生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α在肝再生及肝病中的研究进展

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)是一种应激诱导蛋白,它可诱导Gadd45α基因的表达。GADD45α在再生肝及肝硬化、肝癌、肝衰竭等肝病中表达显著上调,与多种肝病发生发展及预后密切相关。GADD45α蛋白通过与其他蛋白相互作用,在调控细胞周期、维持基因组稳定、诱导细胞凋亡等方面发挥重要作用。以下我们综述了GADD45α与肝再生关系的研究进展,为进一步了解肝再生与肝脏疾病的发生机制以及治疗和预防肝病奠定基础。

下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β表达对PC9肺腺癌细胞的影响

目的:探讨下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β(growth arrest and DNA damage inducible protein 45β,GADD45β)表达对PC9肺腺癌细胞及吉非替尼敏感性的影响。方法:设计并合成GADD45β基因小干扰RNA(GADD45β-small interfering RNA,GADD45β-siRNA)序列,通过慢病毒介导将GADD45β-siRNA转入PC9肺腺癌细胞中,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western印迹检测转染前后PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA及蛋白水平,采用膜联蛋白V(annexin V)-别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)双染流式细胞法检测转染后细胞凋亡水平;通过流式细胞术检测转染后细胞内DNA含量,计算转染后细胞各周期时相百分率,分析转染对细胞生长周期的影响;通过计数克隆形成数检测RNA干扰对细胞成瘤能力的影响;采用MTT法检测PC9肺腺癌细胞的吉非替尼半数抑制浓度IC50。结果:筛选出5'-AAATCCACTTCACGCTCAT-3'为GADD45β基因RNA干扰的有效序列。转染GADD45β-siRNA 48 h后,qRT-PCR和Western印迹结果显示PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且成瘤克隆数明显减少(P<0.05);PC9肺腺癌细胞位于S期及G2/M期细胞增多(P<0.05),吉非替尼的IC50明显下降(P<0.05)。结论:PC9肺腺癌细胞转染GADD45β-siRNA后,能成功下调GADD45β基因的mRNA和蛋白表达;下调GADD45β表达可降低PC9肺腺癌细胞的克隆形成能力,促进细胞凋亡;下调GADD45β表达可明显提高PC9肺腺癌细胞对吉非替尼的敏感性。

生长抑制和DNA损伤诱导基因45β在足细胞损伤中的作用及机制

目的:研究生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45B)在足细胞损伤中的作用及机制。方法:微分离37例肾活检证实的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者肾小球,qRT-PCR检测肾小球GADD45B基因表达,同时进行免疫组化检测GADD45B蛋白表达。进一步利用模式动物斑马鱼研究GADD45B基因功能,Podocin启动子驱动和UAS/GAL4系统构建足细胞上特异性表达GADD45B转基因斑马鱼,硝基还原酶/甲硝唑(NTR/MTZ)系统特异性诱导足细胞损伤,观察斑马鱼水肿发生率,定量检测蛋白尿及足细胞凋亡。结果:FSGS患者肾小球GADD45B基因和蛋白表达水平显著高于正常对照组,并与FSGS患者白尿、血白蛋白及血肌酐水平密切相关;斑马鱼研究结果显示,足细胞上高表达GADD45B能够显著加重MTZ诱导的足细胞损伤,GADD45Ba/b转基因鱼的水肿发生率和蛋白尿水平均显著高于野生型斑马鱼。活性caspase染色结果显示,GADD45B转基因鱼发生凋亡的足细胞数显著高于非转基因鱼。吗啉环寡聚核苷酸注射斑马鱼抑制GADD45B基因表达,则MTZ诱导的斑马鱼水肿发生率和蛋白尿水平显著降低。结论:高表达GADD45B显著加重足细胞受损,而抑制GADD45表达则能有效改善足细胞损伤,提示其可作为治疗足细胞损伤药物靶点。

生长抑制DNA损伤基因45的功能及其作用

许多内源性和外源性的损伤因素均能导致DNA损伤,如活性氧、紫外线辐射、电离辐射、化学致癌药物及烷化剂等。哺乳动物细胞对于致DNA损伤因素的各种刺激会产生一系列应答反应,如细胞周期抑制、DNA修复、DNA去甲基化、细胞生存和细胞凋亡等。生长抑制DNA损伤基因45(Gadd45)在DNA损伤诱导的细胞应答反应中发挥重要作用。细胞内、外环境的多种因素在转录水平、翻译后水平等多个层次对Gadd45进行精确调节。Gadd45家族蛋白与年龄相关疾病、寿命及老化相关。

生长抑制DNA损伤基因45与p53对卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的：研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ，ＧＡＤＤ）对卵巢癌细胞的作用及与ｐ５３蛋白表达的关系。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５的表达；采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白的表达。通过载体构建将目的基因ＧＡＤＤ４５重组于ｐｃＤＮＡ－Ⅲ真核质粒内。利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）法转染ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株；Ｇ４１８抗性筛选，ＲＴ－ＰＣＲ进行表达鉴定。采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）以及ＤＮＡ梯度法对细胞凋亡现象进行检测。结果：卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５表达阴性。ＳＫＯＶ３细胞株ｐ５３蛋白表达阳性；３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白表达阴性。转染ＧＡＤＤ４５基因的ＳＫＯＶ３细胞株经化学药物足叶已甙（ＶＰ１６）和紫外线诱导后，可以使该细胞产生凋亡现象，而对转染ＧＡＤＤ４５基因的３ＡＯ细胞株经诱导后，未见细胞凋亡现象。结论：转染ＧＡＤＤ４５基因，对ｐ５３蛋白表达阳性的细胞株ＳＫＯＶ３经诱导后，可使细胞进入凋亡状态。对ｐ５３蛋白表达阴性的细胞株３ＡＯ转染ＧＡＤＤ４５基因后，经诱导细胞无凋亡现象，证实ＧＡＤ?

生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α在心血管疾病中的研究进展

哺乳动物细胞受到DNA损伤刺激时,生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)可与多种生物大分子相互作用在细胞周期阻滞、DNA损伤修复、细胞增殖、凋亡等细胞应答反应中发挥重要的调控作用。GADD45α表达调控的信号通路与肿瘤、心血管疾病等多种疾病的发生、发展密切相关。阐明GADD45α的功能及其在疾病中的作用机制,有助于了解许多疾病的发病机制,为诊断及治疗提供新的靶点。

生长抑制因子家族基因编码蛋白在DNA修复和细胞凋亡中的作用

多种内源性、外源性基因毒性闲子均可造成DNA损伤，并由此启动DNA修复过程、乃至引起应激诱导的成熟前衰老（stress—induced premature senescence．SIPS）和凋产在DNA损伤之初，细胞试图修复损伤的DNA，但是当DNA损伤程度严重，范围广泛或已经影响厂DNA代谢时，细胞将产生一系列生物渊控信号触发不同机制，共同抑制细胞增殖行促进细胞发生凋亡，防止异常的遗传倩息传递给予代细胞，以维持基因组的稳定．近来发现，

ATM失活诱导GADD45α依赖的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】探究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶失活诱导神经元凋亡的具体分子机制。【方法】体外成熟7 d的小脑颗粒神经元(CGNs)分别用含25 mmol/L KCl(25 K)培养基、5 mmol/L KCl(5 K)培养基和含ATM特异性抑制剂(Ku55933,10μmol/L;Ku60019,15μmol/L)的25 K培养基后进行免疫印迹检测ATM、Caspase3、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平或培养8 h后进行Hoechst染色分析。在C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA,q-PCR和免疫印迹验证其干扰效率。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染ATM特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。体外成熟7 d的CGNs用含ATM特异性抑制剂的25 K培养基培养8 h后进行全转录组测序、差异表达基因鉴定和通路富集分析。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染GADD45α特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h,用含15μmol/L Ku6的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理8 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。【结果】与25 K组相比,5 K处理组和ATM特异性抑制剂处理组的CGNs ATM蛋白表达降低、Cleaved Caspase-3蛋白表达增加、细胞核固缩率增加。C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA后有效降低ATM和GADD45α的mRNA和蛋白的表达。与对照相比,CGNs转染ATM特异性siRNA后,细胞核固缩率升高。在Ku55933处理组中鉴定出835个基因表达上调,848个基因表达下调;在Ku60019处理组中鉴定出454个基因表达上调,314个基因表达下调;274个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同上调,179个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同下调,其中ATM下游靶标GADD45α表达上调;通路富集结果显示TNF信号通路、NF-κB信号通路和凋亡信号通路等被显著富集。与对照相比,抑制剂处理组和5K组GADD45α的mRNA和蛋白表达均升高。与对照相比,转染GADD45α特异性siRNA后用含15μmol/L Ku60019的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理后的CGNs细胞核固缩率降低。【结论】ATM活性降低诱导GADD45α依赖的神经元凋亡。

GADD45β在骨关节炎中的作用及其对MKK7/JNK途径的影响

目的探讨生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45β)在骨关节炎(OA)发生发展中的作用及机制。方法将大鼠软骨细胞分为对照组、IL-1β组、NC-OE+IL-1β组、GADD45βOE+IL-1β组、NC-sh+IL-1β组和GADD45βsh+IL-1β组。除对照组之外,其他组细胞均采用10 ng/mL的IL-1β处理24 h。采用MTT法和TUNEL法检测软骨细胞增殖和凋亡。将SD大鼠分为假手术组、OA组、NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组,每组12只。假手术组大鼠只进行假手术操作,其他组大鼠均为前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法诱导的OA模型大鼠。假手术组和OA组大鼠关节腔内注射磷酸盐缓冲液,NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组大鼠关节腔内分别注射NC-OE和GADD45βOE慢病毒,每周注射1次,共4周。采用番红O-固绿染色观察大鼠软骨降解并进行OARSI评分,采用TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测GADD45β、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平。采用Western blot检测GADD45β、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)、p-MKK-7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2/3和p-JNK1/2/3的蛋白水平。结果与对照组比较,IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,GADD45βOE+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均升高,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3和MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均降低,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,GADD45βsh+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与假手术组比较,OA组大鼠的GADD45β的mRNA和蛋白水平降低,Bcl-2 mRNA水平降低,OARSI评分和TUNEL阳性率均升高,Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与OA组和NC-OE+OA组比较,GADD45βOE+OA组大鼠的GADD45β的mRNA和蛋白水平升高,Bcl-2 mRNA水平升高,OARSI评分和TUNEL阳性率均降低,Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均降低,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平降低(P<0.05)。结论GADD45β在OA中下调,上调GADD45β可能通过抑制MKK7/JNK途径抑制OA进展。

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。

扇贝多肽对H_2O_2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。

生长抑制及DNA损伤诱导基因45在肝细胞性肝癌中的意义

生长抑制及DNA损伤诱导基因45（GADD45）家族是DNA损伤修复重要相关基因，最初从受紫外线（uV）照射的细胞分离得到，是电离辐射效应基因之二。GADD5家族属于p53、乳腺癌易感基因1（BRCA1）的下游基因，它广泛、稳定地表达在人体细胞特别是在静止期细胞中。

3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲对不同p53状态肝癌细胞中生长抑制及DNA损伤诱导基因45β的诱导差异及其机制

目的 探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲（Triapine）对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β（GADD45β）诱导差异及其调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B＋p53；体外合成GADD45β近端6个启动子序列群（-618 ～-314）,构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B＋p53；以实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）比较Triapine对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异；进一步比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；并通过半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3的表达变化测定细胞凋亡的发生和发展.结果 Triapine对Hep3B中GADD45诱导并不明显,Hep3B＋p53对Triapine敏感性明显增加,2.5、5.0μmol/L剂量下GADD45/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）比值分别为0.0425和0.0704,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示Triapine作用Hep3B＋p53后的启动子核因子（NF）-κB（-618/＋6）和E2F-1（-470/＋6）活性较Hep3B明显增强约1.3倍和0.7倍.Triapine能够更加明显地抑制Hep3B ＋p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,5μmol/L Triapine对Hep3B ＋p53DNA合成的抑制率为40.89％,对细胞克隆形成能力的抑制率达到68.16％,与Hep3B比较差异有统计学意义（P＜0.05）.Triapine作用后Hep3B＋p53的Caspase-3能迅速激活,活性高峰提前出现于6h.结论 p53在核糖核苷酸还原酶抑制剂化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导中具有重要作用,其作用机制可能是增强转录调节因子的表达水平.

生长抑制及DNA损伤诱导基因45β在肝细胞性肝癌中的意义

生长抑制及DNA损伤诱导基因45（GADD45）家族是DNA损伤修复重要相关基因，最初从受紫外线照射的细胞分离得到，是电离辐射效应基因之一。GADD45家族属于p53、乳腺癌易感基因1（BRCA1）的下游基因，它广泛、稳定地表达在人体细胞特别是在静止期细胞中。

GADD45g通过抑制E2F1在急性髓系白血病中发挥抑癌作用

目的:检测转录因子E2F1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制E2F1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年12月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用q PCR检测组织和细胞中GADD45g和E2F1 m RNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g的Molm-13和THP-1细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI染色流式细胞术等确定GADD45g是否通过抑制E2F1对AML细胞发挥抑癌作用。结果:AML患者骨髓和细胞系中GADD45g和E2F1 m RNA的表达呈显著负相关(r=–0.663,P<0.01)。GADD45g在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达(均P<0.01)。成功构建同时过表达GADD45g和E2F1的Molm-13和THP-1细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。与过表达GADD45g的细胞相比,同时过表达GADD45g和E2F1细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低(均P<0.01);在过表达GADD45g的细胞中过表达E2F1逆转了GADD45g诱导的周期阻滞(均P<0.01),进而降低了过表达GADD45g对化疗药物的敏感性(均P<0.01)。结论:GADD45g通过抑制E2F1在AML中发挥抗肿瘤作用。

BlueScreen HC在食品接触材料多组分迁移物遗传毒性检测中的适用性

目的探讨基于人生长阻滞和DNA损伤诱导45α(GADD45α)基因的遗传毒性高通量筛选体系BlueScreen HC(BSHC)在食品接触材料多组分迁移物遗传毒性检测中的适用性。方法将人GADD45α基因开放阅读框上游2000 bp序列作为启动子,采用分子克隆构建入嘌呤霉素和高斯荧光素酶(Gluc)双标记的慢病毒质粒pEZX-LvPG04中,并用慢病毒感染人淋巴母细胞TK6,获得稳转细胞系TK6-Gluc。以甲基磺酸甲酯(MMS,终浓度0,1.56,3.13,6.25,12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1))为非代谢活化条件下的阳性物质,环磷酰胺(CTX,终浓度0,0.78,1.56,3.13,6.25,12.5和25.0 mg·L^(-1))为代谢活化条件下的阳性物质,二甲基亚砜(DMSO,终浓度0,0.35,0.69,1.38,2.75,5.5和11.0 g·L^(-1))为阴性物质,分别在非活化和活化条件下验证构建的BSHC。将改性淀粉/聚对苯二甲酸-己二酸丁二醇酯(MS/PBAT)作为研究对象,采用体积分数4%乙酸及10%,20%,50%和95%乙醇作为食品模拟物,40℃、浸泡24 h获得5份MS/PBAT多组分迁移物,并用DMSO作为溶剂复溶得到5份多组分迁移溶液作为受试物。以终浓度为0,0.38,0.76,1.53,3.05,6.10和12.20 g·L^(-1)的不同受试物在活化和非活化2种条件下处理TK6-Gluc细胞。非活化条件下作用48 h;活化条件下,在添加体积分数1%大鼠肝S9代谢活化系统的同时,作用3 h后更换新鲜培养基,继续培养至48 h。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活性,同时采用Secrete-Pair^(TM)Gaussia Luciferase Assay试剂盒检测培养基中Gluc化学发光强度。另外,采用终浓度为3.05和12.20 g·L^(-1)的不同受试物对鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100进行微量波动Ames试验以及对体外培养的中国仓鼠肺细胞CHL进行体外哺乳细胞染色体畸变试验,检测受试物的致突变和染色体畸变作用,与BSHC遗传毒性结果进行对比分析。结果采用BSHC法,将相对细胞活性80%定义为生长抑制的最低有效浓度阈值,实验组相对细胞活性低于溶剂对照组的80%提示化合物引起细胞生长抑制。将实验组相对细胞活性低于溶剂对照组的30%定义为出现细胞毒性,此时将不考虑遗传毒性。在无细胞毒性前提下,活化条件下实验组Gluc化学发光强度大于溶剂对照组的1.8倍时,非活化条件下实验组Gluc化学发光强度大于溶剂对照组的1.5倍时,判定为遗传毒性阳性;反之认为无遗传毒性。与溶剂对照组相比,阴性物质DMSO所有浓度均未产生遗传毒性。非活化条件下,MMS 12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1)产生遗传毒性;活化条件下,CTX 6.25,12.5和25.0 mg·L^(-1)产生遗传毒性。非活化条件下,MS/PBAT的95%乙醇迁移物6.10和12.20 g·L^(-1)和MS/PBAT的50%乙醇迁移物12.20 g·L^(-1)组细胞生长抑制,所有处理组均未观察到相对细胞活性低于30%的细胞毒性,且未观察到Gluc高表达,表明5种MS/PBAT多组分迁移物在非活化条件下均未产生遗传毒性。活化条件下,MS/PBAT的95%乙醇迁移物12.20 g·L^(-1)和MS/PBAT的4%乙酸迁移物6.10,12.20 g·L^(-1)组细胞表现出显著的生长抑制,所有处理组均未观察到相对细胞活性低于30%的细胞毒性,且未观察到Gluc高表达,表明5种MS/PBAT多组分迁移物在活化条件下均未产生遗传毒性。微量波动Ames试验结果表明,在活化和非活化条件下,MS/PBAT的5种多组分迁移物3.05和12.20 g·L^(-1)作用于TA98和TA1002种菌株,致突变阳性孔的数量均不超过溶剂对照组的2倍,即均未产生致突变作用;作用于CHL细胞后的细胞染色体畸变率亦均无显著变化。结论初步建立了基于GADD45α基因的遗传毒性高通量筛选方法BSHC,提示可用于食品接触材料多组分迁移物的体外遗传毒性评价,但仍需进一步探索其最低有效浓度,并应用更多种类混合物进行进一步验证。

广西巴马地区人群血清中锰超氧化物歧化酶及人类生长阻滞和DNA损伤诱导45α mRNA表达水平的研究

目的了解广西巴马地区人群血清锰超氧化物歧化酶（Mn SOD）、人类生长阻滞和DNA损伤诱导45α（GADD45α）m RNA表达水平与家庭聚集性长寿现象的关系。方法于2011年,随机选择广西巴马地区有3~4代直系亲属的家庭成员289人,其中,长寿家族史组193人,男98人,女95人,年龄为（68.15±24.63）岁;无长寿家族史组96人,男53人,女43人,年龄为（54.09±22.83）岁。在长寿家族史组中,长寿组68人,男16人,女52人,年龄为（93.71±3.48）岁;长寿后代组125人,男82人,女43人,年龄为（54.24±19.49）岁。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测血清Mn SOD、GADD45αm RNA的表达水平。结果各组人群血清Mn SOD m RNA的表达水平间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。长寿家族史组及长寿组、长寿后代组人群血清GADD45αm RNA的表达水平均高于无长寿家族史组,且长寿家族史组女性血清GADD45αm RNA的表达水平高于无长寿家族史组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Mn SOD、GADD45αm RNA的表达水平可能与广西巴马地区长寿家庭聚集性现象有关。

电离辐射对人外周血淋巴细胞GADD45基因表达的影响

观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-Polymerase clain reaction,RT-PCR)的方法测定 GADD45基因的相对表达量,分析该基因的剂量、效应关系。照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,照射后4h达峰值,以后开始下降,但在24h仍未恢复到初始水平。

GADD45β基因在脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其的调节作用

目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β（GADD45β）基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF—α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上，应用重组TNF—α干预分化成熟的脂肪细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中GADD45β基因表达水平。结果随脂肪细胞逐渐分化成熟，GADD45β基因mRNA表达水平渐降低。GADD45β基因表达水平除在细胞分化d1～7、d8～10各时段内差异无显著意义（P〉0．05）外，余各时段之间表达水平差异均具有最著意义（P〈0.05）。不同质量浓度重组TNF-α（0．1～10．0μg/L）均能显著促进成熟脂肪细胞中GADD45β基因mRNA的表达。TNF-α质量浓度为0.1μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升51．39％，24h内上升100．15％；TNF—α质量浓度为1．0μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升44．15％，24h内上升100．63％；TNF—α质量浓度达10．0μg/L，GADD45β基因表达水平6h内即上升104．26％，24h内上升122．17％。结论GADD45β基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程；TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达具有促进作用，其促进效应总体趋势呈现时间依赖性特征。