槲皮素通过生长抑制特异性基因5调节微小RNA-23a-3p和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制垂体神经内分泌肿瘤的增殖机制

目的:探讨槲皮素对垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)生长的抑制作用及其可能机制。方法:通过Starbase工具预测生长抑制特异性基因5(GAS5)与微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-23a-3p之间的结合关系。体外培养人垂体瘤细胞系RC-4B/C,分为对照组(Control)、槲皮素组(Quercetin)、GAS5抑制组(Si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(Quercetin+si-GAS5),对比分析槲皮素对GAS5、miR-23a-3p及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,以及人垂体瘤复苏细胞(RC-4B/C)生长和侵袭能力的影响。结果:Starbase工具预测GAS5与miR-23a-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-23a-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-23a-3p和PI3K/AKT的表达,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);下调GAS5、miR-23a-3p表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-23a-3p、PI3K/AKT表达增加,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。结论:槲皮素可能通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-23a-3p,降低了PI3K/AKT,抑制垂体神经内分泌肿瘤的生长。

血管内皮生长因子A与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子A(VEGFA)与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5(SENP5)在前列腺癌中的表达情况及临床意义。方法:使用GEPIA数据库,对VEGFA、SENP5基因的相关性及与前列腺癌病人的生存期进行分析;采用qRT-PCR、Western blotting从转录、蛋白质翻译水平检测肿瘤细胞中VEGFA、SENP5的表达情况;收集前列腺癌病人组织标本和临床资料,采用免疫组织化学法检测前列腺癌组织中VEGFA、SENP5的蛋白表达,分析其表达情况与肿瘤病人临床病理参数间的关系;使用STRING网站进行VEGFA、SENP5蛋白质互作网络图构建。结果:VEGFA与前列腺癌病人总生存时间有关(P<0.05),SENP5与病人总生存时间、无病进展生存时间均相关(P<0.05);与正常细胞相比,VEGFA与SENP5在前列腺癌细胞中mRNA、蛋白质均高表达(P<0.05);VEGFA与SENP5蛋白在肿瘤病理组织中可见淡黄色或棕黄色染色,VEGFA主要于细胞质中表达,SENP5主要于细胞核中表达;VEGFA强阳性表达与临床分期、有无远处转移相关(P<0.05),SENP5强阳性表达与Gleason评分、有无远处转移相关(P<0.05);VEGFA与SENP5间显著相关(P<0.01);SENP5可能通过SUMO1-HSP90AA1轴与VEGFA相互作用。结论:VEGFA、SENP5在前列腺癌中高表达,两者显著相关,且与肿瘤临床病理参数有关,可能是前列腺癌病人治疗的潜在靶点。

长链的非编码RNA生长停滞特异性转录本5在骨关节炎中的研究进展

骨关节炎(OA)是一种以软骨退变、骨重建为主要病理特点的慢性关节疾病。目前没有可治愈该疾病的药物及手段,治疗策略有限的根本原因是对其潜在发病机制的认识不足。长链的非编码RNA(LncRNAs)被认为是许多疾病中的一类新的调控因子,是目前研究OA发病机制的一个重要切入点。LncRNA生长停滞特异性转录本5(Cas5)参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,是一种在软骨细胞中特异性高表达的LncRNA。然而,由于LncRNA Cas5作用机制复杂,其与OA相关具体分子机制目前仍不明确。该文针对LncRNA Cas5在OA中的软骨细胞凋亡、软骨基质代谢成骨分化及治疗方面的作用进行综述。

卵巢癌组织中长链非编码RNA生长阻滞特异性抑制物5、微小RNA-205的表达及意义

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性抑制物5(GAS5)、微小RNA-205(miR-205)在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法前瞻性收集2019年1月至2020年6月收治的初诊卵巢癌患者于术中取其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>2cm);采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA GAS5、miR-205表达情况;问卷调查法统计患者临床病理资料;术后随访2年(截止时间至2022年6月),统计患者生存时间。比较癌组织和癌旁组织lncRNA GAS5、miR-205表达,并采用Pearson相关分析lncRNA GAS5与miR-205的关系;以癌组织lncRNA GAS5、miR-205表达的中位数将卵巢癌患者分为lncRNA GAS5与miR-205高表达组和低表达组,比较不同病理特征卵巢癌患者lncRNA GAS5、miR-205高表达、低表达情况;比较不同lncRNA GAS5、miR-205表达情况的卵巢癌患者生存时间。结果共82例卵巢癌患者纳入本次研究,其中2例失访,最终80例患者进入本次研究。卵巢癌组织lncRNA GAS5相对表达量小于癌旁正常组织,miR-205相对表达量大于癌旁正常组织(P<0.05);Pearson相关分析显示,卵巢癌组织中lncRNA GAS5相对表达量与miR-205相对表达量呈负相关(r=-0.606,P<0.001)。lncRNA GAS5高表达45例,低表达35例;miR-205高表达40例,低表达40例。Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中lncRNA GAS5低表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中miR-205高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05)。lncRNA GAS5低表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.50±0.89)个月,低于高表达患者(23.89±0.09)个月(χ2=5.150,P=0.023)。miR-205高表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.71±0.79)个月,低于低表达患者(23.98±0.03)个月(χ2=6.337,P=0.012)。结论lncRNA GAS5、miR-205在卵巢癌组织表达存在一定的差异,其中lncRNA GAS5低表达,miR-205高表达,并影响卵巢癌患者的临床病理特征和预后。

生长阻滞特异性转录因子5剪接变异体GAS5_O1增强慢性髓系白血病细胞对伊马替尼的敏感性

在多种肿瘤中,生长阻滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)高表达与患者的良好生存期相关。GAS5存在多种剪接变异体,本研究探讨GAS5部分剪接变异体在髓系白血病细胞系中的表达模式。并基于对凋亡诱导敏感的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562,研究GAS5部分剪接变异体对K562细胞自身增殖、凋亡以及对靶向药物伊马替尼(imatinib,IM)的敏感性的影响。反转录PCR结果显示,GAS5剪接模式在髓系白血病细胞系HL-60、K562、NB4和KASUMI-1之间未见明显差异。相较于指数增长期,GAS5_AE表达水平在细胞密度引起的生长停滞期有一定程度的累积。通过核转染,将GAS5剪接变异体(pcDNA3-GAS5_1B、-GAS5_2B、-GAS5_3A、-GAS5_4A、-GAS5_O1或-GAS5_AE)转入K562细胞的单克隆株中。通过台盼蓝染色、吖啶橙染色后进行细胞计数,克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,瞬时转染GAS5剪接变异体并无抑制细胞的基础增殖或增强细胞对药物的敏感性。建立GAS5_O1的稳定转染株,延长培养时程并计算倍增时间,发现GAS5_O1的表达水平和倍增时间成正比(R^(2)=0.5692)。在稳转株O1-C8中观察到GAS5_O1可促进IM引起的细胞生长抑制(56.94%±2.84%vs.36.07%±2.32%,P<0.05)和凋亡(29.33%±1.30%vs.52.00%±2.52%,P<0.05)。上述结果表明,GAS5_O1的上调可能增加CML细胞的倍增时间,并使CML细胞对IM处理敏感。

抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性定性PCR检测方法的建立及其标准化

抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5已经批准获得我国进口用作加工原料的安全证书,含有外源HaHB4基因和bar标记基因。本研究根据抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体5′端和3′端插入位点旁侧序列信息,设计19对引物,结合罗萨里奥农业生物技术学院公司的1对引物,针对20对引物组合利用定性PCR技术进行引物特异性筛选,结果显示5′端的14号引物特异性良好,优化后获得最佳反应体系和反应程序;经测试,该引物特异性好、稳定性高,检出限达0.1%,扩增片段大小248 bp。经8家有资质实验室对本方法的特异性、检出限、重复性和再现性进行验证,各项参数均达到国家标准要求。本研究成功建立了抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体定性PCR检测方法,为IND-ØØ41Ø-5转化体在国内的安全监管提供技术支撑。

分析泛素特异性蛋白酶5在不同肿瘤中的致癌作用

目的分析泛素特异性蛋白酶5(USP5)在不同肿瘤中的致癌作用,为临床治疗提供参考。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)、基因型组织表达(GTEx)、基因表达谱交互式分析2(GEPIA2)分析USP5 mRNA在不同肿瘤中的表达情况,USP5与不同癌症患者病理分期的相关性。利用GEPIA2数据库分析USP5表达与不同癌症患者预后的相关性。利用cBioPortal数据库分析USP5基因变异情况。利用UCLCAN数据库分析USP5磷酸化水平。利用TIMER2数据库分析USP5表达与肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)免疫浸润的相关性。利用STRING、GEPIA2、注释、可视化及综合发现(DAVID)数据库构建USP5相关基因的富集图。结果USP5在多种肿瘤中的表达显著增高,而在急性髓性白血病(LAML)中表达显著降低;USP5蛋白在乳腺癌(BRCA)、结肠腺癌(COAD)、胶质母细胞瘤(GBM)、肺腺癌(LUAD)及胰腺癌(PAAD)中表达明显偏低;USP5蛋白在肾透明细胞癌(KIRC)、肺鳞癌(LUSC)及卵巢癌(OV)中表达明显偏高;USP5表达与BRCA、KIRC、肝细胞癌(LIHC)、LUAD、OV及PAAD的病理分期之间存在显著关系(均P<0.05)。USP5的高表达与LAML、LUAD、皮肤黑色素瘤(SKCM)及葡萄膜黑色素瘤(UVM)的总体生存率(OS)呈正相关(均P<0.05)。子宫内膜癌(UCEC)中USP5的改变频率最高,主要改变类型为突变;子宫癌肉瘤(UCS)中USP5改变频率次高,主要类型为“扩增”。进一步分析USP5的额外突变和位置,未获得主导性的遗传改变,遗传改变的位置较少。USP5在COAD、GBM等肿瘤中显著的去磷酸化。宫颈鳞状细胞癌(CESC)、头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、HPV阴性HNSC的CAFs与USP5水平呈正相关(均P<0.05)。“核部分”“核腔”“剪接体”“泛素介导的蛋白水解”可能参与USP5在肿瘤发生中的作用。结论USP5表达水平与生存预后、基因突变、免疫浸润及与USP5相关基因富集之间有相关性,有助于从多个方面了解USP5在肿瘤发生和发展中的作用,为今后肿瘤免疫治疗方面的研究提供理论依据。

鹅肌肉生长抑制素基因5′-调控区序列特征和组织表达分析

根据鸡的Myostatin基因序列设计引物,从鹅的基因组DNA中扩增到了Myostatin基因的5′-调控区,克隆并测序后获得了1.3 kb片段序列。与其他物种的序列比较发现,鹅Myostatin基因的该调控序列与鸭同源性为94.8%,与鸡同源性为69.2%,而与小鼠仅为14.3%。通过生物信息学方法,分析确定了其启动子和转录起始位点,发现在转录起始位点上游-34 bp处存在1个TATA盒,-77 bp处存在1个CAAT盒。还发现在该片段中包含5个E框、2个MEF2结合位点、1个MSX2盒和1个MTATA盒等肌肉特异性转录因子结合位点。采集鹅肝脏、胸肌、腿肌、心脏、肺、肠、肾和脑等8种组织并提取总RNA,用Northern blot方法检测了Myostatin基因mR-NA在8种组织中的表达情况,发现其只在胸肌和腿肌中表达,而在其他几种组织中没有检测到表达信号。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

生长抑制特异性转录本5和微小RNA-142-3p在重症急性胰腺炎并急性呼吸窘迫综合征病人血清中的表达及临床意义

目的探讨生长抑制特异性转录本5(GAS5)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在重症急性胰腺炎(SAP)合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病人血清中的表达及临床意义。方法选取2017年2月至2018年12月平顶山市第一人民医院SAP病人83例,采用随机数字表法抽样41例并发ARDS者为ARDS组,42例非ARDS组。另选取同时期40例健康体检者作为健康对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病人血清GAS5和miR-142-3p表达水平,Pearson相关性分析SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p表达相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GAS5和miR-142-3p对SAP合并ARDS的诊断价值,logistic回归分析SAP合并ARDS及其预后的影响因素。结果与健康对照组比较,非ARDS组和ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。与非ARDS组比较,ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p呈负相关(P<0.05)。GAS5与miR-142-3p联合检测诊断SAP合并ARDS的灵敏度、特异度及曲线下面积(AUC)均高于GAS5、miR-142-3p单独诊断(P<0.05)。与SAP合并ARDS存活病人比较,死亡病人血清GAS5表达水平升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05)。GAS5和miR-142-3p是SAP病人合并ARDS的显著影响因素(P<0.05),也是SAP合并ARDS病人预后的显著影响因素(P<0.05)。结论SAP合并ARDS病人血清中GAS5表达升高,miR-142-3p表达降低,可能为SAP合并ARDS的诊断和预后判断提供了新的生物学指标。

血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1与冠状动脉粥样硬化病变程度及稳定性的相关性

目的检测冠状动脉粥样硬化(CAS)患者血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1(lncRNAGAS6-AS1)的表达水平,分析其与CAS病变程度及稳定性的关系。方法选取2020年2月至2021年8月期间在武汉市汉口医院接收的124例CAS患者为CAS组,同期在我院体检的健康者124例为对照组;检测并比较各组血清中lncRNAGAS6-AS1和白介素-6(IL-6)的表达水平,分析CAS患者血清lncRNA GAS6-AS1与IL-6表达水平、Gensini积分的相关性。结果与对照组相比,CAS组血清lncRNA GAS6-AS1的表达水平降低,IL-6表达水平升高(t=43.614、23.404,P<0.05);稳定性、不稳定性心绞痛和急性心肌梗死患者中lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=6.821、7.495,P<0.05);单支、双支、多支病变患者血清lncRNAGAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=12.946、13.023,P<0.05);轻、中、重度病变组血清lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=15.900、6.224,P<0.05);CAS患者血清lncRNAGAS6-AS1与IL-6表达水平和Gensini积分呈负相关(r=-0.685、-0.699,P<0.05)。结论CAS患者血清lncRNA GAS6-AS1表达水平可能可以作为反映CAS病变严重程度和稳定性的潜在生物标志物。

血浆生长抑制特异性基因6浓度与重症脓毒症患者急性肺损伤的关系

目的探讨血浆生长抑制特异性基因6(Gas6)浓度与重症脓毒症患者急性肺损伤(ALI)的关系及预测作用。方法选择住院治疗的重症脓毒症患者共142例,其中根据是否出现ALI分为ALI组(28例)和非ALI组(114例),比较两组患者的一般资料,采用ELISA检测两组患者早期的血浆Gas6、sRAGE、白细胞介素(IL)-6、IL-8和血管性血友病因子(v WF)的水平,分析Gas6与炎症指标的相关性并对重症脓毒症患者发生ALI建立受试者工作特征(ROC)曲线预测其诊断价值。结果 ALI组患者的APACHEⅡ评分、气管插管和使用血管活性药物患者的比例、60 d死亡率均显著高于非ALI组(P <0. 05),ALI组的血浆Gas6、IL-6和IL-8水平均显著高于非ALI组,差异有统计学意义(P <0. 05),而两组之间的sRAGE和v WF水平对比差异无统计学意义(P> 0. 05),血浆Gas6的水平与IL-6、IL-8的水平呈显著正相关(r=0. 659,r=0. 496,P <0. 001),当血浆Gas6水平为21. 9 ng/m L时,其诊断的敏感度为0. 786,特异度为0. 649。结论血浆Gas6在重症脓毒症合并ALI患者中高表达,其与血浆炎症指标呈正相关。

抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性定量PCR检测方法的建立及其标准化

【目的】抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5已获得中国进口加工原料安全证书,建立一种特异、准确、灵敏的抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,为抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5在中国的安全监管提供精准测量技术。【方法】首先利用Beacon designer 8.0软件对抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体5′端旁侧序列设计18对引物探针,结合1对罗萨里奥农业生物技术学院公司提供的引物探针,随后采用qPCR技术对引物探针进行特异性筛选,遴选出1对候选引物探针;设置实时荧光定量PCR的引物/探针浓度梯度,优化qPCR方法的反应体系;设置不同类型的特异性测试样品测试方法的特异性;以纯合抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5基因组DNA作为标准样品,梯度稀释成标准溶液模板,绘制标准曲线,考察qPCR方法的线性动态范围,配置拷贝数比值为5%、1%和0.1%的测试样品,评价定量方法的准确性;配置拷贝数比值为0.05%和0.025%的样品,测试方法的检出限;拷贝数比值为0.1%的样品经16次定量测试,确定方法的定量限;最终确定抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性实时荧光定量PCR检测方法的关键技术参数。8家有资质单位对该定量PCR方法的特异性、检出限、定量限、准确性等进行验证,采用柯克伦法和格拉布斯法评估qPCR方法的重复性和再现性,利用线性最小二乘法对准确性样品测试结果的测量不确定度进行预评定。【结果】通过特异性筛查确定RBORD-F1/RBORD-R1/RBORD-P1引物探针为候选组合,建立了抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性qPCR方法,扩增片段为138 bp,优化的反应体系引物终浓度为0.4μmol·L-1、探针终浓度为0.2μmol·L-1;IND-ØØ41Ø-5和Lectin标准曲线的线性动力学范围为33—83190 copies的基因组DNA,该方法可准确定量5%、1%和0.1%含量的IND-ØØ41Ø-5测试样品,偏差和相对标准偏差(RSD)均小于25%;确定检出限为0.05%、定量限为0.1%。8家实验室间联合验证该方法稳定性好、特异性强,检出限为0.05%,定量限为0.1%,且具备良好的实验室间重复性和再现性,经测量不确定度预评定后,获得5份抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5测试样品的测量结果分别为(0.10±0.02)%、(0.53±0.09)%、(1.05±0.18)%、(2.05±0.34)%和(5.18±0.87)%,结果准确可靠。【结论】成功建立了抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性实时荧光定量PCR检测方法,能够实现抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体成分的精准定量检测。

血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂及生长停滞特异性基因产物6和缺血修饰蛋白在冠心病病情评估的意义

目的观察冠心病患者血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、生长停滞特异性基因产物6(Gas-6)和缺血修饰蛋白(IMA)病情评估的临床意义。方法选择2013年1月至2015年12月在我院就诊的冠心病患者121例,为冠心病组。选择同期在我院行健康体检者30例为健康对照组。用酶联免疫吸附法检测血清Vaspin,Gas-6和IMA水平。比较冠心病组和健康对照组血清Vaspin,Gas-6和IMA水平变化,冠心病患者血清Vaspin,Gas-6和IMA水平与疾病严重程度,冠状动脉硬化分支数和冠状动脉狭窄程度的关系,及其各个指标之间的联系。结果冠心病组的血清Vaspin水平明显低于健康对照组(P<0.01),并随着冠心病严重程度,冠状动脉分支数和动脉粥样硬化狭窄程度的升高而降低(P<0.01),而血清Gas-6和IMA水平较健康对照组明显升高(P<0.01)并随着冠心病严重程度,冠状动脉分支数和动脉粥样硬化狭窄程度的升高而升高(P<0.01)。冠心病患者血清Vaspin水平与Gas-6(r=-0.562,P<0.05)和IMA(r=-0.756,P<0.05)水平呈负相关,而Gas-6水平与IMA水平呈正相关(r=0.812,P<0.05)。结论 Vaspin,Gas-6和IMA参与了冠心病的发生发展过程,血清Vaspin,Gas-6和IMA水平对于早期诊断冠心病,判断冠心病严重程度和指导治疗具有重要临床意义。

慢性心力衰竭患者血清LncRNA生长抑制特异性转录本5表达与心肌重构及心功能的相关性研究

目的:探究长链非编码RNA生长抑制特异性转录本5(LncRNA GAS5)在慢性心力衰竭(CHF)患者的表达水平及与心肌重构、心功能的相关性。方法:选择本院2018年9月至2020年7月,收治的141例CHF患者为心力衰竭组;并以本院同时间段内的149例健康体检者为对照组。分析两组一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清中LncRNA GAS5表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α、IL-10水平;比较两组心肌重构指标左心室重量(LVM)、LVEF水平;分析CHF患者血清LncRNA GAS5水平、LVM、LVEF与TNF-α、IL-10及LncRNA GAS5水平与LVM、LVEF的关系;Logistic回归分析CHF的影响因素。结果:心力衰竭组患者血清TNF-α及LVM水平明显高于对照组(P<0.05),血清LncRNA GAS5、IL-10、LVEF水平明显低于对照组(P<0.05);CHF患者血清LncRNA GAS5、LVEF与TNF-α水平,LVM与LncRNA GAS5、IL-10水平均呈负相关(P<0.05);LVM与TNF-α水平,LncRNA GAS5、LVEF与IL-10水平,LncRNA GAS5与LVEF水平均呈正相关(P<0.05);TNF-α、LVM为影响CHF发生的危险因素(P<0.05),LncRNA GAS5、LVEF是影响CHF发生的保护因素(P<0.05)。结论:LncRNA GAS5在CHF患者血清中呈低表达,与TNF-α、IL-10呈一定相关性,三者均可能在心肌重构、心功能变化中发挥作用。

旋毛虫5日龄成虫期特异性基因片段的克隆及鉴定

利用差减抑制杂交 (SSH)技术 ,以旋毛虫 5日龄成虫的cDNA为试验方 (tester) ,以肌幼虫 + 3日龄成虫的cDNA为驱动方 (driver) ,制备 5日龄成虫差减cDNA ,并与 pT Adv载体相连接 ,转入大肠埃希氏菌TOP 10F。以试验方的差减cDNAPCR产物 +未差减cDNA为试验方探针 ,以驱动方的差减cDNAPCR产物 +未差减cDNA为驱动方探针 ,对 5日龄成虫差减cDNA克隆进行初步筛选 ,对筛选到的阳性克隆进一步用southernblot进行鉴定 ,并对其测序 ,进行序列分析。结果表明 ,获得 1个大小为 464bp的旋毛虫 5日龄成虫期特异性cDNA片段 ,经BLAST软件分析表明 ,该序列是 1个未见报道的旋毛虫基因序列片段 ,可能编码 1种表皮胶原蛋白。这为旋毛虫 5日龄成虫期特异性基因全长序列的钓取、分析及鉴定奠定了基础。

人生长终止特异性同源盒基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的生长终止特异性同源盒(growth arrest-specific homeobox,Gax)基因表达产物是核转录因子,主要存在于心血管系统中,对胚胎发育、细胞生长、分化和迁移等起基因调控作用,其表达异常与多种疾病相关。为深入研究Gax基因在临床疾病中的作用,文中构建表达了人Gax基因的重组腺病毒载体。方法根据pEGFP-N1-Gax质粒的多克隆位点,用NheⅠ和HindⅢ双酶切获得人Gax基因片段,连接至穿梭质粒pDC18-mCMV上,构建穿梭质粒pDC318-mCMV-Gax,然后与骨架质粒pPE3共转染293包装细胞,同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-Gax,反复感染293细胞扩增病毒后,氯化铯梯度离心纯化病毒,并测定病毒滴度。结果穿梭质粒pDC318-mCMV-Gax经双酶切和测序证实构建成功;PCR鉴定人Gax基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度为4.5×1010pfu/ml。结论该研究成功构建了重组腺病毒载体Ad5-Gax,为进一步在体内外研究Gax基因参与多种疾病的发生发展提供了材料。

C反应蛋白和生长停滞特异性基因产物6基因交互作用与中国汉族人群缺血性脑卒中及其亚型的关联研究

目的探讨C反应蛋白(CRP)和生长停滞特异性基因产物6(GAS6)基因4个单核苷酸多态性(SNP)位点与缺血性脑卒中(IS)及其亚型的相关性,并进一步分析CRP和GAS6基因间的交互作用与IS及其亚型的相关性。方法采用回顾性病例对照研究,2010年10月—2012年12月连续收集129例IS患者作为病例组及192例非IS者作为对照组。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测CRP rs3093059:T>C和rs1130864:C>T、GAS6 rs8191974:G>A和rs7400722:C>T 4个SNP位点的基因型,并结合DNA测序进行验证。检验4个SNP对IS发生的易患性,同时采用广义的多因素降维法(GMDR)研究二者之间的交互作用,并进一步运用Logistic回归模型进行验证。结果单位点分析显示,病例组及其亚型与对照组比较,基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05);GMDR分析表明,在大动脉粥样硬化性脑卒中(LAA)发生中,CRP rs3093059:T>C与GAS6rs7400722:C>T的交互作用差异有统计学意义(检验样本一致性=61.29%;交叉验证一致性=10;P=0.0107)。同时携带rs3093059 TC+CC和rs7400722 CT+TT具有较高的LAA发生风险〔OR=2.439,95%CI(1.046,5.687),P=0.041〕。结论 CRP和GAS6基因可能共同参与影响了IS的易患性,二者之间的基因-基因交互作用将有助于为IS研究开辟新的领域。

巢湖鸭生长素基因和垂体特异性转录因子1基因的PCR-SSCP检测

以生长素基因Ghrelin和垂体特异性转录因子1Pit-1基因为候选基因,采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测2个候选基因在巢湖鸭群体中的单核苷酸多态性(SNPs)。结果表明,Ghrelin基因exon 3第54 bp位置有G→A碱基的点突变,在巢湖鸭群体中检测到AA、AB、BB 3种基因型,A等位基因频率为0.49,B等位基因频率为0.51;在exon 5第149位和166位发生了C→A和G→T的突变,检测到MM、MN、NN 3种基因型,M等位基因频率为0.19,N等位基因频率为0.81。Pit-1基因的2对引物的扩增片段均未检测到多态性,说明所检测的Pit-1基因外显子3和4序列比较保守。

启动子CpGs位点甲基化所致BRCA1基因转录抑制作用的位点特异性

目的 研究 BRCA1基因 Cp G岛内各个 Cp Gs位点甲基化与转录水平的关系 ,探讨甲基化所致转录抑制作用的特异性 Cp G位点 ,以阐明 DNA甲基化的作用方式。方法 以 Rice等研究数据为材料 ,用方差分析和多因素线性回归模型等方法进行统计再分析。结果 BRCA1基因 Cp G岛 +8～ +44、- 189～ - 19、- 379～ - 2 5 8、- 37～ - 19和 - 80～ - 19区段内 Cp Gs的甲基化与基因转录抑制有关 ,这些区段内 Cp Gs位点的甲基化数目越多 ,基因转录水平越低。多因素线性回归模型分析表明 ,- 80～ - 19区段的甲基化与转录抑制关系密切。并以 - 2 9Cp G位点甲基化引起的转录抑制作用最强。结论 Cp G岛甲基化引起的转录抑制与 Cp Gs位点有关 ,具有位点的特异性。