生长抑制因子5逆转Warburg效应抑制肿瘤增殖的研究.

目的研究生长抑制因子5(ING5)对肺癌A549细胞Warburg效应的影响。方法肺癌A549 ING5过表达细胞系通过慢病毒转染GV218-EGFP-ING5(吉凯基因)构建,空质粒转染为对照细胞系A549-control。Western blot验证ING5的表达;增殖和克隆形成实验观察ING5对A549细胞增殖和克隆形成的影响;乳酸脱氢酶(LDH)活性和乳酸(LD)分泌检测实验观察ING5对A549细胞Warburg效应的影响。结果 Western blot结果表明,A549-ING5-OE的ING5表达显著高于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。增殖和克隆形成实验结果表明,A549-ING5-OE的增殖和克隆形成能力较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。LDH活性和LD分泌检测实验结果表明,A549-ING5-OE的LDH活性和LD分泌较对照组明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论 ING5通过逆转肺癌A549细胞的Warburg效应抑制其增殖。

生长抑制因子5抑制肺癌细胞增殖作用的研究

目的探讨生长抑制因子5(ING5)抑制肺癌细胞增殖的作用。方法采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞ING5高表达细胞系A549-ING5-OE和A549细胞空质粒对照细胞系A549-control。采用细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;采用皮下接种方法建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察ING5对裸鼠皮下成瘤能力及肿瘤体积大小的影响。结果本实验成功构建了肺癌A549-ING5过表达细胞系,与A549-control比较,细胞系A549-ING5-OE中ING5表达显著增高;增殖实验结果显示ING5高表达显著抑制了肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验结果显示细胞系A549-ING5-OE中ING5高表达的肺癌细胞克隆形成能力明显低于A549-control肺癌细胞(P<0.01);裸鼠在体水平研究结果显示ING5高表达可以抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长。结论 ING5可以抑制肺癌细胞的增殖,为临床治疗肺癌提供新的治疗靶点。

生长抑制因子5在肿瘤中的研究进展

生长抑制因子(inhibitor of growth,ING)家族属于候选抑癌基因家族,包括ING1~5。ING5是ING家族的新成员,自首次报道以来已发现其有多种功能,如参与细胞周期调控、细胞凋亡和染色质重塑等。研究发现,ING5与肿瘤的发生、发展关系密切,其可能是抗肿瘤治疗的潜在靶点。该文就ING5的生物学特性、肿瘤中的表达、与肿瘤恶性生物学行为的关系以及在肿瘤中的作用机制方面作一综述。

抗菌肽Cecropin B—肿瘤血管生长抑制因子Kringle5融合蛋白表达载体的构建及其表达

通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体。重组载体转化BL21(DE3)细胞后,提取质粒进行PCR鉴定和序列分析,证明重组质粒pET32a/CB-K5阅读框架和融合基因序列均与预期相符。实验结果显示,成功地构建了抗菌肽CecropinB(CB)和肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)融合蛋白的表达载体pET32a/CB-K5。转化E.coliBL21(DE3),SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,融合蛋白以包涵体的形式在重组转化菌株中获得高效表达,表达量达到菌体总蛋白的50%。

可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5基因工程菌发酵培养和诱导表达条件的优化

在实验室试管培养条件下优化了基因工程菌E.coli BL21(DE3)pET15b/K5发酵产可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5的培养基和诱导表达条件。经菌体干重测定和SDS-PAGE检测,确定最佳培养基(g.L-1)为:胰蛋白胨10.0,酵母提取物5.0,NaCl 10.0,葡萄糖6.0,NH4Cl 2.6,NaH2PO45.0,Na2HPO46.0;优化的诱导表达条件为:诱导剂浓度0.01mmol.L-1,诱导时间6h,诱导温度37℃,摇床转速220r.min-1。在优化的培养基和诱导表达条件下,菌体干重为1.8g.L-1,Kringle 5表达量为360mg.L-1,占总蛋白含量的20%,与基础LB培养基相比,Krin-gle 5表达量提高了1.18倍。

长链非编码RNA生长抑制特异因子5调控微小RNA-137对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)调控微小RNA(miR)-137对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法实验分为对照(control)组、Aβ组、Aβ+si-NC组、Aβ+siGAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组,每组10只。Y迷宫法检测大鼠学习记忆力;实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-qPCR)检测海马CAI区GAS5、miR-137水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测海马CAI区B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白水平;尼氏染色观察神经元形态;Tunel染色观察大鼠神经元凋亡情况;双荧光素酶鉴定miR-137与GAS5的靶向关系。结果与对照组相比,Aβ组、Aβ+si-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05);分别与Aβ组、Aβ+si-NC组相比,Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率降低(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平升高(P<0.05);分别与Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组相比,Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组海马CAI区GAS5mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05)。经验证,miR-137与GAS5之间存在靶位点。结论干扰GAS5可上调miR-137从而保护Aβ诱导的大鼠海马神经元损伤,缓解神经元凋亡过程;而进一步下调miR-137可逆转上述过程。

ING5在乳腺癌中的表达及意义

研究生长抑制因子5(ING5)基因在乳腺癌组织、乳腺癌旁组织中的表达及临床病理意义,并讨论其与临床病理有关因素的相关性。采用组织芯片免疫组化技术检测ING5的表达,乳腺癌组织(n=83),癌旁组织(n=16)中其阳性表达率分别是59.0%、93.8%(P<0.05);ING5的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及p53、雌激素受体、孕激素受体的水平有关(P<0.05),提示它们在乳腺癌中的表达存在一定的关联性,临床检测ING5的表达,为乳腺癌早期诊断和临床治疗及预后评估提供一定参考。

LncRNA GAS5靶向miR-103减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)靶向微小RNA(miR)-103,从而减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的机制。方法培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组(转染pEGFP-C1空载体)、GAS5过表达组(转染pEGFP-C1-GAS5载体)、GAS5过表达+mimic NC组(转染pEGFP-C1-GAS5+mimic NC)、GAS5过表达+miR-103 mimic组(转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic)。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平;液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IRS-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定miR-103与GAS5的靶向位点。结果诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显,呈"指环样"结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 m RNA水平降低(P<0.05);与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,miR-103 mRNA水平升高(P<0.05)。miR-103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达可减轻3T3L1脂肪细胞IR。

ING5在大肠癌中的表达及意义

目的:为研究大肠癌发生发展分子机制,检测分析ING5在大肠癌中的表达趋势及意义。方法:荧光定量PCR法检测临床手术标本中ING5信使RNA的表达,统计分析基因表达与临床病理特征之间的关系,分析影响预后因素。结果:ING5在大肠癌中呈低表达,ING5的表达与病理T、N、M分级及临床TNM分期密切相关,ING5低表达组患者长期无病生存率显著降低。结论:ING5的表达情况与患者无病生存相关并且可作为影响大肠癌预后的一个独立影响因素。ING5与大肠癌的发生发展密切相关。

儿童肺炎支原体耐药性及血清miR-126、miR-155、LncRNA GAS5表达对肺炎病情程度的预测价值

目的探讨儿童肺炎支原体耐药性及血清微小核糖核酸(miR)-126、miR-155、长链非编码RNA生长抑制特异因子5(LncRNA GAS5)表达对肺炎病情程度的预测价值。方法选取2022年1月-2023年9月南通市妇幼保健院收治的82例肺炎支原体感染患儿为病例组,随机选取98名同期正常健康体检儿童为对照组,病例组根据病情程度分为轻度组57例和中重度组25例,分析肺炎支原体耐药性,比较病例组和对照组、中重度组和轻度组血清miR-126、miR-155、LncRNA GAS5水平,并分析其预测价值。结果82株肺炎支原体对阿奇霉素、乙酰螺旋霉素耐药性较高,对克林霉素敏感性较高。血清miR-126、miR-155水平病例组高于对照组(P<0.05),中重度组高于轻度组(P<0.05),LncRNA GAS5水平病例组低于对照组(P<0.05),中重度组低于轻度组(P<0.05)。血清miR-126、miR-155、LncRNA GAS5水平联合检测对肺炎支原体感染患儿病情严重程度的诊断曲线下面积(AUC)值高于单独检测(P<0.05),且联合检测的敏感度、特异度分别为84.00%和94.74%。结论肺炎支原体感染患儿对阿奇霉素、乙酰螺旋霉素相对较耐药,血清miR-126、miR-155水平呈高表达,LncRNA GAS5水平呈低表达,三指标表达水平变化与肺炎支原体感染患儿病情严重程度关系密切,三指标联合检测对肺炎支原体感染患儿病情严重程度预测价值较高。