生长抑素Ⅱ型受体SSTR2蛋白的理化性质及生物信息学分析

利用生物信息学方法在线分析生长抑素Ⅱ型受体SSTR2的理化性质、信号肽、跨膜结构、分泌蛋白类型、亚细胞定位、磷酸化位点修饰、空间结构及蛋白互作网络等,并通过MEGA5.0软件建立SSTR2蛋白的系统进化树。结果显示,该基因编码369个氨基酸,分子式为C_(1898)H_(2984)N_(470)O_(513)S_(23),相对分子质量为41332.79,等电点理论值为9.15,不稳定系数为37.16。SSTR2是一种碱性稳定亲水蛋白,无信号肽,存在7个跨膜区,作用于质膜结构;二级结构主要为α-螺旋,属7tmGPCRs超家族,且含有1个7tmA_SSTR2结构域;与SSTR2相互作用的蛋白质包括CORT、SST、NPY、GHRL、GNAI1、GNAI2、GNAI3、SHANK1、HIVEP2。SSTR2基因及其编码蛋白在进化上高度保守,可能参与G蛋白偶联受体信号通路,进而发挥其作用。本研究通过对SSTR2蛋白的理化性质及生物学功能进行分析,为深入研究该蛋白在疾病发生中的机制以及为靶向治疗神经内分泌肿瘤等肿瘤药物研发提供理论依据。

生长抑素受体亚型SSTR-2和SSTR-3mRNA在原发性肝癌中的表达

目的:了解原发性肝癌组织中生长抑素受体somatostatinreceptor,SSTR亚型SSTR2和SSTR3基因的表达情况。方法:采用逆转录-PCR法检测27例原发性肝癌患者癌组织和癌旁组织中生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR3mRNA的表达。结果:27例原发性肝癌患者的癌组织和癌旁组织SSTR2mRNA的表达阳性率分别为81.5%(22/27)和96.3%(26/27)SSTR3mRNA在肝癌组织中表达的阳性率为66.7%(18/27),在癌旁组织中的阳性率为51.9%(14/27)。结论:大多数原发性肝癌肿瘤组织中有一种以上生长抑素受体亚型基因的表达。

人涎腺癌细胞系MEC-1和Mc3生长抑素受体表达及RC-160的结合特性与预后康复相关(英文)

背景:人涎腺粘液表皮样癌发生发展的机制目前仍不清楚,深入研究SSTR的生物学特性及亚型分布模式是该领域研究热点之一。目的:探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系(MEC-1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体(SSTR)两种亚型(SSTR1、SSTR2)的表达与SSTR的放射配基125I-RC-160的结合差异与预后康复的相关性。设计:非随机非对照的研究。地点和材料:实验地点在第四军医大学口腔生物学教研室和西京医院核医学科。细胞系采用第四军医大学口腔生物学教研室建立的人涎腺粘液表皮样癌细胞MMEC-1、人涎腺粘液表皮样癌细胞株高转移细胞克隆Mc3。RPMI1640培养基及胰蛋白酶为Gibco产品;寡核苷酸探针由中科院微生物所制备;RC-160由北京赛百盛公司提供。方法:采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC-1及Mc3细胞株生物学特性;以原位杂交法检测MEC-1,Mc3细胞株SSTR1及SSTR2两种亚型的表达情况;以放射配基结合分析法分析MEC-1,Mc3细胞与125I-RC-60的结合情况。主要观察指标:MEC-1及Mc3细胞生物学特性,MEC-1,Mc3细胞SSTR1,SSTR2两种亚型的表达及MEC-1,Mc3细胞与125I-RC-160结合的情况。结果:MEC-1,Mc3细胞生长稳定,Mc3较MEC-1生长速度略快,克隆形成率高;MEC-1细胞高度表达SSTR1及SSTR2(82.6%和81.7%);

生长抑素受体1在皮质发育障碍大鼠海马的异常表达

目的通过研究生长抑素受体1(sstr-1)在皮质发育障碍模型大鼠海马区中的表达,探讨皮质发育障碍模型大鼠海马形态改变的发生机制及致癫机制。方法制作皮质发育障碍大鼠模型,选取P60 d仔鼠,利用免疫组化、Western Blot检测sstr-1在皮质发育障碍模型大鼠海马区的变化。结果与正常对照组比较,sstr-1在皮质发育障碍模型大鼠海马区水平表达与正常对照组相比明显降低(0.59±0.15 vs 1.02±0.14,P<0.052)。结论 sstr-1在皮质发育障碍大鼠模型海马神经元的迁移紊乱及致癫机制中具有重要作用。

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的 探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法 ①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果 ①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。

健脾与补肾对脾虚模型大鼠脑内生长抑素水平和受体基因表达的影响

目的比较健脾与补肾对脾虚模型大鼠脑内生长抑素(SS)水平和受体基因表达的影响。方法采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,以免疫组化和原位杂交法检测下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层SS及生长抑素受体1(SSR1)mRNA基因表达变化。结果模型组上述脑区SS免疫阳性反应物及SSR1 mRNA表达阳性反应物明显降低,与正常组比较差异显著;健脾组与补肾组上述脑区的SS免疫阳性反应物及SSR1 mRNA表达阳性反应物明显升高,与模型组比较差异显著,与正常组比较无显著差异。结论脾虚模型大鼠脑内对学习记忆有促进作用的SS水平和SSR1 mRNA基因表达有变化,健脾与补肾可能通过调节SS水平和SSR1基因表达而影响学习记忆能力。

在人类绒毛膜血管神经丛和蛛网膜颗粒中生长抑素受体1和2的表达-与特发性高颅压的关联

目的：用免疫组化的方法研究在人绒毛膜血管神经丛(CP)和蛛网膜颗粒中(AGs)生长抑素受体1和2的定位。

阿司匹林对SD大鼠小肠黏膜生长抑素受体水平的影响

目的:通过观察非甾体消炎药(Non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林不同给药途径对大鼠小肠黏膜屏障及生长素抑素受体(Somatostatin receptors SSTR)水平的影响,探讨阿司匹林的最佳给药途径。方法:32只SD大鼠随机分为灌胃组、灌肠组、腹腔注射组及空白对照组四组,每组8只。对回肠黏膜损伤进行评分;ELISA检测各组回肠组织SSTR水平;免疫组化检测各组回肠组织SSTR的分布,图像分析软件测定IOD值。结果:(1)阿司匹林治疗组回肠黏膜损伤指数比正常对照组高(P<0.05),但各实验组之间两两比较黏膜损伤评分无差别;(2)各亚型SSTR在大鼠小肠黏膜均有表达,以SSRT1及SSTR2为主(P<0.05);(3)与空白对照组比较,实验组大鼠小肠黏膜中SSTR1-5表达均降低(P<0.05);(4)不同的给药方式对SSTR1-5的影响不完全一致,部分P<0.05。(5)四组间SST浓度、IOD值差异无统计学意义。结论:阿司匹林可以导致大鼠小肠黏膜的损伤。各亚型SSTR在大鼠小肠黏膜均有表达,阿司匹林可以导致小肠黏膜各型SSTR的表达下降,提示这种变化可能影响小肠黏膜的屏障功能。不同的给药途径对SSTR的影响不尽相同,提示我们使用阿司匹林时胃肠外给药可能会减少肠道损伤的发生。

生长抑素/生长激素释放激素-生长激素-胰岛素样生长因子-1轴与营养

介绍近几年来生长抑素／生长激素释放激素-生长激素-胰岛素样生长因子轴营养调节的研究进展，包括营养不良时生长激素，胰岛素样生长因子-1的变化，生长激素抵抗，生长激素受体与受体后缺陷，生长激素受体后缺陷的分子机制及胰岛素样生长因子-1的清除与降解。简单阐述了生长激素，胰岛素样生长因子-1对分解代谢，神经肌肉疾病，骨质疏松，肾功能不全，肥胖，老年人营养不良，生长激素缺乏及生长激素受体或受体后缺陷综合征的影响及治疗意义。

生长抑素Ⅱ型受体及Ⅴ型受体在结直肠癌上的分布

生长抑素(somatostatin,SST)可抑制正常和肿瘤细胞的增殖,利用生长抑素来治疗包括胃肠道非内分泌肿瘤在内的各种肿瘤的研究在近十年来愈来愈受到重视。当生长抑素受体(somatostatinreceptor,SSTR)5个亚型的基因在92、93年被成功地克隆后,这一领域的研究重点集中在了SSTR亚型的分布及其介导的不同作用方面。近三。

碳酸酐酶Ⅸ、桩蛋白与生长抑素受体在十二指肠乳头癌组织中的表达及意义

目的探讨十二指肠乳头癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、桩蛋白与生长抑素受体(SSTR)的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测87例十二指肠乳头癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、桩蛋白与生长抑素受体(SSTR)的表达。结果 87例十二指肠乳头癌中,CAⅨ阳性率达71.3%(62/87),桩蛋白阳性率达74.7%(65/87),显著高于其他两组(P<0.05)。而生长抑素受体阳性率48.2%(42/87),显著低于其他两组(P<0.05)。且低分化组的十二指肠乳头癌的CAⅨ阳性率、桩蛋白阳性率、SSTR阳性率与中、高分化组比较,差异显著(P<0.05)。而M1期的十二指肠乳头癌的CAⅨ阳性率、桩蛋白阳性率、SSTR阳性率与M0期比较,差异显著(P<0.05)。结论碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、生长抑素受体(SSTR)及桩蛋白三者与十二指肠乳头癌的发生、发展及转移密切相关,可以作为诊断早期肿瘤的重要指标之一,也可以用于评价肿瘤的发展及预后。

一种靶向于生长抑素受体2的药物筛选模型的建立与应用

目的 以生长抑素受体2(SSTR2)为靶点,建立生长抑素类似物(SSTA)活性检测的细胞模型,为SSTR2激动剂以及SSTA的药物筛选提供一种简单稳定的评价方法。方法 将SSTR2目的基因整合入pEGFP-N3载体中,构建重组质粒SSTR2-pEGFP-N3,并转染进HEK293细胞,使用G418筛选后挑取阳性克隆,扩大培养获得稳转细胞株。通过荧光细胞成像、免疫蛋白印迹、qPCR等方法对获得的稳转细胞株进行鉴定。建立钙流检测体系,对该体系细胞数量、荧光指示剂浓度、孵育时间等条件进行优化。最后利用建立的筛选模型对不同批次的上市药物生长抑素制剂思他宁进行检测。结果 成功构建SSTR2稳转细胞株,受体主要分布在细胞膜上。确定钙流检测最优条件为:30 000个细胞每孔,Fluo-4/AM指示剂浓度为3 μmol·L -1 ~5 μmol·L -1 ,孵育时间为45 min。在该条件下,不同批次的思他宁EC 50 值稳定。结论 成功构建SSTR2稳转细胞株,并优化钙流检测方法,为生长抑素受体激动剂的筛选提供了一种简单稳定的模型。

人胃癌组织生长抑素Ⅱ型受体表达的初步研究

生长抑素对正常细胞和肿瘤细胞的生长、增殖具有抑制作用,而生长抑素的作用是通过生长抑素受体(SSTR)介导的,以其2型受体(SSTR2)与抑制细胞增殖的关系较为密切。本研究目的在于探讨胃癌组织、萎缩性胃炎及癌旁组织的SSTR2表达情况;并观察胃癌组织中Hp感染与SSTR2表达关系。

GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA表达的影响

选择70只小白鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半。其中第1组为对照组,第2-4组分别肌肉注射pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗;第5～7组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗,以β-actin作为内参,利用相对半定量RT-PCR,检测小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA的表达。结果表明:第3、5和6组的GHR mRNA表达显著高于1组和7组(P<0.05),第5和6组的IGF-I mRNA表达显著高于1组、2组、4组和7组(P<0.05),GM-CSF与SS的融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的GHR和IGF-I mRNA表达高于pGM-CSF+pcS/2SS共同免疫,同种DNA疫苗,口服免疫组的GHR和IGF-I mRNA表达总体上比肌肉注射组要高。这些结果证明,GM-CSF可促进SS DNA疫苗的免疫效果,提高肌肉组织中GHR和IGF-I mRNA的表达;pGM-CSF/SS效果优于pGM-CSF+pcS/2SS,口服免疫组要优于肌肉注射免疫组。

原发性乳腺癌SSTR1-3mRNA分布特性的研究

为研究生长抑素受体三种亚型（ＳＳＴＲ１－３）在原发性乳腺癌中的分布特性，以［０６３３α－３５Ｓ］ｄＡＴＰ标记ＳＳＴＲ三种亚型的寡核昔酸为探针，运用原位杂交技术，检测１０例乳腺癌组织中ＳＳＴＲ１—３ｍＲＮＡ的表达模式，并用Ｌｅｉｃａ图像分析仪对表达密度作半定量分析。结果表明，ＳＳＴＲ１—３在乳腺癌中的表达模式以表达ＳＳＴＲ２为主（７／１０）；从ＳＳＴＲ１—３在乳腺癌中的表达密度看，ＳＳＴＲ２高于其它两种亚型（８２．３±１．４）；与ＳＳＴＲ１、３相比，ＳＳＴＲ２为优势表达亚型（Ｐ＜０．０１）．说明ＳＳＴＲ３种亚型在乳腺癌中可同时表达，其分布模式呈异质性，其表达模式存在着较大的个体差异，从表达率及表达密度的半定量分析来看，ＳＳＴＲ２均为主要表达亚型，提示乳腺癌具有接受生长抑素类似物靶向药物治疗的乐观前景。

大鼠下丘脑SST及垂体SSTR-1对6周递增负荷运动的应答和适应

目的观察递增负荷运动造成免疫功能下降过程中生长抑素(SST)和生长抑素1型受体(SSTR-1)的应答和适应变化特征,探讨其可能机理。方法 120只SD雄性大鼠随机分为试验组和对照组,又依据取样时间的不同分为15小组,建立递增负荷训练模型。分别于第0、2、4、6周末的运动前安静状态、运动后即刻和运动后3 h,将大鼠全身灌流固定后取脑及垂体,冠状位连续石蜡切片后免疫组织化学染色,所得图像使用Image-Pro Plus6.0图像分析软件分析。结果 (1)下丘脑中SST主要分布在3V旁室周核的上半部分,为胞质阳性;SSTR-1主要分布在垂体边缘,为胞膜阳性。(2)各组大鼠下丘脑SST及垂体SSTR-1对6周递增负荷运动的适应性变化特征为:①对照组大鼠SST在6周内无显著性差异,SSTR-1在第2周时最低,依次为第0、4周,至第6周时最高;②2周安静状态SST较0周明显增多,4周安静时下降至略低于0周,第6周则下降更低;SSTR-1安静状态下4周最高,依次为第6、2和0周。(3)各周大鼠下丘脑SST及垂体SSTR-1对1次性运动的应答性变化特征为:①第0、4周运动后即刻SST的表达增多,而第2、6周减少;训练第0、2、4周大鼠运动后3 h均可恢复至运动前安静状态,第6周则不能恢复;②SSTR-1在运动即刻及恢复3 h后的变化规律与SST一致,但运动结束后3 h的恢复程度较SST低,有滞后现象。结论 (1)在长期递增负荷运动影响下,安静状态时大鼠下丘脑SST运动初期一过性增加,之后呈下降趋势,适宜运动可以减少安静状态SST的表达,有利于维持自身的免疫机能;(2)大鼠垂体SSTR-1对1次性运动应答性反应的规律与SST一致,即接受适宜运动训练的个体运动后即刻表达增多,处于运动应激动员和衰竭阶段的个体运动后即刻表达减少;(3)运动后即刻及安静状态下,过度训练均引起大鼠下丘脑SST及垂体SSTR-1表达减少,对于对抗免疫抑制的发展具有重要意义,是机体防御抑制保护的表现。