生长激素释放肽及其受体的异常表达在肿瘤诊治中的应用

生长激素释放肽(ghrelin)是一种胃源性肽,也被称为饥饿素,可刺激垂体释放生长激素,是一种调节能量代谢的关键多肽,以酰基化生长激素释放肽与无活性的非酰基化生长激素释放肽两种形式存在。酰基化的生长激素释放肽与生长激素促分泌素受体结合,介导多种生理功能。除了刺激食欲增加食物摄入的作用外,生长激素释放肽还可以保护心脏功能,防止肌肉萎缩,增加骨密度,调节应激与焦虑,抑制炎性细胞因子产生,生长激素释放肽及其受体成为多种疾病的潜在治疗靶点。近年来,越来越多的研究证明生长激素释放肽及生长激素促分泌素受体在多种肿瘤中异常表达,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、自噬等功能产生直接作用;也可通过调节炎症反应、雌激素产生和代谢的间接作用,与肿瘤的发生与发展密切相关。生长激素释放肽及其受体异常表达可作为多种肿瘤诊断、疗效预测和预后评估的标志物。靶向生长激素释放肽药物也逐渐被研发,并在抗肿瘤和肿瘤患者支持治疗的临床前研究和临床试验中显示了良好疗效。本文将讨论生长激素释放肽及受体在肿瘤发生发展中的作用及其作为肿瘤标志物与治疗靶点的潜力,并对其相关药物在肿瘤患者中的应用进行综述。

生长激素促分泌素受体(GHS-R)的发现及影响

生长激素的分泌不仅受到GHRH、SRIF的调节 ,还受到GHS R及其配体GHS的作用。本文综述了GHS R的发现背景、结构特点以及生理功能 ,讨论了GHS R促GH分泌的分子机制及其对多种组织器官可能影响 ,同时还探讨了除Ia和Ib亚型外还存在其它GHS R亚型的可能性。

慢性肾脏病5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素、NOD样受体蛋白3水平与血管钙化的相关性

目的探讨慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)-5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素(ghrelin)、NOD样受体蛋白3(NOD-likereceptorprotein3,NLRP3)水平与血管钙化之间相关性。方法选取中国人民解放军海军第九七一医院2018年8月至2021年2月收治的126例CKD-5期维持性血液透析患者为观察对象,根据是否合并血管钙化分为钙化组92例和未钙化组34例。采用酶联免疫吸附测定法检测外周血ghrelin水平,用实时PCR技术检测外周血中NLRP3 mRNA水平,比较不同血管钙化程度患者外周血ghrelin、NLRP3水平,并分析两者与血管钙化指标之间的相关性。结果钙化组患者血磷(P)、钙磷乘积(Ca×P)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)水平相较于未钙化组均明显升高,Ca水平明显下降(P<0.001);与未钙化组比较,钙化组患者NLRP3 mRNA水平、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactiveprotein,hs-CRP)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)炎症因子水平及血管钙化评分明显升高,ghrelin水平明显下降,差异有显著性(P<0.001)。Logistic回归分析结果显示:血Ca、hs-CRP、IL-6、ghrelin、NLRP3水平均是影响CKD患者发生血管钙化的独立危险因素(P<0.05)。血管重度钙化患者外周血Ca、ghrelin低于轻、中度钙化组(P<0.05),而其NLRP3、hs-CRP、IL-6水平显著高于轻、中度钙化组(P<0.05)。相关分析结果显示,CKD患者外周血ghrelin水平与血Ca呈显著正相关(r=0.618,P<0.05),与血管钙化积分呈显著负相关(r=-0.654,P<0.05);NLRP3水平与血Ca呈显著负相关(r=-0.697,P<0.05),与血管钙化积分呈显著正相关(r=0.714,P<0.05)。结论CKD-5期维持性血液透析患者外周血ghrelin、NLRP3水平是影响血管钙化的独立危险因素,ghrelin、NLRP3水平分别与血管钙化程度呈显著负相关和正相关。

生长激素促分泌素受体对小鼠结肠动力的影响和机制

目的:探讨生长激素促分泌素受体及其激动剂GHRP-6对小鼠结肠动力的影响及机制。方法:小鼠随机分组后,分别注射生理盐水、GHRP-6(20、50、100、200μg/kg),用炭末推进实验的方法研究GHRP-6对小鼠结肠推进的影响。小鼠近端结肠环形平滑肌条安置在恒温灌流肌槽中,并用SMUP-E生物信号处理系统记录肌条的自发收缩活动,观察不同浓度的GHRP-6(0.01、0.1、1和10μmol/L)对肌条自发收缩幅度的影响,以及神经阻断剂TTX和GHS-R阻断剂D-lys3-GHRP-6孵育肌条情况下,GHRP-6对肌条自发收缩幅度的影响。结果:GHRP-6注射剂量在50、100、200μg/kg时均能显著提高小鼠的结肠推进(P<0.05)。GHRP-6浓度在0.1、1和10μmol/L时均能显著增加小鼠近端结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度(P<0.05),在TTX和D-lys3-GHRP-6孵育肌条下,Ghrelin不能增加小鼠结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度。结论:GHRP-6可以显著增加小鼠的结肠推进,其机制可能是通过肠肌间神经丛的的GHS-R受体而起作用。

生长激素促分泌素受体-1a基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的表达

目的观察生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨GHSR-1a基因在脂肪细胞分化中的作用。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0-8天),通过形态学观察、油红O染色测定脂肪细胞分化程度及脂滴积聚情况,化学比色法测定脂肪细胞三酰甘油(TG)总量,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脂肪细胞中GHSR-1a基因mRNA的表达水平。采用SPSS12.0软件进行组间t检验。结果3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化前呈梭形的成纤维细胞形态,胞浆内无脂滴;诱导分化后细胞逐渐由梭形变为圆形,胞体变大变圆,胞浆内出现明显的脂滴。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化第4天细胞内TG水平已明显升高,第8天TG水平升高更加明显,与前脂肪细胞相比均有显著统计学意义(Pa<0.01)。同时GHSR-1a基因mRNA低表达于3T3-L1前脂肪细胞和分化第1天的脂肪细胞,随着3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,分化第4天和第8天GHSR-1a基因mRNA的表达逐渐增加,GHSR-1a基因的表达水平除在诱导分化第0-1天和第1-4天内差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点表达水平比较均有统计学意义(Pa<0.05)。结论3T3-L1脂肪细胞分化过程中GHSR-1a基因表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程一致,可能参与了脂肪细胞分化过程。

生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

目的建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板,用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础。

Ghrelin对小鼠空间记忆和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体表达的影响

目的探讨Ghrelin对正常小鼠空间学习记忆能力和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体(GHS-R)表达的影响。方法 8周龄小鼠20只,随机分为实验组和对照组,分别腹腔注射Ghrelin和等量生理盐水,通过水迷宫实验检测小鼠的空间学习记忆能力,免疫组织化学实验检测海马Ghrelin受体GHS-R表达,并通过电子显微镜观察海马突触的超微结构变化。结果水迷宫隐匿平台实验中,第2、3、4天,实验组小鼠的逃避潜伏期与对照组相比明显缩短(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.05),海马CA3和齿状回区GHS-R免疫阳性产物表达明显增强(P<0.05),神经元突触数量明显增加(P<0.05)。结论 Ghrelin可能通过结合GHS-R,增加海马神经元突触数量,显著改善小鼠的空间学习记忆能力。

贵州半细毛羊促生长激素分泌素受体基因SNPs筛查与变异分析

通过研究促生长激素分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部分序列并进行双向测序,对SNPs位点等位基因频率进行估算,利用在线生物信息学软件分析SNPs位点对GHSR基因RNA二级结构的影响。结果发现,在贵州半细毛羊GHSR基因中筛选到2个SNPs:T70G和G229A,均为同义突变,SNPs位点导致GHSR基因mRNA二级结构发生变化。GHSR基因多态性可能影响贵州半细毛羊的生长。

猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定

本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/pGHS-R,酶切鉴定并测序,加myc标签,瞬时转染HEK293T细胞,用Western blotting鉴定该重组质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果显示,本试验成功扩增出pGHS-R编码序列,酶切和测序结果表明pcDNA3.1(+)-myc/pGHS-R构建正确,Western blotting方法证实转染的该质粒能在HEK293T细胞中正确表达目的蛋白。结果表明,本试验成功构建了pGHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。

生长激素释放肽(ghrelin)促生长作用和应用前景

生长激素释放肽(ghrelin)是在大鼠和人胃内发现的,是一种生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)的内源性配体。ghrelin与位于垂体、下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能和能量代谢等作用。本文对ghrelin的结构、分布、生物学功能的近期研究成果及畜牧业上的应用前景进行综述,以期为相关添加剂的研究和开发提供依据。

为什么性早熟的孩子需要用生长激素治疗

如果女孩在8岁前、男孩在9岁前出现性发育征象(第二性征),就是"性早熟",是临床上比较常见的一种内分泌疾病。对于性早熟的孩子,国内外公认的治疗办法是使用促性腺激素释放激素抑制剂(GnRHa)来有效抑制性发育的进程。但有很多孩子还伴有骨龄明显提前,因此,建议促性腺激素释放激素抑制剂治疗同时,联合使用生长激素,来促进身高增长。为什么需要用生长激素呢?这也是很多家长的困惑,让我们一起来看看其中的原因。

促性腺激素释放激素类似物治疗女童特发性性早熟效果观察

女童性早熟是指在8岁之前开始出现第二性征,不仅会身体特征产生一定变化,还会诱发不良心理行为问题,影响儿童正常生长和发育[1]。目前临床治疗该疾病多选择药物治疗,基因重组人生长激素(rhGH)是临床常用药物,和人体生长激素有同等的作用,对骨骼、内脏和全身生长均有一定改善作用,在人体生长发育中起着关键性作用[2]。但该药物不可长期或大量使用,有一定禁忌证,且属于外用激素,使用期间可产生一定不良反应。促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)有调节性激素分泌和合成的作用,有抑制性腺发育作用,从而起到治疗性早熟的作用[3]。基于此,本研究旨在探讨GnRHa治疗女童特发性性早熟的临床效果。现报告如下。

耳穴贴压对女性更年期症状及血清内分泌激素的影响

目的:观察耳穴贴压法对更年期女性症状及血清内分泌激素等相关生化指标的影响。方法:选择2001-02/2003-09山东中医药大学附属医院针灸科门诊及病房的女性更年期患者69例,随机分为耳穴贴压组54例和常规治疗组15例,两组患者年龄、病程、辨证分型经χ2检验无显著性差异(P>0.05)。耳穴贴压组:①治则:补肾,调理脏腑,平衡阴阳。②取穴:主穴:肾、内生殖器、内分泌、皮质下。配穴:神门、交感、对屏尖,证属阴虚型加肝、心,阳虚型加脾。③操作:将王不留行籽对准穴位贴紧,患者自行按压所贴耳穴3～5次/d,每次每穴按压时间应不少于20s。④疗程:左右耳交替贴压,3d换1次,2次/周,中间休息1d,连压4周为1个疗程。常规治疗组:①谷维素10mg/次,3次/d,口服,连服4周为1个疗程。两组以“Kupperman指数”进行治疗前后症状改善率比较,分显效、有效、无效。耳穴贴压组还进行治疗前后血清内分泌激素、促卵泡生长激素、雌二醇的测定。结果:①Kupperman指数比计算值:耳穴贴压组显效率40.74%(23/54),有效率100%(54/54);常规治疗组显效率6.67%(1/15),有效率73.33%(4/15),P<0.05。②Kupperman指数:耳穴贴压组治疗前(30.8±5.5)分,治疗后(11.8±4.3)分;常规治疗组治疗前(31.2±9.7)分,治疗后(20.7±6.9)分。

生长激素释放肽Ghrelin的研究进展

生长激素释放肽(Ghrelin)是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999年由日本国立循环器病中心Kojima等人从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定。Ghrelin系由28个氨基酸构成的多肽,能够和GHS-R结合而刺激生长激素GH的分泌。就目前的研究报道来看,Ghrelin除调节生长激素分泌外,还能增强食欲,调节能量代谢;促进胃酸分泌,增进胃肠功能, Ghrelin可通过其相关机制(不依赖于GH),调节心血管功能;并对肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应。

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦促生长素mRNA、生长激素促分泌素受体mRNA表达的影响

目的:观察电针"足三里"等穴对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃肠运动和促生长素(ghrelin)mRNA、生长激素促分泌素受体(GHSR)mRNA表达的影响,探讨电针治疗DGP的可能机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、电针穴位组、电针非穴组、胃复安对照组,每组12只。采用单次腹腔注射2%链脲佐菌素配合高糖高脂饮食建立DGP大鼠模型。电针穴位组取大鼠"足三里""梁门""三阴交"穴;电针非穴组取"足三里""梁门""三阴交"穴位对照点;胃复安对照组予胃复安药液(1 mL/100g)灌胃。用血糖仪测血糖,尿糖试纸测尿糖。治疗结束后以酚红为标记物,观察大鼠胃排空率及小肠推进率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应法检测大鼠胃窦部ghrelin mRNA、GHSR mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型组胃排空率及小肠推进率明显降低,ghrelin mRNA、GHSR mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,电针穴位组胃排空率及小肠推进率明显升高,ghrelin mRNA、GHSR mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。与电针非穴位组比较,电针穴位组胃排空率及小肠推进率明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:电针可促进DGP大鼠胃肠运动,其作用机制可能与上调ghrelin mRNA、GHSR mRNA在胃窦部的表达相关。

小鼠生长激素促分泌素受体真核表达载体的构建及表达鉴定

目的构建小鼠生长激素促分泌素受体(GHS-R)真核表达系统,并观察其在瞬时转染的COS-7细胞系中的表达情况。方法以小鼠基因组为模板,通过拼接PCR技术(SOE-PCR)克隆出GHS-R的编码序列(CDS),插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组真核表达质粒pcDNA3-GHS-R,酶切鉴定并测序,瞬时转染COS-7细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果成功扩增了小鼠GHS-R编码序列(CDS),酶切和测序证明pcDNA3-GHS-R构建正确,Western Blot方法证实转染的该质粒能在COS-7细胞中正确表达目的蛋白。结论成功构建了小鼠GHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。

Ghrelin的内分泌活性

Ghrelin是一种新发现的胃激素,主要由胃底的X/A样细胞分泌产生,是生长激素促分泌剂受体的内源性配体,可刺激生长激素释放。它也与下丘脑—垂体激素的分泌有相互作用,对性腺、肾上腺、甲状腺激素的分泌有影响。它可抑制脂肪的形成,影响糖代谢,是一种值得深入研究的激素。

生长激素促分泌素参与大鼠小肠平滑肌运动的双相调节

目的探讨生长激素促分泌素（ghrelin）对大鼠小肠平滑肌舒缩活动的影响及其机制。方法制备迷走神经切断大鼠模型，腹腔注射不同浓度ghrelin（0、20、40和80μg／kg），每种浓度6只大鼠，观察其对小肠转运的影响。体外实验观察在50nmol／L卡巴胆碱（Cch）存在时，不同浓度的ghrelin（0．01、0．1、0．5、1．0μmol／L）对肌条舒缩活动的影响，免疫荧光方法检测ghrelin受体（GHS．R1a）在小肠肌层中不同类型细胞的分布。结果0、20、40和80Ixg／kg4种浓度的ghrelin能够剂量依赖性地增加小肠转运率，分别为（25．4±1．0）％、（33．7±1．9）％、（39．3±2．4）％和（44．7±2．1）％，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。体外应用0．01、0．1、0．5和1．0μmol／L4种浓度的ghrelin能剂量依赖增强Cch引起的肌条收缩[（67．0±2．4）％、（149．5±3．3）％、（187．1±4．7）％、（213．5±3．4）％]和舒张[（35．3±1．1）％、（62．9±3．8）％、（79．6±2．7）％、（94．6±2．2）％]效应，组问比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫荧光检测显示，ghrelin受体主要分布在肠内肌层中的神经细胞膜上，平滑肌细胞膜上无分布。结论ghrelin可通过直接作用于小肠肌层神经丛中的神经细胞而增强胆碱能神经递质引起的小肠平滑肌的舒缩活动。

男性内分泌性性功能减退症的临床研究

男性内分泌性性功能减退症(男性减症)占我科1985～1988年收治的男性生殖内分泌患者中的88.5％。这是第一次向国内提出此病不少见,研究其诊断及治疗不但是解决患者青春发育、性功能及生育能力的问题,也是关系到计划生育及安定家庭和社会的主要课题。本课题通过前瞻性观察,总结了最常见的高促性腺激素性(GTH)男性减症(克兰菲特综合征,KS)及特发性低GTH男性减症(IHH)

枳术丸对功能性消化不良大鼠胃平滑肌收缩反应及胃促生长素受体蛋白表达的影响

目的研究枳术丸对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠的治疗作用机制。方法雄性10日龄SD幼鼠30只,随机分为正常组(10只)和造模组(20只)。采用0.1%碘乙酰胺(iodoacetamide,IA)灌胃联合夹尾刺激法诱导大鼠FD模型。大鼠8周龄时进行模型评定,将造模成功的大鼠随机分为模型组(10只)和枳术丸组(10只)。正常组与模型组予以0.9%氯化钠溶液灌胃,枳术丸组给予枳术丸煎剂(2 mL/100 g)灌胃,持续7日。采用Power Lab生物信号采集系统记录离体大鼠胃体纵行平滑肌条的收缩活动,采用蛋白免疫印记法(Western blot)和免疫组织化学(immunohistochernistry,IHC)技术检测生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)在FD大鼠胃体的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃肌条收缩平均频率和振幅变化率明显降低(P<0.05),Western blot和IHC结果显示模型组GHSR蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,枳术丸组大鼠胃肌条收缩平均频率和振幅变化率增高(P<0.05),Western blot和IHC结果显示枳术丸组GHSR蛋白表达均升高(P<0.01)。结论枳术丸对IA灌胃联合夹尾刺激法诱导的FD大鼠具有促进胃动力作用,其机制可能与上调GHSR蛋白表达有关。