生长激素释放肽及其受体的异常表达在肿瘤诊治中的应用

生长激素释放肽(ghrelin)是一种胃源性肽,也被称为饥饿素,可刺激垂体释放生长激素,是一种调节能量代谢的关键多肽,以酰基化生长激素释放肽与无活性的非酰基化生长激素释放肽两种形式存在。酰基化的生长激素释放肽与生长激素促分泌素受体结合,介导多种生理功能。除了刺激食欲增加食物摄入的作用外,生长激素释放肽还可以保护心脏功能,防止肌肉萎缩,增加骨密度,调节应激与焦虑,抑制炎性细胞因子产生,生长激素释放肽及其受体成为多种疾病的潜在治疗靶点。近年来,越来越多的研究证明生长激素释放肽及生长激素促分泌素受体在多种肿瘤中异常表达,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、自噬等功能产生直接作用;也可通过调节炎症反应、雌激素产生和代谢的间接作用,与肿瘤的发生与发展密切相关。生长激素释放肽及其受体异常表达可作为多种肿瘤诊断、疗效预测和预后评估的标志物。靶向生长激素释放肽药物也逐渐被研发,并在抗肿瘤和肿瘤患者支持治疗的临床前研究和临床试验中显示了良好疗效。本文将讨论生长激素释放肽及受体在肿瘤发生发展中的作用及其作为肿瘤标志物与治疗靶点的潜力,并对其相关药物在肿瘤患者中的应用进行综述。

生长激素促分泌素受体(GHS-R)的发现及影响

生长激素的分泌不仅受到GHRH、SRIF的调节 ,还受到GHS R及其配体GHS的作用。本文综述了GHS R的发现背景、结构特点以及生理功能 ,讨论了GHS R促GH分泌的分子机制及其对多种组织器官可能影响 ,同时还探讨了除Ia和Ib亚型外还存在其它GHS R亚型的可能性。

生长激素促分泌素受体对小鼠结肠动力的影响和机制

目的:探讨生长激素促分泌素受体及其激动剂GHRP-6对小鼠结肠动力的影响及机制。方法:小鼠随机分组后,分别注射生理盐水、GHRP-6(20、50、100、200μg/kg),用炭末推进实验的方法研究GHRP-6对小鼠结肠推进的影响。小鼠近端结肠环形平滑肌条安置在恒温灌流肌槽中,并用SMUP-E生物信号处理系统记录肌条的自发收缩活动,观察不同浓度的GHRP-6(0.01、0.1、1和10μmol/L)对肌条自发收缩幅度的影响,以及神经阻断剂TTX和GHS-R阻断剂D-lys3-GHRP-6孵育肌条情况下,GHRP-6对肌条自发收缩幅度的影响。结果:GHRP-6注射剂量在50、100、200μg/kg时均能显著提高小鼠的结肠推进(P<0.05)。GHRP-6浓度在0.1、1和10μmol/L时均能显著增加小鼠近端结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度(P<0.05),在TTX和D-lys3-GHRP-6孵育肌条下,Ghrelin不能增加小鼠结肠环形平滑肌条的自发收缩幅度。结论:GHRP-6可以显著增加小鼠的结肠推进,其机制可能是通过肠肌间神经丛的的GHS-R受体而起作用。

生长激素促分泌素受体-1a基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的表达

目的观察生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨GHSR-1a基因在脂肪细胞分化中的作用。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0-8天),通过形态学观察、油红O染色测定脂肪细胞分化程度及脂滴积聚情况,化学比色法测定脂肪细胞三酰甘油(TG)总量,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脂肪细胞中GHSR-1a基因mRNA的表达水平。采用SPSS12.0软件进行组间t检验。结果3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化前呈梭形的成纤维细胞形态,胞浆内无脂滴;诱导分化后细胞逐渐由梭形变为圆形,胞体变大变圆,胞浆内出现明显的脂滴。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化第4天细胞内TG水平已明显升高,第8天TG水平升高更加明显,与前脂肪细胞相比均有显著统计学意义(Pa<0.01)。同时GHSR-1a基因mRNA低表达于3T3-L1前脂肪细胞和分化第1天的脂肪细胞,随着3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,分化第4天和第8天GHSR-1a基因mRNA的表达逐渐增加,GHSR-1a基因的表达水平除在诱导分化第0-1天和第1-4天内差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点表达水平比较均有统计学意义(Pa<0.05)。结论3T3-L1脂肪细胞分化过程中GHSR-1a基因表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程一致,可能参与了脂肪细胞分化过程。

生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

目的建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板,用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础。

Ghrelin对小鼠空间记忆和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体表达的影响

目的探讨Ghrelin对正常小鼠空间学习记忆能力和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体(GHS-R)表达的影响。方法 8周龄小鼠20只,随机分为实验组和对照组,分别腹腔注射Ghrelin和等量生理盐水,通过水迷宫实验检测小鼠的空间学习记忆能力,免疫组织化学实验检测海马Ghrelin受体GHS-R表达,并通过电子显微镜观察海马突触的超微结构变化。结果水迷宫隐匿平台实验中,第2、3、4天,实验组小鼠的逃避潜伏期与对照组相比明显缩短(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.05),海马CA3和齿状回区GHS-R免疫阳性产物表达明显增强(P<0.05),神经元突触数量明显增加(P<0.05)。结论 Ghrelin可能通过结合GHS-R,增加海马神经元突触数量,显著改善小鼠的空间学习记忆能力。

贵州半细毛羊促生长激素分泌素受体基因SNPs筛查与变异分析

通过研究促生长激素分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部分序列并进行双向测序,对SNPs位点等位基因频率进行估算,利用在线生物信息学软件分析SNPs位点对GHSR基因RNA二级结构的影响。结果发现,在贵州半细毛羊GHSR基因中筛选到2个SNPs:T70G和G229A,均为同义突变,SNPs位点导致GHSR基因mRNA二级结构发生变化。GHSR基因多态性可能影响贵州半细毛羊的生长。

猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定

本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/pGHS-R,酶切鉴定并测序,加myc标签,瞬时转染HEK293T细胞,用Western blotting鉴定该重组质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果显示,本试验成功扩增出pGHS-R编码序列,酶切和测序结果表明pcDNA3.1(+)-myc/pGHS-R构建正确,Western blotting方法证实转染的该质粒能在HEK293T细胞中正确表达目的蛋白。结果表明,本试验成功构建了pGHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。

慢性肾脏病5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素、NOD样受体蛋白3水平与血管钙化的相关性

目的探讨慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)-5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素(ghrelin)、NOD样受体蛋白3(NOD-likereceptorprotein3,NLRP3)水平与血管钙化之间相关性。方法选取中国人民解放军海军第九七一医院2018年8月至2021年2月收治的126例CKD-5期维持性血液透析患者为观察对象,根据是否合并血管钙化分为钙化组92例和未钙化组34例。采用酶联免疫吸附测定法检测外周血ghrelin水平,用实时PCR技术检测外周血中NLRP3 mRNA水平,比较不同血管钙化程度患者外周血ghrelin、NLRP3水平,并分析两者与血管钙化指标之间的相关性。结果钙化组患者血磷(P)、钙磷乘积(Ca×P)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)水平相较于未钙化组均明显升高,Ca水平明显下降(P<0.001);与未钙化组比较,钙化组患者NLRP3 mRNA水平、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactiveprotein,hs-CRP)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)炎症因子水平及血管钙化评分明显升高,ghrelin水平明显下降,差异有显著性(P<0.001)。Logistic回归分析结果显示:血Ca、hs-CRP、IL-6、ghrelin、NLRP3水平均是影响CKD患者发生血管钙化的独立危险因素(P<0.05)。血管重度钙化患者外周血Ca、ghrelin低于轻、中度钙化组(P<0.05),而其NLRP3、hs-CRP、IL-6水平显著高于轻、中度钙化组(P<0.05)。相关分析结果显示,CKD患者外周血ghrelin水平与血Ca呈显著正相关(r=0.618,P<0.05),与血管钙化积分呈显著负相关(r=-0.654,P<0.05);NLRP3水平与血Ca呈显著负相关(r=-0.697,P<0.05),与血管钙化积分呈显著正相关(r=0.714,P<0.05)。结论CKD-5期维持性血液透析患者外周血ghrelin、NLRP3水平是影响血管钙化的独立危险因素,ghrelin、NLRP3水平分别与血管钙化程度呈显著负相关和正相关。

建鲤生长激素促泌素受体1基因的特性及其与增重相关SNP位点的筛选

GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio var.jian)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a'和1b'),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录变体不同。jlGHS-R1s的阅读框被1个内含子分隔,该内含子位于第260个氨基酸密码子的第1和第2个碱基之间,1a和1b的内含子长度分别为676 bp和885 bp。使用分段PCR在建鲤群体的1a和1b基因上共找到32个SNP位点,构建PCR-RFLP法对其中9个SNPs进行基因型检测,结果发现各种基因型在322尾建鲤中均有出现,但存在着明显的偏分布。与增重的相关分析表明,位点1a-I_C386T和1b-E1_G159T与雌雄鱼鱼种和成鱼阶段增重分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,CC型和GG型个体增重最快,另外有5个位点则与其中的某阶段或者某性别的增重相关,为了确定上述所得标记的适用性,选取其中4个标记在另外7个家系共610尾鱼中检测,结果 C386T和G159T还是与增重呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,可用于建鲤分子育种。

功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠生长激素促释放激素受体表达的变化

目的:观察功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体(GHSR)表达的变化,探讨发病机制。方法:高乳糖饲料喂养及小平台站立制备功能性腹泻脾虚证大鼠模型,观察大鼠的一般状态变化及粪便情况。免疫组织化学法,蛋白质印迹(Western blotting)和荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体的表达情况。结果:功能性腹泻脾虚的模型大鼠出现精神乏力、消瘦及便溏等现象;免疫组织化学结果显示模型组生长激素促释放激素受体的蛋白表达较正常组表达降低;蛋白质印迹结果显示模型组生长激素促释放激素受体的蛋白表达较正常组表达有差异且有统计学意义(P<0.01);荧光定量PCR结果显示模型组生长激素促释放激素受体mRNA的表达较正常组表达有差异且有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建功能性腹泻脾虚证大鼠模型。功能性腹泻脾虚证大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体表达下降。推断生长激素促释放激素受体可能与功能性腹泻脾虚证有相关性。

血清促生长激素释放激素受体配体与多囊卵巢综合征的相关性分析

目的:探讨血清促生长激素释放激素受体配体(Ghrelin)水平在多囊卵巢综合征(PCOS)中的意义。方法:选择我院PCOS患者48例作为研究对象(PCOS组),同期选择非PCOS患者40例作为对照(对照组),根据体重指数(IBM)将PCOS组、对照组患者分别分为肥胖与非肥胖,根据稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)将PCOS组及全部患者分为胰岛素抵抗(IR)与非IR。测定血清Ghrelin水平及内分泌代谢指标。结果:血清Ghrelin水平PCOS组低于对照组(P<0.05);肥胖组低于非肥胖组(P<0.05);非肥胖组低于非肥胖对照组(P<0.05);IR组低于非IR组(P<0.05)。血清Ghrelin水平与BMI、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR呈负相关(P<0.01,P<0.05,P<0.05),与胰岛素敏感指数(ISI)呈正相关(P<0.O5)。结论:PCOS患者存在血清低Ghrelin水平,Ghrelin水平与BMI、IR程度呈负相关。Ghrelin可能与PCOS的肥胖发生有相关性。血清Ghrelin检测可能作为预测PCOS患者IR的一个指标。

血清促生长激素释放激素受体配体(Ghrelin)水平与多囊卵巢综合征的相关性分析

目的通过检测PCOS患者血清Ghrelin水平,分析血清Ghrelin水平与人体测量学,内分泌激素,及胰岛素抵抗指标等指标的相关性,同时探讨PCOS患者测定血清Ghrelin水平的意义。方法选择97例PCOS患者,120名健康女性为对照组,测定血清Ghrelin水平、内分泌激素、血糖、血脂、胰岛素、身高、体重、腰臀围,采用统计学软件比较2组的差异。结果 PCOS组与对照组比较,PCOS组血清Ghreli水平低于正常对照组(P=0.039),有统计学差别,FSH、PRL、E2、FBG、CHO、TG、LDL等无统计学意义。但PCOS组WHR、LH和T水平明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),BMI、HOMA-IR也高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。PCOS肥胖组Ghrelin水平低于PCOS非肥胖组(P<0.05);对照肥胖组低于对照非肥胖组(P<0.05)。而PCOS组中IR组血清Ghrelin水平低于非IR组(P<0.05),对照组中IR组血清Ghrelin水平显著低于IR组(P<0.01)。结论 PCOSPCOS患者血清Ghrelin水平较低,且Chrelin水平与胰岛素抵抗程度呈负相关,与脂代谢水平和性激素无相关性。

建鲤生长激素促泌素受体2(GHSR2s)基因序列、转录变体和GHSRs表达分析

应用RT-PCR及PCR分离到鲤鱼2个jlGHSR2s基因,jlGHSR2a和2b,分别编码366,367个氨基酸,相似性高达98%,和金鱼、斑马鱼GHSR2的相似性高达95%。jlGHSR2s基因的内含子位于起始密码子793 bp后,2a和2b内含子的长度和序列均存在明显差异。试验首次发现了jlGHSR2a的转录变体(Variant)jlGHSR2a',由选择性剪切靠近内含子的57 bp外显子1和保留靠近外显子2的28 bp内含子构成,编码350个氨基酸,缺失最后2个跨膜区,剪切序列两端碱基为CT-AC。荧光定量RT-PCR结果表明,jlGHSRs在脑和精巢表达量最高,1s在检测的组织均有表达,但2s在其他组织表达量很少。jlGHSRs的转录变体1s'和2a'的表达量与1s和2s有一定的正相关性,但1s/1s'在各组织不一致,比值最高出现在肝脏,其次是肌肉、肠和脑,精巢和卵巢最低。生长对脑中jlGHS-R1s的表达量没有显著影响,但生长慢的个体肝和肠中jlGHSR1s的表达量比生长快的高,1s/1s'也有明显升高;肌肉中则相反,1s/1s'在雄鱼肌肉中减小明显。饥饿使雌鱼脑、雌鱼前肠和雌雄鱼后肠jlGHSR1s的表达量显著降低,对其余组织中的表达则不显著。生长快慢或饥饿对脑中jlGHSR2s的表达量均没有显著影响。结果表明,jlGHSR1s的表达量与生长有明显的相关性。

生长激素促泌素受体在心血管疾病中的研究进展

生长激素促泌素受体和内源性配体或人工合成的生长激素促泌素结合后,不仅能有效地刺激生长激素分泌、促进摄食、维持能量代谢正平衡、调节胰岛素分泌,还能减轻炎症反应、改善心源性恶液质、降低动脉压、增强心肌收缩力、提高冠状动脉血流灌注、抗心肌细胞和血管内皮细胞凋亡,在心血管疾病的病理过程中起重要作用。

原发性肝癌组织生长激素受体的表达

为探讨重组人生长激素 (rhGH)在肝癌患者中的适用问题 ,采用放射配体法对 32例原发性肝癌 (HCC)组织进行了生长激素受体 (GHR)的检测。结果在 2 8例HCC组织检测到GHR ,GHR受体结合容量 (RT)为 (18 430 0± 4 16 33)fmol/mg蛋白 ,平衡解离常数 (Kd)为 (0 6 432± 0 196 1)nmol/L ,与正常肝组织相比 ,其RT降低 (P <0 0 5 ) ,Kd无显著性改变 (P >0 0 5 ) ;HCC组织GHR的结合容量与肿瘤大小呈负相关 ,而与肿瘤分化程度、患者是否合并肝硬化无明显相关 ;有 4例肝癌组织未检测到GHR存在。研究提示 :大多数原发性肝癌组织仍表达低水平GHR ,在其功能未明的情况下 ,rhGH在肝癌患者中的使用应慎重。

生长激素释放肽(ghrelin)促生长作用和应用前景

生长激素释放肽(ghrelin)是在大鼠和人胃内发现的,是一种生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)的内源性配体。ghrelin与位于垂体、下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能和能量代谢等作用。本文对ghrelin的结构、分布、生物学功能的近期研究成果及畜牧业上的应用前景进行综述,以期为相关添加剂的研究和开发提供依据。

生长激素受体拮抗剂治疗垂体生长激素腺瘤的研究进展

生长激素受体拮抗剂培维索孟是一种治疗生长激素腺瘤的新药,其通过阻止生长激素与生长激素受体结合,阻止后续的信号转导过程,降低血浆胰岛素样生长因子1水平,以达到治疗目的。其与生长抑素类似物联合使用可进一步提高疗效并减少不良反应。

生长激素受体外显子3缺失多态性在矮小儿童与正常儿童中的分布比较

目的:研究生长激素受体(GHR)基因外显子3缺失多态性在矮小症儿童与正常儿童的人群分布,并比较二者有无差异。方法:选择矮小症儿童143例为试验组,包括生长激素缺乏症(GHD)58例,小于胎龄儿(SGA)40例,特发性矮小症(ISS)45例。采用多重聚合酶链反应(PCR)的方法对GHR外显子3缺失进行多态性分析,与同期健康儿童170例(对照组)对比。结果:试验组GHR外显子3缺失多态性fl/fl、fl/d3、d3/d33种基因型分别为71、58、14例,对照组为110、49、11例,前者fl/d3和d3/d3的比例明显高于后者,2组多态性分布差异有统计学意义(P<0.05)。试验组d3等位基因频率0.301(86/286)高于对照组的0.209(71/340),差异有统计学意义(P<0.05)。不同地区正常人群中3种基因型及等位基因频率分布对比差异有统计学意义(P<0.05),而SGA和GHD患者间分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:GHR外显子3多态性在矮小症儿童与正常儿童中的分布存在差异,推测可能与矮小症发病有一定关系。

GH与EGFR受体后信号交联在GH促进青春期大鼠生长板软骨细胞增殖中的作用

目的:观察促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)处理后青春期大鼠生长板体外培养的软骨细胞内是否存在生长激素(GH)与表皮生长因子受体(EGFR)之间的信号交联(cross-talk)。方法:3周龄雌性SD大鼠开始注射GnRHa至7周龄;随后分离培养5-8只大鼠胫骨生长板软骨细胞,在GH作用前分别加入JAK2阻断剂AG490(1nmol/L、10nmol/L和100nmol/L)、EGFR酪氨酸激酶阻断剂AG1478(0.1nmol/L、1nmol/L和10nmol/L)和表皮生长因子(EGF)中和抗体(0.1mg/L、1mg/L和10mg/L);采用四氮甲基唑蓝(MTT)以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA),观察不同阻断剂对软骨细胞增殖的影响;采用Western blotting检测软骨细胞p-ERK1/2及p-EGFR的表达。结果:GH作用后具有浓度依赖性地促进软骨细胞增殖和增加p-ERK1/2及p-EGFR水平的作用,100μg/L时作用最为明显。AG490及AG1478几乎能完全抑制GH促进软骨细胞增殖和激活ERK1/2及EGFR的作用。而EGF中和抗体仅能部分抑制GH的作用。结论:GH通过激活JAK2而激活其下游的ERK通路,实现其直接促细胞增殖效应。GH亦能通过激活EGFR及其信号转导通路促进细胞增殖效应,表明GH通路和EGF通路间存在相互作用。