结直肠癌细胞增殖核抗原及生长抑制因子4表达的关系及预后因素

目的探讨细胞增殖核抗原(Ki-67)和生长抑制因子4(ING4)在结直肠癌发病机制中的作用及其对患者预后的影响。方法应用免疫组织化学法检测71例结直肠癌组织和30例癌旁正常组织中Ki-67、ING4的表达情况,分析其表达与临床病理特征及预后的关系。结果 Ki-67在癌组织中阳性表达率(85.9%)高于癌旁组织(6.7%)(P<0.05),ING4在癌组织中阳性表达率(56.3%)低于癌旁组织(90%)(P<0.05)。Ki-67表达与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、淋巴结转移数目、TNM分期有关(P<0.05),ING4表达与分化程度、有无淋巴结转移、淋巴结转移数目、TNM有关(P<0.05)。Ki-67、ING4在结直肠癌组织中表达呈负相关性(r=-0.428,P<0.05)。Ki-67高表达组和低表达组术后5年生存率分别为63.9%、85.5%,差异有统计学意义(P<0.05);ING4阳性组和阴性组术后5年生存率分别为97.4%、45.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素分析结果显示,TNM分期、ING4表达情况均为影响患者预后的独立因素。结论 Ki-67、ING4可能参与直肠癌的发生和发展,ING4是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。

生长抑制因子4和人表皮生长因子受体2在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨生长抑制因子4(ING4)和人表皮生长因子受体2(HER2)在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法收集2007年1月—2008年4月石河子大学医学院第一附属医院经病理检查确诊为原发性结直肠癌患者99例,取其病理组织的石蜡标本共99份作为结直肠癌组;同时选择30例原发性结直肠癌患者距肿瘤>5 cm的癌旁正常组织作为对照组。应用免疫组织化学法检测两组ING4、HER2的表达水平,结合患者术后随访资料,分析ING4、HER2的表达与临床病理特征及预后的关系。结果 ING4在结直肠癌组中的阳性表达率是68.7%(68/99),对照组中为93.3%(28/30);HER2在结直肠癌组中的阳性表达率是35.4%(35/99),对照组中为6.7%(2/30),差异均有统计学意义(χ2值分别为7.346、9.262,P<0.05)。ING4的表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分期相关(P<0.05),HER2的表达与浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分期相关(P<0.05)。ING4阴性表达者5年生存率为35.5%(11/31),明显低于ING4阳性表达者的77.6%(52/67)(χ2=16.721,P<0.05);HER2阴性表达者5年生存率为78.1%(50/64),明显高于HER2阳性表达者40.0%(14/35)(χ2=16.551,P<0.05)。结直肠癌组ING4与HER2的表达呈负相关(rs=-0.412,P<0.05)。结论 ING4和HER2的表达与结直肠癌发生、发展及患者生存率密切相关,联合检测两者的表达对于结直肠癌的临床诊断及预后判断有重要意义。

生长抑制因子4对内皮细胞增殖、迁移及血管形成相关因子表达的影响

目的观察生长抑制因子4(ING4)对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)活性的影响,探讨ING4对血管内皮细胞及血管生成的调控作用。方法人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)体外培养,构建ING4质粒及干扰RNA转染至HUVECs,MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移,实时PCR及Western blotting实验检测血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达水平。结果 MTT及Transwell实验结果显示转染ING4质粒能够抑制HUVECs的增殖及迁移,而转染ING4 si RNA则能够促进HUVECs增殖及迁移,实时PCR及Western blotting实验结果显示转染ING4质粒能够抑制血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白的表达水平。结论 ING4能够通过抑制血管内皮细胞的增殖及迁移能力,下调血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9的表达,进而抑制新血管形成。

生长抑制因子4对人黑素瘤细胞株M14凋亡的调控

目的探讨生长抑制因子4对人黑素瘤细胞株M14凋亡的调控及其作用机制。方法构建人生长抑制因子4基因的真核表达质粒,并将其转导入M14细胞,采用流式细胞术及TUNEL法检测细胞的凋亡情况,同时采用蛋白印迹法分析凋亡通路的活化及通路相关蛋白的表达情况。结果转染外源生长抑制因子4基因后,M14细胞出现了明显的凋亡峰并伴有G2/M期阻滞,凋亡率及凋亡指数也明显高于转染空载质粒及未转染M14细胞,差异有显著性意义(P<0.01)。还发现转染外源生长抑制因子4基因后,M14细胞凋亡通路活化,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,而促凋亡蛋白Bax表达上调,凋亡执行蛋白Cyt-c表达增加而caspase3表达下降。结论生长抑制因子4可能通过活化凋亡通路,进而促进M14细胞凋亡。这可能也是ING4抑制M14细胞增殖的机制之一。

生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义

目的:探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4(ING4)的表达及其意义。方法:体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1(高分化)、SGC-7901(中分化)、BGC-823(低分化)以及人胃黏膜细胞GES-1,收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果:SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生,且与胃癌分化程度有关。

生长抑制因子4、蛋白激酶D1与早期子宫内膜癌的关系及对淋巴结转移的预测研究

目的分析生长抑制因子4、蛋白激酶D1与早期子宫内膜癌的关系及对淋巴结转移的预测效能。方法选取2018年1月至2021年10月南京市妇幼保健院接诊的256例接受子宫切除及淋巴结清扫术治疗的早期子宫内膜癌患者作为观察组,另选取同期诊治的256例子宫内膜增生症患者作为对照组。比较两组血清生长抑制因子4、蛋白激酶D1水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清生长抑制因子4、蛋白激酶D1对淋巴结转移的预测效能。结果观察组血清生长抑制因子4水平低于对照组,蛋白激酶D1水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组术后血清生长抑制因子4较术前升高,蛋白激酶D1水平均较术前降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。血清生长抑制因子4联合蛋白激酶D1诊断早期子宫内膜癌的灵敏度为87.50%,特异度为86.33%。在256例早期子宫内膜癌患者中,发生淋巴结转移32例;淋巴结转移组术前血清生长抑制因子4低于非淋巴结转移组,蛋白激酶D1水平高于非淋巴结转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清生长抑制因子4联合蛋白激酶D1预测早期子宫内膜癌患者发生淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.924。结论血清生长抑制因子4、蛋白激酶D1均与早期子宫内膜癌的病情演变有关,两者联合预测淋巴结转移的效能较好,值得进一步研究应用。

生长抑制因子4在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的探讨生长抑制因子4(ING4)在膀胱尿路上皮癌中的作用及临床意义。方法采用免疫组化法检测60例膀胱尿路上皮癌、60例癌旁组织、37例膀胱正常黏膜组织中ING4的表达,将结果与病理分级、临床分期、年龄、性别、初发、复发、肿瘤大小、肿瘤位置及肿瘤个数进行分析。结果 ING4在膀胱正常黏膜组织和癌旁组织中阳性表达率高于膀胱尿路上皮癌,在低级别或非肌肉浸润性膀胱尿路上皮癌中阳性表达率高于高级别或肌层浸润性膀胱尿路上皮癌(P<0.05)。随着肿瘤病理级别或临床分期越高,ING4表达水平下降越明显,并在膀胱尿路上皮癌、癌旁及正常膀胱粘膜组织中的表达具有统计学差异(P<0.05)。结论 ING4在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。

生长抑制因子4基因在胃癌中的表达及临床意义

目的检测生长抑制因子4(ING4)在胃癌患者组织及外周血中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的相关性及在胃癌诊疗中的应用。方法收集30例胃癌患者手术切除的癌组织、对应的癌旁组织和外周血,用RT-PCR、实时定量RT-PCR、巢式RT-PCR检测ING4 mRNA表达;用western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上进行验证,分析ING4在胃癌中的表达水平与临床病理因素的相关性。结果 RT-PCR和定量结果显示76.7%(23/30)的胃癌组织ING4表达低于对应的癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上证实了胃癌组织较癌旁组织中ING4的表达水平下降。胃癌组织ING4的表达与肿瘤分化状态和复发相关,但与临床分期无关。分化水平越低,ING4 mRNA表达越低(P<0.05);复发的患者癌组织ING4 mRNA表达显著低于未复发患者(P<0.05)。胃癌患者外周血ING4 mRNA的表达也显著低于健康人。结论胃癌组织ING4的表达下调,且与胃癌的分化与复发相关,ING4的基因和蛋白质水平检测可能作为胃癌病程进展或复发监测的新指标。

血管内皮细胞生长因子及生长抑制因子4在大肠癌中的表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及生长抑制因子4(ING-4)在大肠癌中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法选择经手术病理证实的68例大肠癌、20例大肠腺瘤及20例正常的肠黏膜组织,采用免疫组化法检测并比较各组VEGF及ING-4表达情况,分析二者与大肠癌患者临床病理特征及生存期的关系。结果 VEGF蛋白在大肠癌组、大肠腺瘤组及正常组中的阳性表达率依次下降(P<0.05、P<0.01),ING-4蛋白在大肠癌组、大肠腺瘤组及正常组中的阳性表达率依次升高(P<0.05)。VEGF蛋白在浸润浆膜外层的大肠癌组阳性率显著高于浸润肌层及浆膜层者(P<0.05),在Dukes C、D期大肠癌患者中的阳性率高于A、B期者(P<0.05),在发生淋巴结转移的大肠癌组阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05);ING-4蛋白在高、中分化大肠癌组阳性率显著高于低分化组(P<0.05),在Dukes A、B期大肠癌患者中的阳性率高于C、D期(P<0.05),在发生淋巴结转移的大肠癌组阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。VEGF阳性大肠癌患者3年生存率及5年生存率均显著低于阴性患者(P<0.05),ING-4阳性大肠癌患者3年生存率及5年生存率较阴性患者无显著差异(P>0.05)。结论 VEGF高表达与大肠癌浸润程度、Dukes分期、淋巴结转移及预后有关,ING-4低表达与大肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移有关,可以作为大肠癌的术前诊断、制订手术方案的及预测转移的重要指标。

生长抑制因子4和缺氧诱导因子-1α在直肠癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:探讨生长抑制因子4(ING4)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在直肠癌中的表达及预后意义。方法:应用免疫组化法检测133例直肠癌组织及76例正常直肠组织中ING4和HIF-1α的表达,对随访资料进行生存分析。结果:ING4在直肠癌组织中的阳性率(53.4%)显著低于正常直肠组织的阳性率(85.5%),差异有统计学意义(P<0.01);HIF-1α在直肠癌组织中的阳性率(69.9%)高于正常直肠组织的阳性率(42.1%),差异有统计学意义(P<0.01);ING4和HIF-1α阳性表达与肿瘤分化程度、Dukes分期及淋巴结转移有关(P<0.05);直肠癌组织中ING4和HIF-1α的表达呈负相关(r=-0.317,P<0.001);经多因素分析,肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴结转移、ING4表达及HIF-1α表达具有独立的预后意义。结论:ING4和HIF-1α可能参与直肠癌的发生和发展,联合检测有助于判断直肠癌的预后。

生长抑制因子4诱导肾细胞癌凋亡和自噬的实验研究

目的本研究通过检测ING4在人肾细胞癌的表达情况,评估ING4对于肾细胞癌的作用,为临床提供一种治疗肾细胞癌的新方法。方法细胞培养后、运用PCR方法构建质粒、进而转染细胞,应用蛋白免疫印迹法检测蛋白表达情况,通过流式法检测细胞凋亡率,最后应用SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果与近端肾小管细胞相比,ING4在人肾细胞癌中低表达,异位过表达ING4抑制了肾细胞癌细胞的增殖。除此之外,ING4过表达诱导肾细胞癌细胞的凋亡以及自噬,同时抑制肾细胞癌中PI3K/Akt通路的激活。结论ING4在肾细胞癌中具有抗癌活性,且该过程是通过PI3K/Akt通路介导的。因此,ING4可用于肾细胞癌的治疗。

血管内皮生长因子、低氧诱导因子1α和生长抑制因子4在胃癌组织中的表达

目的探讨胃癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)和生长抑制因子4(ING4)的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测62例胃癌组织和28例正常胃组织中VEGF、HIF-1α和ING4的表达及微血管密度(MVD),分析VEGF、HIF-1α和ING4的表达与胃癌临床特征的关系。结果 62例胃癌组织中VEGF、HIF-1α和ING4的阳性表达率分别为59.7%(37/62)、72.6%(45/62)和51.5%(34/62),28例正常胃组织中VEGF、HIF-1α和ING4的阳性表达率分别为14.3%(4/28)、7.1%(2/28)和89.3%(25/28),胃癌组织中VEGF和HIF-1α的阳性表达率显著高于正常胃组织(P<0.01),而ING4的阳性表达率显著低于正常胃组织(P<0.01)。胃癌和正常胃组织中MVD分别为31.3±7.4和6.2±1.8,胃癌组织中MVD显著高于正常胃组织(P<0.01)。VEGF、HIF-1α的表达与胃癌的临床分期、淋巴结转移及浸润深度显著相关(P<0.05),ING4的表达与胃癌的临床分期、浸润深度及患者性别显著相关(P<0.05)。结论 ING4可能在胃癌的发生、发展过程发挥一定的抑制作用,HIF-1α和VEGF在胃癌发展过程中可能起促进作用。

生长抑制因子4在妇科恶性肿瘤中作用机制的研究进展

目的妇科恶性肿瘤是严重危害女性生命健康的人类恶性肿瘤,近年来,其发病率明显上升,发病年龄也趋向年轻化,研究发现,抑癌基因的作用与其关系密切。生长抑制因子4(ING4)是抑癌基因ING家族的新成员,大量研究证实其可抑制肿瘤的发生发展。

生长抑制因子4对宫颈癌细胞CaSki增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的探讨生长抑制因子4(ING4)对宫颈癌细胞CaSki增殖和凋亡的影响及作用机制。方法取50例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁组织,宫颈癌细胞系Hela、SiHa、CaSki和正常宫颈细胞系Ect1/E6E7,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和细胞中ING4 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹(Western blot)法检测组织和细胞中ING4蛋白的相对表达量。分别将转染ING4过表达慢病毒和稳定阴性对照慢病毒的宫颈癌细胞CaSki作为Lv-ING4组和Lv-NC组,将没有转染慢病毒的细胞作为对照组,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blot法检测caspase 3、β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量。采用WNT/β-catenin信号激活剂LiCl处理ING4表达上调的宫颈癌CaSki细胞,检测细胞增殖能力、凋亡能力,以及caspase 3、β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量。结果宫颈癌组织中ING4 mRNA的相对表达量明显低于癌旁组织(P﹤0.01),宫颈癌细胞CaSki中ING4 m RNA和ING4蛋白的相对表达量均明显低于宫颈癌细胞Hela、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7(P﹤0.01)。慢病毒转染后,Lv-ING4组细胞中ING4 mRNA和ING4蛋白的相对表达量均明显高于对照组和Lv-NC组(P﹤0.01),光密度(OD)值明显低于对照组和Lv-NC组(P﹤0.01),细胞凋亡率明显高于对照组和Lv-NC组(P﹤0.01);Lv-ING4组宫颈癌细胞caspase 3蛋白的相对表达量明显高于对照组和Lv-NC组(P﹤0.01),β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量均明显低于对照组和Lv-NC组(P﹤0.01)。WNT/β-catenin信号激活剂LiCl处理ING4表达上调的宫颈癌细胞CaSki后,Lv-ING4+LiCl组细胞OD值明显高于Lv-ING4组(P﹤0.01),凋亡率明显低于Lv-ING4组(P﹤0.01),Lv-ING4+LiCl组细胞caspase 3蛋白相对表达量明显低于Lv-ING4组(P﹤0.01),β-catenin、c-myc蛋白相对表达量均明显高于Lv-ING4组(P﹤0.01)。结论 ING4在宫颈癌中表达下调,其可能通过下调WNT/β-catenin信号激活通路抑制宫颈癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

星形细胞瘤组织中生长抑制因子4和缺氧诱导因子-1α的表达及其临床意义

目的 探讨人脑星形细胞瘤中生长抑制因子（ING）4和缺氧诱导因子（HIF）-1o的mRNA表达情况及其与肿瘤恶性程度及病理学分级的关系.方法 应用逆转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测郑州大学第二附属医院2009年1月至2010年6月45例Ⅰ-Ⅳ级的人脑星形细胞瘤标本及11例人非瘤脑组织中ING4和HIF-1 α的mRNA表达水平,并分析其相关性.结果 ING4在非瘤脑组织的mRNA相对表达量为1.19±0.22,在Ⅰ-Ⅳ级的人脑星形细胞瘤中的相对表达量分别为0.91±0.19、0.74±0.28、0.54±0.33及0.22±0.19,与对照组脑组织相比,星形细胞瘤中ING4基因的mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）,且随着病理学级别的升高,表达逐渐降低.HIF-1α在非瘤脑组织的mRNA的表达量为0.26±0.16,在Ⅰ-Ⅳ级的人脑星形细胞瘤中表达量分别为0.34±0.19、0.50±0.23、0.96±0.15及1.04±0.15,星形细胞瘤中HIF-1 α基因的mRNA表达水平明显升高,且病理学级别越高,表达也越高（P＜0.05）.随着肿瘤恶性程度的增加,ING4与HIF-1α的mRNA表达呈负相关.结论 ING4和HIF-1α基因在人脑星形细胞瘤的发生和发展中发挥作用,并与星形细胞瘤的恶性程度密切相关.

生长抑制因子4在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:检测生长抑制因子4(ING4)基因在不同子宫内膜癌中的表达情况,并探讨其表达与子宫内膜癌发生、发展及预后的关系。方法:采用RT-PCR方法和免疫组化S-P法检测25份正常的增生期子宫内膜、15份不典型增生的子宫内膜及45份子宫内膜癌组织中ING4的表达情况,观察结果并进行统计学处理。结果:免疫组化结果显示,ING4在增生子宫内膜中表达最多,在不典型增生的子宫内膜组织中的表达显著低于增生子宫内膜,在子宫内膜癌组织中的表达显著低于不典型增生组织,3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果与免疫组化测定结果一致,ING4 mRNA的表达在增生期子宫内膜组织、不典型增生子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中逐渐降低,3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在子宫内膜癌组织中,ING4的表达与组织学分级显著相关(P<0.05),与肌层浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05),但其表达与组织病理学分期的关系尚需进一步研究。结论:ING4在子宫内膜癌和不典型增生组织中的表达有不同程度的丢失,ING4的低表达促进了肿瘤的发生。检测ING4可能成为子宫内膜癌早期诊断及预测癌前病变的重要指标之一。

生长抑制因子4蛋白在大肠癌组织中的表达及其意义

本研究通过对生长抑制因子4（ING-4）蛋白在不同组织中的表达进行检测,探讨ING-4蛋白在大肠癌发生发展过程中可能的作用,为临床上对大肠癌的诊断及预后判断提供有价值的指标.

生长抑制因子4抗肿瘤作用

ING4是生长抑制因子蛋白家族(inhibitor of growth family,ING)重要成员之一,大量研究证实其为抑癌基因,能通过多种途径对肿瘤产生抑制作用。现对其抗肿瘤作用机制研究最新进展进行综述。

Ad-生长抑制因子4-polyA-promoter-白细胞介素-24对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用的体外实验研究

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞,蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经膜联蛋白V-藻红蛋白(Annexin V-PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NCI-H460细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等因子的表达,Western blot法检测其中裂解的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)因子的表达。结果 ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;96 h时相点生长抑制率Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显高于Ad组(27.800±4.271,t=6.508,P<0.01)、(27.130±3.341,t=8.121,P<0.01)、(50.767±2.671,t=19.005,P<0.01),差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显优于Ad-IL-24(22.967±4.933,t=4.655,P<0.01)、Ad-ING4(23.633±4.154,t=5.689,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义,并呈现抑癌增效相加作用(Q=0.93)。FCM检测结果表明,Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组作用于NCI-H460细胞72 h的诱导细胞凋亡率明显高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(16.440±0.896,t=18.340,P<0.01)、(14.000±1.562,t=13.255,P<0.01)、(29.660±1.519,t=19.522,P<0.01)和Ad组(14.450±1.058,t=13.660,P<0.01)、(12.010±1.196,t=1.040,P<0.01)、(27.670±1.620,t=17.082,P<0.01),差异有统计学意义,其中Ad-ING4-IL-24组中NCI-H460细胞的细胞凋亡率明显高于Ad-IL-24(15.660±1.773,t=8.834,P<0.01)、Ad-ING4(13.220±1.628,t=7.858,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组可明显上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达。结论 Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体外对NCI-H460细胞具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

生长抑制因子4对黑素瘤M14细胞增殖的影响

目的构建人生长抑制因子4基因的真核表达质粒，并将其转染入黑素瘤M14细胞，观察生长抑制因子4对M14细胞增殖的影响。方法通过RT—PCR法从人正常胃黏膜组织获得目的基因片段，将其克隆入空载质粒pCDNA3．1，构建真核表达载体pCDNA3．1-ING4，采用PCR及基因测序等方法进行鉴定。将其转染入黑素瘤M14细胞，检测生长抑制因子4的表达情况及对M14细胞增殖的影响。结果PCR所得产物为约750bp的DNA片段，与预测大小相符，DNA序列测定与报道结果一致。蛋白印迹及免疫细胞化学法均显示转染外源生长抑制因子4基因的M14细胞有更高的生长抑制因子4（ING4）表达，细胞活力及生长速度明显低于转染空载质粒的M14细胞和未转染的M14细胞。结论成功构建了重组人生长抑制因子4基因表达质粒pCDNA3．1-ING4，转染的外源生长抑制因子4基因可在细胞内表达并对M14细胞的增殖起抑制作用。