼠
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顺铂作用下卵巢癌细胞株CP70中Eps8表达变化研究
9
作者 王冰 杨勇 辛晓燕 《陕西医学杂志》 CAS 2014年第11期1453-1455,1459,共4页
目的:观察肿瘤相关抗原Eps8在卵巢癌细胞株A2780、CP70、SKOV3、SKOV3/DDP中的表达情况,筛查出Eps8高表达细胞株CP70。观察顺铂(DDP)作用下CP70细胞中Eps8在蛋白水平表达的变化,探讨Eps8在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法:用实时荧光定量... 目的:观察肿瘤相关抗原Eps8在卵巢癌细胞株A2780、CP70、SKOV3、SKOV3/DDP中的表达情况,筛查出Eps8高表达细胞株CP70。观察顺铂(DDP)作用下CP70细胞中Eps8在蛋白水平表达的变化,探讨Eps8在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法:用实时荧光定量PCR法检测Eps8在卵巢癌细胞株中mRNA的表达水平,用Western blot法检测Eps8蛋白表达水平,筛选出高表达株CP70。用不同浓度DDP作用于CP70细胞24h、48h,用Western blot法检测Eps8在蛋白水平的变化。结果:随着药物浓度的增加及作用时间的延长,Eps8在蛋白水平的表达明显升高。结论:顺铂处理CP70细胞后,Eps8的蛋白表达量升高,且和DDP作用的时间及剂量有依赖性,即DDP可诱导CP70细胞中Eps8表达的上调。因此推测,Eps8在卵巢癌顺铂耐药形成机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 @表皮生长因子受体通路8 @CP70细胞 顺铂/药理学 卵巢肿瘤/免疫学
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柔红霉素对KG1a细胞增殖及肿瘤相关抗原Eps8表达的影响 被引量:2
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作者 甘金莹 熊文艳 +2 位作者 王磊 蔡宋浩 李玉华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期49-52,共4页
本研究旨在观察柔红霉素(DNR)对KG1a细胞株的杀伤抑制作用及新型肿瘤相关抗原表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在KG1a细胞中的表达,在mRNA和蛋白水平探讨DNR作用于KG1a后对Eps8表达的影响。不同浓度DNR作用于KG1a细胞24、48和72 h,用台... 本研究旨在观察柔红霉素(DNR)对KG1a细胞株的杀伤抑制作用及新型肿瘤相关抗原表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在KG1a细胞中的表达,在mRNA和蛋白水平探讨DNR作用于KG1a后对Eps8表达的影响。不同浓度DNR作用于KG1a细胞24、48和72 h,用台盼蓝拒染色法检测药物对KG1a细胞的杀伤抑制率,用实时荧光定量PCR法检测Eps8 mRNA转录水平的变化和Western blot法观察Eps8蛋白表达变化。结果表明:随着药物浓度(0.1,0.4μg/ml)的增加及作用时间(24,46,72 h)的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率显著提高(r=0.983,P<0.01);不同DNR药物浓度作用于KG1a 24、48和72 h后,Eps8表达水平以DNR作用浓度和时间依赖方式明显下降(r=0.979,P<0.05)。结论:随药物浓度的增加和作用时间的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率提高,使Eps8表达下降,推测降低Eps8的表达可能是DNR抑制KG1a细胞增殖的机制之一。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体通路8 KG1a细胞 柔红霉素
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Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察
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作者 姜春俊 周炜均 +4 位作者 谢晓灵 杜静文 张宏毫 贺艳杰 李玉华 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第26期1-5,共5页
目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分... 目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分子的结合力,筛选出稳定结合的改造表位E1-9V(ILDDIEFFV)、E1-1Y9V(YLDDIEFFV)。用经典肽结合力实验检测各改造表位与HLA-A*0201分子的亲和力。制备天然表位(E1)、E1-9V、E1-1Y9V特异性杀伤性T淋巴细胞(CTLs)。用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测并比较E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7细胞、沉默Eps8的MCF-7细胞(MCF-7/shRNA)和抗HLA-A2抗体预孵育的MCF-7细胞(MCF-7/A2Ab)的杀伤率,E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251、K562、IM-9细胞的杀伤率,E1、E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率。结果 E1-9V、E1-1Y9V均可与HLA-A*0201分子B、F对接口袋的氨基酸形成稳定氢键。肽结合力实验结果显示E1-9V、E1-1Y9V与HLA-A*0201均具有高亲和力,且高于天然表位E1,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7/shRNA、MCF-7/A2Ab细胞杀伤率明显低于MCF-7细胞,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251细胞杀伤率明显高于K562、IM-9细胞(P均<0.05)。E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率显著高于E1、E1-9V特异性CTLs,P均<0.05。结论 Eps8抗原改造表位E1-9V、E1-1Y9V与天然表位E1相比具有更高的HLA-A*0201分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且E1-1Y9V抗肿瘤免疫效应强于天然表位E1。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体通路8 抗原改造改造表位 细胞毒性T淋巴细胞 肿瘤疫苗 人白细胞抗原A*0201
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Effects of water depth and substrate color on the growth and body color of the red sea cucumber,Apostichopus japonicus 被引量:3
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作者 姜森颢 董双林 +2 位作者 高勤峰 任贻超 王芳 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期616-623,共8页
Three color variants of the sea cucumber,Apostichopus japonicus are recognized,the red one is highly valued in the market. When the red variant is cultured in ponds in China,its body color changes from red to celadon ... Three color variants of the sea cucumber,Apostichopus japonicus are recognized,the red one is highly valued in the market. When the red variant is cultured in ponds in China,its body color changes from red to celadon in 3–6 months. The effects of water depth and substrate color on the growth and body color of this animal were investigated. Juveniles of red A. japonicus were cultured in cages suspended at a range of water depths(20,50,100,150 and 200 cm). The specific growth rate of red sea cucumbers was significantly higher in animals cultured at deeper water layers compared with those grown at shallowers. Body weights were greatest for sea cucumbers cultured at a depth of 150 cm and their survival rates were highest at a depth of 200 cm. A scale to evaluate the color of red sea cucumbers(R value) was developed using a Pantone standard color card. All stocked animals in the 9-month trial retained a red color,however the red body color was much more intense in sea cucumbers cultured at shallower depths,while animals suspended in deeper layers became pale. In a separate trial,A. japonicus were cultured in suspended cages with seven different colored substrates. Substrate color had a significant effect on the growth and body-color of red A. japonicus. The yield were greatest for A. japonicus cultured on a yellow substrate,followed by green > white > orange > red > black and blue. All sea cucumbers in the 7-month trial retained a red color,although the red was most intense(highest R value) in animals cultured on a blue substrate and pale(lowest R value) for animals cultured on a green substrate. 展开更多
关键词 Apostichopusjaponicus water depth substrate color GROWTH body color
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miR-3074通过靶向EPS8基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响
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作者 罗全慧 尹恒 +2 位作者 黄柯 王锦星 赵琳 《医学研究杂志》 2023年第1期66-71,共6页
目的探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。... 目的探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-3074在宫颈癌细胞系(SiHa、HCC94、C33A、HeLa)和正常宫颈上皮细胞H8中的表达。选取miR-3074表达最低的细胞系,分别转染对照模拟物(对照组)和miR-3074模拟物(miR-3074组)。CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活力和侵袭能力。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-3074的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3074与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3074对靶基因表达的影响。结果miR-3074表达水平较高的宫颈癌患者总生存期长于miR-3074表达水平较低的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。与H8细胞比较,宫颈癌细胞系中miR-3074表达降低(P<0.05),miR-3074表达最低的细胞系是HCC94(P<0.01)。对照组和miR-3074组miR-3074表达分别为1.03±0.17和13.49±2.66,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组HCC94细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01)。miR-3074能作用于EPS8mRNA的3′非翻译区(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组EPS8基因表达显著降低(P<0.01)。结论miR-3074在宫颈癌细胞系中表达下调,miR-3074能够抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向抑制EPS8表达有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 微小RNA 表皮生长因子受体通路8 细胞增殖 细胞侵袭
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FGF-receptor substrate 2 functions as a molecular sensor ntegrating external regulatory signals into the FGF pathway 被引量:2
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作者 Wenchao Zhou Xiujing Feng +3 位作者 Yingjie Wu Johannes Benge Zhe Zhang Zhengjun Chen 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第10期1165-1177,共13页
Fibroblast growth factor (FGF) receptor substrate 2a (FRS2α) is the main mediator of signaling in the FGF pathway. Recent studies have shown that mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphorylates serine an... Fibroblast growth factor (FGF) receptor substrate 2a (FRS2α) is the main mediator of signaling in the FGF pathway. Recent studies have shown that mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphorylates serine and threonine residues in FRS2, negatively affecting FGF-induced tyrosine phosphorylation (PY) of FRS2. Several kinds of stimuli can induce serine/threonine phosphorylation (PS/T) of FRS2, indicating that FRS2 may be useful for studying crosstalk between growth factor signaling pathways. Here, we report that FGF-induced PY of FRS2 can be attenuated by EGF co-stimulation in PC12cells; this inhibitory effect could be completely reversed by U0126, an inhibitor of MEK. We further identified the ERK1/2-binding motif in FRS2 and generated FRS2-3KL, a mutant lacking MAPK binding and PT upon FGF and/or EGF stimulation. Unlike wild-type (WT) FRS2, FGF-induced PY of FRS2-3KL could not be inhibited by EGF co-stimulation, and FRS2-3KL-expressing PC12 cells exhibited more differentiating potential than FRS2-WT-expressing cells in response to FGF treatment. These results suggest that PS/T of FRS2 mediated by the FRS2-MAPK negative regulatory loop may function as a molecular switch integrating negative regulatory signals from other pathways into FGFR-generated signal transduction. 展开更多
关键词 fibroblast growth factor (FGF) epithelial growth factor (EGF) crosstalk threonine phosphorylation CO-STIMULATION
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MicroRNA-613靶向调控FRS2抑制肾母细胞瘤发生发展
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作者 杨以恒 藏平 张伟同 《贵州医药》 CAS 2019年第9期1347-1351,共5页
目的探讨肾母细胞瘤组织中miR-613表达水平及其抑制肾母细胞瘤细胞增殖的作用机制。方法收集64例肾母细胞瘤患者术后肾母细胞瘤组织及癌旁组织标本,用PCR检测组织中miR-613表达量。在SK-NEP-1和G401肾母细胞瘤细胞中转染miR-613模拟物,... 目的探讨肾母细胞瘤组织中miR-613表达水平及其抑制肾母细胞瘤细胞增殖的作用机制。方法收集64例肾母细胞瘤患者术后肾母细胞瘤组织及癌旁组织标本,用PCR检测组织中miR-613表达量。在SK-NEP-1和G401肾母细胞瘤细胞中转染miR-613模拟物,用Real-timePCR检测miR-613表达量。用MTT法检测miR-613对肾母细胞瘤细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测miR-613对肾母细胞瘤细胞凋亡的影响。用生信分析及双荧光素酶报告基因预测及验证miR-613和FRS2的靶向关系。用Real-timePCR和Westernblot法检测FRS2基因的mRNA及蛋白表达的影响。结果肾母细胞瘤组织中miR-613表达量显著低于癌旁组织(P<0.05)。miR-613表达量与肾母细胞瘤患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和病理学分型无关(P>0.05),与肿瘤临床病理分期相关(P<0.05)。转染miR-613mimics组肾母细胞瘤细胞中miR-613表达量显著高于空白组和miR-NC组(P<0.05)。在肾母细胞瘤细胞中,过表达miR-613能显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因证实FRS2是miR-613的靶基因,在肾母细胞瘤细胞中,过表达miR-613可抑制FRS2基因mRNA及蛋白表达量。结论miR-613是肾母细胞瘤发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调FRS2基因水平从而抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 肾母细胞瘤 microRNA-613 成纤维生长因子受体2
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EPS8L3对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响及作用机制
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作者 劳征虹 吴云红 +1 位作者 毛华君 管亮 《浙江医学》 CAS 2021年第9期959-963,共5页
目的探讨表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(EPS8L3)对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法采用RNA干扰下调乳腺癌MAD-MB-231细胞的EPS8L3表达水平,分为shRNA1-EPS8L3组、shRNA2-EPS8L3组、shRNA-NC组(空白对照)。采... 目的探讨表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(EPS8L3)对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法采用RNA干扰下调乳腺癌MAD-MB-231细胞的EPS8L3表达水平,分为shRNA1-EPS8L3组、shRNA2-EPS8L3组、shRNA-NC组(空白对照)。采用qRT-PCR法检测细胞EPS8L3、Rac1 mRNA表达情况,Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,划痕实验检测干扰前后乳腺癌细胞的迁移能力,侵袭实验检测干扰前后乳腺癌细胞的侵袭能力。结果与shRNA-NC组相比,shRNA1-EPS8L3组和shRNA2-EPS8L3组细胞EPS8L3 mRNA、Rac1 mRNA表达水平均降低(均P<0.05),细胞迁移、侵袭能力均减弱(均P<0.05),上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达上调(均P<0.05),间质细胞标志物波形蛋白、纤黏蛋白表达下调(均P<0.05)。结论EPS8L3可能通过影响Rac1表达调节乳腺癌细胞EMT过程和迁移、侵袭,提示EPS8L3与乳腺癌发生、发展相关,可能为乳腺癌诊治提供新的靶点。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体激酶8样蛋白3 乳腺癌 侵袭 RAC1
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miR-4727-5p通过调控EPS8L3表达抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移
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作者 黄向华 褚飞虎 +2 位作者 金慧 陈铃丽 毛俊峰 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第3期293-298,共6页
目的 探讨微小RNA-4727-5p(miR-4727-5p)靶向表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3,EPS8L3)抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的分子作用机制。方法 选取2019年2月至2021年9... 目的 探讨微小RNA-4727-5p(miR-4727-5p)靶向表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3,EPS8L3)抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的分子作用机制。方法 选取2019年2月至2021年9月在南通大学附属肿瘤医院(南通市肿瘤医院)乳腺外科手术切除的38例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,以及乳腺癌细胞系MB-MDA-468、SKBR3、MCF-7、T-47D及正常乳腺上皮细胞MCF-10A,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测乳腺癌组织和细胞系中miR-4727-5p的表达。将重组质粒miR-4727-5p或空载质粒转染至T-47D细胞,分别命名为miR-4727-5p组和对照组(Ctrl组)。用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕愈合试验分别分析T-47D细胞的增殖和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4727-5p与EPS8L3 mRNA非翻译区的靶向关系。qRT-PCR和Western blot检测EPS8L3基因和EGFR信号通路蛋白p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1的表达。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织miR-4727-5p表达显著降低(P<0.01)。与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系中miR-4727-5p表达显著降低(P<0.05)。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组T-47D细胞增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,EPS8L3是miR-4727-5p的靶基因。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组EPS8L3基因表达水平明显降低(P<0.01),p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1蛋白表达水平明显降低。结论 miR-4727-5p通过靶向抑制EPS8L3基因表达,干扰EGFR信号通路转导,从而抑制乳腺癌T-47D细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 乳腺癌 T-47D细胞 miR-4727-5p 表皮生长因子受体激酶8样蛋白3
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Effect of Substrate Nitridation on Properties of Thick GaN Film Grown by Hydride Vapour Phase Epitaxy
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作者 YEHao-hua YUGuang-hui +2 位作者 LEIBen-lian QIMing LIAi-zhen 《Semiconductor Photonics and Technology》 CAS 2005年第1期28-31,共4页
Thick GaN films were grown on the sapphire substrate by hydride vapour phase epitaxy. The properties of GaN films were found to be significantly influenced by the duration of exposing the sapphire substrate to ammonia... Thick GaN films were grown on the sapphire substrate by hydride vapour phase epitaxy. The properties of GaN films were found to be significantly influenced by the duration of exposing the sapphire substrate to ammonia prior to the GaN growth initiation. The crystalline quality of GaN films revealed by high resolution X-ray diffraction were strongly dependent on the nitridation time, which determined substrate surface topography. The different nitridation schemes strongly affected the morphology of GaN overlayers resulting in the blue shift of the main excitonic peak in photoluminescence spectra at room temperature. 展开更多
关键词 substrate nitridation GaN hydride vapour phase epitaxy
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成纤维生长因子受体1通过控制微小RNA let-7b表达调节内皮细胞线粒体生源的作用研究 被引量:2
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作者 胡琼英 杨矫 +1 位作者 陈高莉 陈秋 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期404-409,共6页
目的探索成纤维生长因子受体l(fihrohlast growth factor receptor1,FGFRl)在调控内皮稳态时对上游分子N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline、AcSDKP)的影响和下游微小RNAlet-7(microR... 目的探索成纤维生长因子受体l(fihrohlast growth factor receptor1,FGFRl)在调控内皮稳态时对上游分子N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline、AcSDKP)的影响和下游微小RNAlet-7(microRNA let-7、miR let-7)的诱导作用及与内皮细胞线粒体生源的关系,以期最终研究FGFR1在内皮稳态中的调控作用。方法下调FGF/FGFRl信号通路,蛋白质印迹(Western印迹.WB)法和细胞免疫荧光(Immunofluorescence staining)技术检测线粒体融合蛋白MFN2(mitofusin-2)、OPA1(optic atrophy protein1)和分裂蛋白DRP1(dynamin-related protein-1)的表达;应用线粒体染色(MitoTraker Green)检测线粒体的生成;运用实时荧光定量核酸扩增(Real-time Quantitative PCR、qPCR)检测技术检测microRNA let-7的表达。结果FGFRl通过诱导microRNA let-7b一5p的生成促进AcSDKP维持线粒体的生源;AcSDKP修复细胞因子复合物Triple(TGF-β2、IL-1β和TNF-α)所引起microRNA let-7b-5p表达抑制与线粒体的生成密切相关;抑制microRNA let-7b-5p的表达后,AcSDKP失去促进线粒体生成的作用:上调microRNA let-7b-5p的表达后,可修复内皮细胞中因FGF/FGFRl底物FRS2(fibroblast growth factor receptor substrate)沉默所致通路缺失所致的线粒体生成障碍。结论FGFRl通过上调microRNA let-7b-5p的表达,促进线粒体的生成,从而在内皮细胞的稳态中起着十分重要的作用。 展开更多
关键词 成纤维生长因子受体1 成纤维生长因子受体2 线粒体生源 微小RNA let-7b-5p
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血管生成素1通过调节Eps8的表达增强大鼠血-脊髓屏障功能 被引量:4
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作者 刘欣春 彭云飞 王森 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1000-1005,共6页
目的探讨表皮生长因子受体底物蛋白8(Eps8)在血管生成素1(Ang1)增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用。方法分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型。(1)SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点... 目的探讨表皮生长因子受体底物蛋白8(Eps8)在血管生成素1(Ang1)增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用。方法分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型。(1)SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点(0h、4h、8h、12h)测定跨内皮电阻(TEER)值,Westernblotting检测Eps8蛋白的表达水平,以未用Ang1处理者为对照。(2)将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8siRNA组及Eps8siRNA+Ang1组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理。Westernblotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值,荧光分光光度计测定荧光素钠(Na-F)、伊凡斯兰(ESA)的通透率,纤维型肌动蛋白(F—actin)荧光染色观察细胞骨架变化。结果(1)Ang1处理后4h、8h、12hSCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。(2)Eps8siRNA组SCMECEps8的表达水平较对照siRNA组降低约75%,差异具有统计学意义(P〈0.05);而Eps8siRNA+Ang1组较Eps8siRNA组Eps8的表达水平无明显改变。Eps8siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低,对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高,差异均有统计学意义(P〈0.05);而Eps8siRNA+Ang1组与Eps8siRNA组相比,TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变。对照siRNA+Ang1组SCMEC经Ang1处理4h后,F—actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强。而Eps8siRNA+Ang1组则无此改变。结论Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血.脊髓屏障的分布,进而影响大鼠血,脊髓屏障功能。 展开更多
关键词 血管生成素1 表皮生长因子受体蛋白8 血-脊髓屏障 肌动蛋白骨架 调节蛋白 纤维型肌动蛋白
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