生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析肝癌组织中生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的关联性,为应用生长抑素及其类似物诊断和治疗肝癌奠定理论基础。方法:肝癌患者肝组织标本22例,采用RT-PCR检测并鉴定肝癌癌组织、癌旁组织及正常肝组织SSTR2和SSTR5 mRNA表达率,分析表达率与肿瘤特征之间的关系。结果:SSTR2 mRNA肝癌癌组织的表达率为81.8%(18/22),表达水平为118.27±17.25,与正常肝组织[36.4%(8/22),69.49±19.43]比较差异有显著性(P<0.05);与癌旁组织[72.7%(16/22),111.18±23.74]比较差异无显著性(P>0.05);癌旁组织与正常肝组织比较差异有显著性(P<0.05)。SSTR5 mRNA表达率和表达水平肝癌癌组织[18.2%(4/22),51.67±30.32]、癌旁组织[18.2%(4/22),49.56±27.61]及正常肝组织[9.1%(2/22),48.73±15.72]三组间两两比较差异均无显著性(P>0.05)。高分化肝癌组织中[SSTR2 100%(18/18),SSTR5 25%(4/16)]和无淋巴结转移的肝癌组织中表达率[SSTR2 25.0%(4/16),SSTR5 100%(4/4)]分别高于低分化的表达率[0(0/4),0(0/6)]和有淋巴结转移的表达率[0(0/6),0(0/18)](P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期[SSTR2 85.7%(12/14),SSTR5 21.4%(3/14)]与Ⅲ、Ⅳ期[75.0%(6/8),12.5%(1/8)]表达率比较差异无显著性。结论:SSTR2 mRNA亚型在肝癌中呈高表达,其表达率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移有关联性,与肝癌的分期无关联。

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA在消化系肿瘤中的表达

目的探讨消化系统恶性肿瘤组织中生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的相关性。方法收集消化系肿瘤标本共66例,均经手术及病理证实。男性44例,女性22例,PCR扩增SSTR2、SSTR5 mRNA,并进行琼脂糖凝胶电泳,测其OD值并进行分析。结果不同肿瘤SSTR2 mRNA的表达频率不同,肝癌组织明显高于胃癌、结肠癌和胰腺癌(P<0.05),胃癌、结肠癌和胰腺癌之间表达无明显差异。肝癌癌组织与癌旁组织之间表达水平无明显差异,但与正常组织表达水平有显著差异(P<0.05);胃癌、结肠癌和胰腺癌癌组织与癌旁组织、正常组织之间表达无显著性差异(P>0.05)。SSTR5 mRNA的表达频率和表达水平在消化系肿瘤中差异不显著(P>0.05)。结论(1)胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌组织中有SSTR2、5亚型表达,以SSTR2亚型为主。(2)SSTR2亚型在胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌的表达频率及表达水平不同。在肝癌中呈高表达,在胃癌、结肠癌及胰腺癌中表达水平较低。(3)SSTR2、5亚型的表达频率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移密切相关,结肠癌与肿瘤分期有密切关系。(4)SSTR2亚型鉴定对胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌是否适合生长抑素治疗具有一定指导意义。

肿瘤生长抑素受体亚型的分布与表达

报道了于１９９２～１９９４年相继克隆成功的５种人类生长抑素受体亚型（ｈＳＳＴＲ１～ｈＳＳＴＲ５）的分子生物学特性，总结了应用放射性配体结合分析法对ｈＳＳＴＲ１～ｈＳＳＴＲ５与２种天然生长抑素（ＳＳＴ－１４及ＳＳＴ－２８）及４种人工合成的生长抑素类似物（ＳＳＡ）的选择性结合特性的研究结果。重点讨论了ｈＳＳＴＲ各亚型在神经内分泌性肿瘤中的分布与表达，简述其对了解肿瘤发生发展所具有的理论意义及其对肿瘤进行受体闪烁显像和受体介导治疗的临床价值。

生长抑素受体亚型在人肝星状细胞的表达及其临床意义

目的研究人肝星状细胞系（LX-2细胞）生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）亚型的表达情况，探讨其临床意义。方法选择对数生长期的LX-2细胞，将细胞以8×10^6个／孔接种于预置入盖玻片的6孔板中，分为LX-2组、中药复方861组、奥曲肽（octreotide）处理组及SSTR亚型阳性细胞（PANC-1）对照组，每组重复2孔。应用免疫细胞化学染色方法，观察LX-2细胞SSTR2、SSTR5的表达；用RT-PCR方法观察SSTR亚型1～5的表达。结果免疫细胞化学染色结果发现，LX-2细胞SSTR亚型2、5表达阳性，阳性物质呈棕红色，主要位于细胞膜及细胞质，复方861处理组SSTR2、5表达增强，细胞着色较深；RT—PCR结果发现，LX-2细胞SSTR亚型1～5的表达均阳性，阳性表达的高低依次为SSTR1、SSTR4〉SSTR2、SSTR5〉SSTR3（P〈0．05）。结论LX-2表达5种SSTR亚型，肝星状细胞可能是SST及其类似物降低门静脉压力的作用靶点。奥曲肽可能通过SSTR2、SSTR5亚型调节肝星状细胞的舒张与收缩功能，从而影响肝内阻力及门静脉压力。

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5在人原发性肝癌组织中的表达

目的研究生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5在人原发性肝癌组织中的表达情况。方法应用免疫组织化学方法分别检测25例原发性肝癌组织和14例癌旁肝硬化组织SSTR2、SSTR5的表达。结果18例(72%)肝癌组织至少表达一种生长抑素受体亚型,表达部位位于肝癌细胞的胞浆及胞膜,10例(71.4%)癌旁肝硬化组织至少表达一种受体亚型;肝癌的分化程度、TNM分期、血清AFP水平、乙肝病毒水平、肝功能Child-pugh分级等与受体的表达无明显相关性。结论72%原发性肝癌组织中表达生长抑素受体亚型SSTR2和(或)SSTR5,肝癌组织在受体的表达上存在差异性。

生长抑素受体亚型在结直肠癌组织中的表达

目的 探讨结直肠癌组织中生长抑素受体亚型(SSTR1 SSTR5 )的表达和临床病理学意义。方法 免疫组织化学染色方法(SP法)检测12 7例结直肠癌组织和40例正常结直肠黏膜中SSTR 5种亚型的表达。结果 SSTR 5种亚型在结直肠癌组织和正常结直肠黏膜均有表达,两组SSTR表达的优势亚型都是SSTR1,结直肠癌组织中SSTR4表达明显高于正常结直肠黏膜(18.9%比2 .5 % ,P <0 .0 5 )。SSTR2、SSTR4、SSTR5在中高分化结直肠癌表达明显高于低分化结直肠癌表达(P <0 .0 5 ) ;淋巴结转移的结直肠癌SSTR1表达明显高于无淋巴结转移者(72 .2 %比5 4.5 % ,P <0 .0 5 ) ;溃疡型结直肠癌SSTR2表达明显降低(P <0 .0 5 ) ;此外,SSTR1表达率随Dukes分期呈升高趋势,而SSTR3 ,SSTR5则呈下降趋势,但没达到统计学水平。SSTR5种亚型表达均与患者年龄、性别、肿瘤位置、浸润深度、远处转移无明显相关。结论 结直肠癌组织中SSTR1是优势表达亚型,SSTR2、SSTR4、SSTR5亚型表达与癌恶性程度有关,可能在结直肠癌发展过程中发挥重要作用。

人胃癌、癌旁及浅表性胃炎组织生长抑素受体各亚型表达及临床意义

目的研究生长抑素受体(SSTR)各亚型在人胃癌、癌旁及浅表性胃炎组织的表达及其临床意义。方法对40例手术及胃镜活检取得的胃癌及癌旁组织和浅表性胃炎组织标本(其中手术29例,胃镜活检11例)应用免疫组化方法检测组织中SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5的表达。同时检测病理类型及淋巴结转移。结果胃癌组SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5表达较浅表性胃炎及癌旁组明显减少(P<0.01)。浅表性胃炎组及癌旁组间差异无统计学意义(P>0.05)。有淋巴结转移组与无淋巴结转移组SSTR1、SSTR3表达无统计学差异(P=0.270,P=0.125)。无淋巴结转移组较有淋巴结转移组SSTR2、SSTR5表达增高(P<0.05)。中高分化胃癌组SSTR1、SSTR2、SSTR3表达较低分化胃癌表达增高(P<0.05)。结论SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5的减少可能在胃癌的发生发展中发挥一定作用,SSTR2、SSTR5的表达与胃癌有无淋巴结转移有关,SSTR1、SSTR2、SSTR3的表达与胃癌分化程度有关。

结直肠癌组织中生长抑素受体亚型的表达与血管生成的关系

目的探讨生长抑素受体(SSTR)的5种亚型(SSTR1～SSTR5)在结直肠癌组织中的表达与血管生成的关系。方法免疫组化染色法(SP法)检测127例结直肠癌组织中SSTR1～SSTR5、血管内皮生长因子(VEGF)及CD34的表达并计算微血管密度(MVD),分析SSTR各亚型的表达与VEGF表达及MVD的关系。结果结直肠癌组织中SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4及SSTR5表达阳性率分别为64.6%(82/127)、36.2%(46/127)、18.9%(24/127)、18.9%(24/127)及38.6%(49/127),VEGF表达阳性率为63.8%(81/127),MVD为(34.67±16.62)个/HP。SSTR2呈阳性表达的结直肠癌组织中VEGF的表达阳性率(47.8%,22/46)及MVD〔(29.00±15.32)个/HP〕明显低于呈阴性表达者〔72.8%,59/81;(37.90±16.56)个/HP〕,P<0.05;而其他4种亚型的表达与VEGF的表达及MVD无关(P>0.05)。结论结直肠癌组织中SSTR2的阳性表达与血管生成有关。

生长抑素受体特异性激动剂对人肝癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨生长抑素受体特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞HepG2生长的影响。方法分别采用MTS、TUNEL、Transwell法检测生长抑素受体亚型特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、迁移的影响。结果与对照组相比,SSTR2~4亚型特异性激动剂对人肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移没有明显影响,SSTR5亚型特异性激动剂L-817、818在剂量为1μg·mL-1时可以出现较明显的迁移抑制作用,剂量达到5μg·mL-1时,差异有统计学意义（P〈0.05）。其他不同浓度激动剂对HepG2的迁移抑制作用不明显。结论 SSTR亚型特异性激动剂对肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭没有明显的影响,L-817、818在高剂量时可以抑制HepG2的迁移。

靶向生长抑素受体SSTR2的新型白蛋白亲和放射性碘标记分子探针的制备与评价

生长抑素受体亚型2(SSTR2)在神经内分泌肿瘤和多种心血管疾病中高表达,是一个非常有吸引力的靶点.基于铜介导下放射性碘离子与苯硼酸底物发生氧化偶联反应的方法,构建了靶向SSTR2的新型放射性碘标记分子探针[^(131)I]IPBA-TATE和[^(131)I]IBA-TATE(对照),并在体外评价了其理化性质及白蛋白结合特性.在BALB/c小鼠中测定其血液末端清除半衰期,并在正常小鼠和AR42J肿瘤模型小鼠中研究其生物分布特性(以每克组织中摄取注射剂量的百分率(%ID/g)为单位).结果表明:[^(131)I]IPBA-TATE的放射性化学产率为(64.0±4.2)%(n=3),在体外具有良好的稳定性和蛋白亲和性;相比于[^(131)I]IBA-TATE,[^(131)I]IPBA-TATE的血液末端清除半衰期延长了60%,为(25.50±3.35)h.在给药后4 h,[^(131)I]IPBA-TATE在AR42J肿瘤中的摄取为(1.21±0.67)%ID/g,具有较高的瘤/肉比(5.30±2.07).可见[^(131)I]IPBA-TATE是一种基于奥曲肽的新型碘标记白蛋白亲和探针,有望用于SSTR2阳性肿瘤的单光子发射计算机断层显像及放射性核素靶向治疗.

生长抑素及其类似物、生长抑素受体与肿瘤

近些年来，随着人们对生长抑素及其类似物、生长抑素受体的研究的不断深入，生长抑素及其类似物对肿瘤增殖的抑制作用已越来越受到人们的重视。这种抑制作用的产生是通过肿瘤组织表达各种不同亚型的生长抑素受体来介导，各亚型通过不同的传导途径发挥抗肿瘤细胞增殖作用。明确各种肿瘤组织中生长抑素受体亚型的分布与表达，对选择特异性的生长抑素及其类似物，从而提高临床治疗效果具有重要意义。

人类乳腺良恶性病变的SSTR2mRNA表达及其与类固醇受体相关性研究

目的 了解人类良、恶性乳腺病变组织中生长抑素受体亚型 2 (SSTR2 )mRNA的表达情况 ,并探讨其与雌激素受体(ER)、孕激素受体 (PR)的相关性。方法 收集 2 3例乳腺癌、16例乳腺增生病和 9例乳腺纤维腺瘤手术标本 ,采用多相寡核苷酸探针原位杂交法检测SSTR2mRNA表达 ,免疫组化法检测ER、PR状况 ,并用图像分析仪进行SSTR2mRNA相对含量测定。结果 SSTR2mRNA在乳腺癌表达的阳性率 (87% )和相对含量 (0 .4 7)均明显高于乳腺良性病变 (6 4 % ,0 .2 6 ) (P <0 .0 5 )。乳腺良性病变中SSTR2mRNA表达与ER呈正相关 (P <0 .0 5 ) ;在乳腺癌中SSTR2mRNA表达与ER、PR均呈正相关(P <0 .0 5 )。结论 SSTR2mRNA在乳腺良、恶性病变组织中普遍表达 ,恶性高于良性 ;SSTR2mRNA表达与ER、PR具有相关性 ,提示对ER阳性乳腺癌采用抗雌激素与SST类似物联合治疗的可行性。

生长抑素受体SSTR3基因对胃癌细胞生长的影响

目的克隆生长抑素受体SSTR3基因,构建其真核表达载体,并进行转染研究,探讨SSTR3基因在胃癌细胞中的作用。方法从永生化的胃上皮细胞系GES中提取总RNA,经RTPCR扩增出SSTR3基因,并构建真核表达载体pcDNA3.1(+)SSTR3,转染胃癌细胞系MKN45,以MTT法和流式细胞仪观察转染SSTR3基因前后使用奥曲肽对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。结果克隆的SSTR3基因测序正确;构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)SSTR3能高表达SSTR3蛋白;转染SSTR3基因的胃癌细胞系MKN45加用奥曲肽后,出现明显的增殖抑制和凋亡发生。结论SSSTR3基因介导了生长抑素类似物引起的胃癌细胞的增殖抑制和凋亡发生。通过基因转移使原来不表达SSTR3基因的胃癌细胞再表达,为生长抑素和SSTR3基因治疗胃癌提供了又一有效途径。

肝、胆

肝细胞肝癌相关新基因FP248的功能研究；肝细胞癌NY-ESO-1基因／蛋白表达与临床病理特征及肿瘤转移的关系；茶多酚在树鼩肝癌形成中的化学预防作用；维生素K2对人肝癌细胞的抗黏附和抗侵袭作用；褪黑素对小鼠肝癌细胞增殖及p27^kipl、cyclin D1基因表达的影响；体外联合应用NS-398与5-Fu抑制肝癌HepG2细胞生长的研究；生长抑素受体亚型介导入肝癌细胞凋亡的实验研究。

pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达

目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。