藻类生长抑制试验中藻细胞计数方法比较

[目的]研究农药制剂对藻类生长抑制试验中应用分光光度法、流式细胞仪检测法替代血球计数法用于藻细胞计数的可行性。[方法]采用连续扫描(400-780 nm)确定分光光度法的最佳测试波长;并通过对比血球计数法、分光光度法、流式细胞仪检测法之间的测试结果,为稀释液类型不同的农药选择合适的藻细胞计数方法。[结果]扫描获得对小球藻的最佳检测波长为687 nm;分光光度法与流式细胞仪检测法检测结果间无显著差异,2者与血球计数法所得EC50值有时会存在显著差异,但这种差异不影响毒性等级的划分;稀释液中有微米级固体颗粒存在的农药,采用流式细胞仪检测时易发生堵塞;且流式细胞仪存在将农药稀释液中的固体颗粒与油珠误识别成藻活细胞的可能性。[结论]稀释液无论是哪种类型,分光光度法均可以作为血球计数法的替代方法;对于稀释液为纳米溶液及真溶液的农药,流式细胞仪可以替代血球计数法进行检测。

用白喉患者恢复期血清抑制白喉杆菌生长的实验报告

目前,国内采用平板法和动物试验作白喉杆菌毒力试验。这两种方法均须用白喉抗毒素作对照,由于白喉抗毒素购买比较困难(须到北京购买),使边远山区检验室无法进行此项试验。为此,笔者采用白喉患者恢复期血清作白喉杆菌生长抑制试验,获得了满意的结果,现报告如下。

羊肺炎霉形体病研究

１９８０～１９９２年，从四川、云南两省６个种羊场的进口种羊和阿坝、凉山、甘孜州共１０个县的本地绵羊和山羊病肺中分离出２５株霉形体。经理化特性鉴定、药敏试验、致病性测定，并与绵羊肺炎霉形体国际参考株Ｍ·Ｏ·Ｙ９８用生长抑制试验定型，证明这２５株霉形体均为绵羊肺炎霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｏｖｉｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）。用微量间接血凝试验（ＩＨＡ）检测，Ｍ·Ｏ·Ｙ９８抗原与丝状霉形体山羊亚种Ｃ８７、丝状霉形体丝状亚种Ｃ８８、羊衣原体、布氏杆菌和羊副结核的抗体均无交叉反应。ＩＨＡ对人工感染羊和有呼吸道症状的自然病例的阳性检出率分别为９５％和８２．６％。试验表明，ＩＨＡ是一种简易、快速而可靠的诊断方法，适用于本病的群体检疫。对人工感染和自然感染发病羔羊进行药物防治试验，证明枝原净效果最好，剂量为每日每公斤体重２２．５ｍｇ，可以抑制肺炎病变的发展。２个试验组的肺炎实变平均值为０．１５±０．２８和０．５８±０．６３，而２个对照组则高达１１．９０±１４．０４和１４．５０±１２．６４。

氧氟沙星对斜生栅藻的毒性效应

氧氟沙星（ofloxacin,OFLX）又名氟嗪酸,是第三代喹诺酮类抗生素.由于其具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点,且与其它抗菌药物无交叉耐药性,已被广泛应用于畜禽疾病防治和水产养殖中.进入环境的抗生素不仅会对靶生物起作用,也可能会对非靶生物和生态系统产生影响.藻类是水生生态系统的初级生产者,是评价水环境质量的重要指标.斜生栅藻作为国际经济合作和发展组织（OECD）制定的藻类生长抑制试验的标准藻种,具有对毒物敏感、繁殖快。

山梨酸酯的合成与抗菌作用研究

采用直接酯化法 ,将山梨酸与四种醇反应 ,合成了山梨酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯 .合成产率达到 6 0 %～ 70 % .这几种化合物均表现出良好的抗菌活性 ,与山梨酸相比较 ,可延长微生物生长适应期 8～ 2 0h 。

贵州山羊传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定

经临床症状 ,病理剖检 ,病原分离培养 ,生化试验 ,生长抑制试验 ,代谢抑制试验 ,人工接种发病 ,间接血凝诊断 ,对贵州省习水县和罗甸县山羊群以呼吸道疾患为主要特征的传染病进行诊断 ,确诊为山羊传染性胸膜肺炎 ,分离出的两株支原体均为丝状支原体山羊亚种PG3,分别定名为贵习PG3/99和贵罗PG3/99。

四川地区鸡毒支原体的分离鉴定及血清学定型

在成都、重庆等１０个市、地、县，从患有慢性呼吸道疾病的鸡场采集１０８份样品，分离的２７个菌株，经Ｌ型细菌检验，理化特性鉴定，符合支原体的生物学特性。通过血清学鉴定（生长抑制试验），证实分离的支原体与鸡毒支原体国际代表株Ｓ６为同一血清型。人工复制试验结果，表明分离的鸡毒支原体ＳＭＧ－１和ＳＭＧ－２具有高致病性。

四川地区鸡慢性呼吸道病的研究

从８０年代以来，我们对四川省鸡慢性呼吸道病进行了全面系统的流行病学调查，通过在不同地区采集的５３２６份鸡血清样品的血清凝集试验，ＭＧ的阳性率达６６．１９％。对从病鸡中采集的１０８份样品进行病原分离培养、生长抑制试验、理化特性鉴定和人工复制试验，证实有２７株霉形体为鸡毒霉形体。证明了鸡慢性呼吸道病在四川的流行。

让乳酸菌制剂在动物肠道内就产生必需氨基酸和免疫保护造——新型乳酸菌制剂的理想构思

本文传达的信息是令人兴奋的,将基因工程技术应用于乳酸菌制剂,通过对一些优良菌种的遗传改造,导入有用基因如必需氨基酸合成酶基因、疫苗基因等,让乳酸菌制剂在肠道内就能产生必需氨基酸或某些传染病病原的免疫保护造。这将是最理想的乳酸菌制剂。而其基础是选择优良的乳酸菌,文章告诉说,他们通过从商品鸡盲肠当中分离出了6株乳酸菌,根据耐酸耐胆汁试验,病原菌生长抑制试验以及肠道粘膜粘附试验,筛选出两株优势菌株CX001和CX005。

候选结核疫苗的评价模型

卡介苗作为目前唯一批准使用的预防结核疫苗,由于无法提供充足的保护力,目前结核病依然是严重危害人类健康的传染病,因此筛选优质候选疫苗迫在眉睫。所有候选疫苗进入临床试验前必须评价其安全性、免疫原性以及有效性。评价结果在一定程度上也预示候选疫苗在人体的免疫作用,也是目前评价候选疫苗是否优于传统卡介苗的依据。论述候选结核疫苗临床试验前所使用的体内和体外评价模型。对评价模型的充分认识将提高候选疫苗评价数据对人体临床试验的预测意义,也可更具体地执行实验动物的替代、减少和优化原则。

正常鸭上呼吸道巴氏杆菌带菌状况检查

按巴氏杆菌常规鉴定方法对40只正常建昌鸭上呼吸道材料进行有关形态学、分离培养、生化反应及生长抑制试验鉴定，发现23／40份材料形态学检查为疑似巴氏杆菌阳性，占57．5％；其中培养特性及生化反应和生长抑制试验较为一致的有15／40份，占37．5％；巴氏杆菌在会有相应抗体的培养基上，生长明显受抑，菌落周围出现溶菌环，镜检时细菌呈丛、成堆较为普遍，且形态不规整。此外发现鸭上呼吸道存在至少10种以上的不同形态和染色特性及培养特性的细菌。

上海地区大、小鼠中霉形体的分离和血清学鉴定

参照标准化方法,从7群65只大鼠分离出174只霉形体。常规饲养的大鼠,群阳性率100％,头阳性率98.1％,可信限度95～99％。从4群42只大鼠分离出11株霉形体,阳性率明显低于大鼠。用生长抑制试验鉴定143株代谢葡萄糖分离物,结果均为肺霉形体(M.puimonis)。揭示了本市实验用鼠类慢性呼吸道病和生殖道病的严重性。本研究所用的分离培养及血清学鉴定方法,可作为实验动物中霉形体感染的主要监测手段。并讨论了控制对策。

新型结核病疫苗及其评价方法的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病,严重危害人类健康,卡介苗对儿童粟粒性结核和结核性脑膜炎保护效果较好,但对成人肺结核保护效果却不确定。过去十余年,众多研究人员一直致力于新型结核病疫苗的研发,但至今尚未成功。结核病的致病和免疫机制还不完全清楚,缺乏可以预测临床保护效果的指标和动物模型,动物实验结果常与临床试验结果不符,临床试验耗时漫长、成本昂贵、且需要大量结核病患者,这些都严重阻碍了结核病疫苗的研发。近年来,研究人员研发了一些新方法进行结核病疫苗临床前评价,从而缩短了进入临床试验的时间,加快了结核病疫苗的发展。综述了新型结核病疫苗的研究进展及其保护力评价方法,特别是临床前评价新方法。

副猪嗜血杆菌HigB和HigA基因的原核表达及功能分析

副猪嗜血杆菌属于条件性致病菌,可引起猪的格拉泽病,表现为多发性浆膜炎和关节炎。毒素抗毒素系统(TA)广泛存在于细菌中,其参与各种应激状态下的生理调节,利于机体适应复杂环境。克隆编码副猪嗜血杆菌的HigBA毒素抗毒素蛋白的基因,并对其进行原核表达和分析鉴定。结果发现,HigB对生长有抑制作用,而HigA可以中和这种作用,HigBA构成一对毒素抗毒素系统。HigB在高温和高密度时,表达量显著增加,显示其参与逆境环境下的生理调控。

伊氏锥虫分离株对安锥赛抗性的体内、外检测结果的相关性研究

为探讨筛选安锥赛治疗伊氏锥虫病有效剂量的快速方法 ,采用生长繁殖抑制法测定伊氏锥虫XJCA、HBM、ZJB1、JSB1、JSB2和ZJB2分离株对安锥赛的敏感性 ,结果它们的IC50 依次是 0 0 0 15 11、 0 0 0 8436、0 0 15 5 0、 0 0 16 2、 0 0 5 90 6和 0 0 82 6 0 μg mL。采用小白鼠体内试验 ,测定这 6株伊氏锥虫的CD10 0 ,每个分离株伊氏锥虫有安锥赛 3个剂量组和不治疗对照组 ,每个治疗组 10只小白鼠 ,对照组 5只小白鼠 ,每只小白鼠经腹腔接种 1 0× 10 6条锥虫 ,以给药剂量 ,将XJCA株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,HBM株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,ZJB1分为 5 0mg kg组、 7 0mg kg组和 9 0mg kg组 ,JSB1株分为 5 0mg kg组、 7 1mg kg组和 10 1mg kg组 ,JSB2株分为 7 0mg kg组、 9 0mg kg组和 11 0mg kg组 ,ZJB2株分为 9 0mg kg组、 11 0mg kg组和 13 0mg kg组 ,结果这 6个伊氏锥虫分离株的CD10 0 依次为3 5mg kg、 5 0mg kg、 7 0mg kg、 7 1mg kg、 11 0mg kg和 13 0mg kg。它们的IC50 与CD10 0 的相关系数经计算和检验分析 ,IC50 与CD10 0 之间相关系数为 0 2 2 2 ,这表明它们呈曲线性正相关 ,以IC50 与CD10 0 作出它们的相关“曲线”。

新型结核病疫苗T-BioVax与Poly(I:C)和DDA配伍后的免疫效果初步评价

目的对新型结核病疫苗T-BioVax及其与聚肌胞苷酸Poly(I∶C)、二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA)佐剂配伍后的免疫效果进行初步评价,并验证体外分枝杆菌生长抑制试验(mycobacteria growth inhibition assay,MGIA)评价结核病疫苗效力的可行性。方法将BALB/c小鼠随机分成4组,1组于腹股沟皮下免疫T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA 2针,间隔3周; 3组分别免疫T-BioVax、BCG(Danish 1331)或生理盐水(normal saline,NS)为对照,其中BCG(Danish 1331)组经皮内免疫一针,另2组免疫程序与T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组相同。分别在第4、6、7、9周通过ELISA检测小鼠血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平;在第4周通过ELISPOT检测脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17;在第6周和第9周通过MGIA来评价疫苗效力。结果抗体检测结果显示,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG和IgG1抗体水平均高于T-BioVax组和BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05); T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平高于T-BioVax组,差异有统计学意义(P<0.05); T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平在第4周和第7周高于BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISPOT检测结果显示,除了在2.5μg/孔的T-BioVax抗原刺激时,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ的斑点形成细胞(Spot forming cells,SFC)数量与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=0.632 8,P=0.969 4)外,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ和IL-17的SFC数量均高于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。MGIA结果显示,第6周T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组和BCG(Danish 1331)组共培养的CFU数均低于T-BioVax组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05),T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组共培养的CFU数与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=2.067,P=0.478 9);第9周T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组共培养的CFU数低于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核病疫苗T-BioVax与Poly(I∶C)、DDA佐剂配伍后,免疫原性得到了增强,诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答都得到了提高,MGIA试验结果也显示疫苗对结核杆菌生长的抑制效果得到了提高,与体液免疫和细胞免疫结果相一致,初步表明该方法建立成功。

无胆甾原体属一新种—Acholeplasma Vtuli

荷兰学者Angulo等从胎牛血清和细胞培养物中分离到一种非螺旋状、无运动性、多形性球状微生物。经对其中从胎牛血清中分离到一株(FC097-2~T)进行研究,结果发现其直径大小约为700nm,适应生长温度为30—37℃,发酵葡萄糖、果糖和甘露糖,不水解精氨酸。能抵抗500μ/ml青霉素。

用FIB快速检测和鉴定禽源和牛源支原体

日本学者Takahata等建立了滤膜免疫印迹(FIB)法用于检测和鉴别支原体。1株禽源和9株牛源支原体菌株于肉汤培养基中传代,稀释后滴加于硝酸纤维素膜上固定作抗原,用兔超免血清吸附来消除非特异性FIB反应。结果发现该法有很好的种特异性反应。