生长激素促分泌素受体-1a基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的表达

目的观察生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨GHSR-1a基因在脂肪细胞分化中的作用。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0-8天),通过形态学观察、油红O染色测定脂肪细胞分化程度及脂滴积聚情况,化学比色法测定脂肪细胞三酰甘油(TG)总量,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脂肪细胞中GHSR-1a基因mRNA的表达水平。采用SPSS12.0软件进行组间t检验。结果3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化前呈梭形的成纤维细胞形态,胞浆内无脂滴;诱导分化后细胞逐渐由梭形变为圆形,胞体变大变圆,胞浆内出现明显的脂滴。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化第4天细胞内TG水平已明显升高,第8天TG水平升高更加明显,与前脂肪细胞相比均有显著统计学意义(Pa<0.01)。同时GHSR-1a基因mRNA低表达于3T3-L1前脂肪细胞和分化第1天的脂肪细胞,随着3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,分化第4天和第8天GHSR-1a基因mRNA的表达逐渐增加,GHSR-1a基因的表达水平除在诱导分化第0-1天和第1-4天内差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点表达水平比较均有统计学意义(Pa<0.05)。结论3T3-L1脂肪细胞分化过程中GHSR-1a基因表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程一致,可能参与了脂肪细胞分化过程。

生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

目的建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板,用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础。

贵州半细毛羊促生长激素分泌素受体基因SNPs筛查与变异分析

通过研究促生长激素分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部分序列并进行双向测序,对SNPs位点等位基因频率进行估算,利用在线生物信息学软件分析SNPs位点对GHSR基因RNA二级结构的影响。结果发现,在贵州半细毛羊GHSR基因中筛选到2个SNPs:T70G和G229A,均为同义突变,SNPs位点导致GHSR基因mRNA二级结构发生变化。GHSR基因多态性可能影响贵州半细毛羊的生长。

特发性矮小生长激素受体外显子3基因多态性与生长激素轴的关系

目的探讨生长激素受体(GHR)外显子3基因型与特发性矮小(ISS)患者生长激素-胰岛素样生长因子-胰岛素样生长因子结合蛋白(GH-IGFs-IGFBPs)轴的关系。方法选取108例ISS儿童,提取外周血DNA并采用多重PCR法进行GHR外显子3基因分型,根据基因型结果分为GHRfl组和GHRd3组。测量2组身高、体质量,并计算体质指数(BMI)及BMI标准差计分(SDS);测定空腹胰岛素样生长因子(IGF)-1、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-3,计算IGF-1 SDS、IGFBP3 SDS;同时进行生长激素激发试验,测定血清GH峰值。108例中选取55例自愿接受重组人生长激素[rh GH,0.15 IU/(kg·d)]治疗3个月,分析基因型与rh GH治疗后IGF-1水平的关系。结果108例ISS中GHRfl 63例,GHRd3 45例。2组间BMI、IGF-1、IGFBP3、GH峰值以及IGF-1 SDS、IGFBP3 SDS差异均无统计学意义(均P>0.05);多元逐步回归分析示年龄、IGFBP3、lg(BMI)、lg(GH峰值)是lg IGF-1的影响因素(均P<0.05);55例接受rh GH治疗ISS中GHRd3组(34例)IGF-1和IGF-1 SDS治疗前后差值(△IGF-1,△IGF-1 SDS)高于GHRfl组(21例)。结论 ISS儿童GHR外显子3基因多态性可能与IGF-1及IGFBP3水平无关,与GH敏感性有关。

促肾上腺皮质激素释放激素受体1基因多态与抗抑郁药物疗效的关联研究

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素受体1(corticotropin-releasing hormone receptor1,CRHR1)基因多态性与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(Selective Serotonin Reuptake Inhibitors,SSRIs)、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(Serotonin and Norepinephrine Reuptake Inhibitors,SNRIs)抗抑郁疗效差异的相关性。方法对符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,Fourth Edi-tion,DSM-Ⅳ)抑郁症诊断标准的271例抑郁症患者予以单一新型抗抑郁药(SSRIs或SNRIs)常规剂量治疗至少6周,以治疗前后17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)总分减分率作为评估疗效的指标。采用TaqMan探针法检测CRHR1基因上4个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)的基因型,比较有效组(HAMD-17减分率≥50%)和无效组(HAMD-17减分率<50%)之间4个位点基因型及多位点组成单倍型的不同。结果治疗4周末:CRHR1基因rs17689966位点A等位基因及AA基因型携带者在治疗无效组的频率均显著高于有效组(88.0%vs.77.0%,P=0.004;75.8%vs.59.0%,P=0.004)。有3种单倍型在有效组和无效组之间的分布差异有统计学意义,分别是T-A/T-G(rs242924-rs17689966:86.6%vs.74.7%,P=0.002;8.1%vs.15.5%,P=0.018),G-T-G(rs4458044-rs rs242924-rs17689966:8.2%vs.15.5%,P=0.019)。治疗6周末:CRHR1基因4个SNPs的基因型、等位基因频率及单倍型分析在不同疗效患者组间分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论CRHR1基因多态性可能与SSRIs、SNRIs类药物的早期疗效相关。

促甲状腺激素受体与TTF-1、Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)与正常甲状腺组织中的表达及意义。方法收集2018年9月至2019年6月在某院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的甲状腺组织,包括单纯PTC 16例、HT合并PTC 24例,NG 32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将术中获得的甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR、TTF-1、Pax-8的免疫组织化学染色,显微镜下观察染色结果。采用χ^2检验进行多组间率的比较,差别有统计学意义时采用χ^2分割做两两比较。结果1)TSHR、TTF-1在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别均有统计学意义(P<0.001,P=0.004),Pax-8在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别无统计学意义(P=0.642)。2)调整检验水准α′=0.008,进一步两两比较发现:TSHR在PTC组的强阳性表达低于在NG组与癌旁正常组织(P<0.001,P=0.002),在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.001),TTF-1在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.002);其他组两两比较均无统计学意义(P>0.008)。3)在全部PTC组织中,TSHR、TTF-1的阳性表达与性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移等均无关;Pax-8的阳性表达在有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P=0.030),与性别、年龄、肿瘤直径无关。结论TSHR与TTF-1在PTC中的强阳性表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无差别。Pax-8在PTC组织中的低表达易出现淋巴结转移。

基质细胞衍生因子-1α及相应受体血小板源性因子受体-4在冠状动脉疾病中表达及其临床意义

目的:检测基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)及相应受体血小板源性因子受体-4(CXCR4)在冠状动脉疾病中的表达水平,探讨SDF-1α在冠状动脉疾病中的作用及其临床应用价值。方法:分别采用酶联免疫吸附法和流式细胞法(FCM)检测42例冠心病患者[13例急性心肌梗死(急性心肌梗死组),14例不稳定性心绞痛(不稳定性心绞痛组),15例稳定性心绞痛(稳定性心绞痛组)]及16例正常健康对照者(正常对照组)血浆SDF-1α和其相应受体CXCR4表达水平。同时,分离不稳定性心绞痛组患者外周血单个核细胞进行体外研究,用酶联免疫吸附法测定SDF-1α(终浓度,500ng/ml)干预前后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达水平。结果:SDF-1α表达在稳定性心绞痛组有升高趋势,但与正常对照组相比较,差异无显著性(P>0.05);在不稳定性心绞痛组和急性心肌梗死组SDF-1α表达明显降低(P<0.05)。其相应受体CXCR4在稳定性心绞痛组表达有升高趋势,但与正常对照组相比较,差异无显著性(P>0.05);而在不稳定性心绞痛组和急性心肌梗死组CXCR4表达明显升高(P<0.01)。同时,体外研究结果显示,肿瘤坏死因子-α和单核细胞趋化蛋白-1在SDF-1α干预后的表达较干预前明显降低(P<0.01);而组织型金属蛋白酶抑制剂-1?

不同断奶日龄对仔猪脾脏生长相关基因表达的影响

为研究不同断奶日龄对仔猪脾脏中生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)、胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)和胰岛素样生长因子-1受体(insulin like growth factor-1receptor,IGF-1R)基因表达的影响,试验选取体重相近、健康的杜×长×大仔猪24头,随机分为4组(14、21、28和35日龄断奶组),每个试验组6个重复,每个重复1头仔猪,至42日龄时全部宰杀取样,用RT-PCR方法检测脾脏中上述基因的相对表达水平。结果表明,14和21日龄断奶组仔猪脾脏GHR mRNA的相对表达量显著高于35日龄断奶组(P<0.05);不同断奶日龄组仔猪脾脏中的IGF-1mRNA的相对表达量均无显著性变化(P>0.05);35日龄断奶组仔猪脾脏中IGF-1R mRNA的相对表达量显著高于28日龄断奶组(P<0.05)。结果提示,不同断奶日龄对仔猪脾脏相关生长基因表达影响的模式不同;不同断奶日龄脾脏IGF-1R mRNA的表达可能受脾脏自身局部IGF-1的调控。

TRPV1参与针和灸不同刺激方式对小鼠ghrelin和GHSR-1α的影响

目的通过观察针刺或热灸不同刺激方式干预足三里穴区对C57BL/6野生型小鼠和TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠血浆中脑肠肽(ghrelin)和大脑前额叶皮质中生长激素促分泌素受体-1α(GHSR-1α)含量的改变,探讨辣椒素受体1(TRPV1)参与针、灸不同刺激方式对胃肠功能调控通路ghrelin-GHSR-1α调节的差异性。方法24只C57BL/6野生型小鼠随机分为C57BL/6空白组、C57BL/6针刺组和C57BL/6热灸组,每组8只;24只TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠随机分为TRPV1^(-/-)空白组、TRPV1^(-/-)针刺组和TRPV1^(-/-)热灸组,每组8只。C57BL/6空白组和TRPV1^(-/-)空白组不予以处理;C57BL/6针刺组和TRPV1^(-/-)针刺给予手针干预;C57BL/6热灸组和TRPV1^(-/-)热灸组给予热灸干预。采用ELISA检测小鼠血浆中ghrelin含量和Western Blot法检测小鼠大脑前额叶皮质中TRPV1和GHSR-1α表达水平的变化。结果C57BL/6野生型小鼠中,与C57BL/6空白组相比,C57BL/6针刺组与热灸组血浆ghrelin表达水平均显著降低(P<0.05),前额叶皮层TRPV1含量表达增加(P<0.05)、GHSR-1α降低(P<0.05),但三者在针刺组和热灸组间差异无统计学意义(P>0.05)。TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠中,与TRPV1^(-/-)空白组对比,TRPV1^(-/-)针刺组和热灸组血浆ghrelin水平和前额叶皮质GHSR-1α表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论针刺、热灸均可通过激活TRPV1的生物活性,影响胃肠功能调控通路ghrelin-GHSR-1α的调节作用。

GHS-R基因5'侧翼区萤火虫荧光素酶报告基因增强子载体的构建和鉴定

目的构建生长激素释放剂受体(GHS-R)基因5'侧翼区萤火虫荧光素酶报告基因增强子载体。方法以原代培养的人生长激素(GH)腺瘤细胞基因组DNA为模板,PCR扩增GHS-R基因5'侧翼转录调控区不同长度片段(A～F)克隆,再定向克隆到pGL3-Enhancer载体中。结果通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了pGL3-Enhancer A～F克隆重组体。结论本载体的成功构建为体外研究GHS-R基因的转录调节提供了新的手段,为下一步在人垂体GH腺瘤中GHS-R基因启动子的干预研究奠定了基础。

(R)-3-氨基-2,3,4,5-四氢-1H-[1]-2-氧代苯并氮杂的合成

3,4-二氢-2H-萘-1-酮与盐酸羟胺反应后,在PPA中经Beckmann重排、碘代得到3-碘代-2,3,4,5-四氢-1H-[1]-2-氧代苯并氮杂(5),5经氨解、D-焦谷氨酸拆分、浓氨水处理后催化氢化还原,得到(R)-3-氨基-2,3,4,5-四氢-1H-[1]-2-氧代苯并氮杂,总收率约44%,纯度98%,ee值99.5%。

荷那龙罗非鱼两种GHSR基因的克隆与序列分析

用RT-PCR和RACE方法,从荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)垂体中克隆到生长激素促分泌素受体(GHSR)cDNA全序列。荷那龙罗非鱼GHSR基因具有GHSR-1a与GHSR-1b两个高度保守cDNA序列。GHSR-1a序列全长1 646 bp,包括225 bp的5′非编码区,266 bp的3′非编码区和1 155 bp的开放阅读框,编码384个氨基酸残基,具有7个跨膜结构域结构(transmembrane domains,TM);GHSR-1b序列全长1 877 bp,包括225 bp的5′非编码区,755 bp的3′非编码区和897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸残基,只具有前5个TM,在第6个TM的第4个氨基酸处开始缺失。将GHSR cDNA序列与基因组序列比较发现,这两种cDNA转录本来自同一个基因的不同变体。

氨基酸对基因表达的影响

氨基酸除了作为蛋白质合成底物外 ,氨基酸在体内还发挥着其它重要的营养生理功能 ,例如作为糖异生的底物、作为神经递质和信号转导的前体及蛋白质周转的调节剂等。然而 ,大量研究证实氨基酸还作为营养信号分子调控着许多调节细胞功能和氨基酸代谢的基因的表达。氨基酸主要是通过影响DNA的转录和mRNA的稳定性和翻译而调控基因的表达。但是 。

电针对功能性消化不良大鼠中枢及外周胃动素相关肽及其受体GHSR-1a的影响

目的观察电针对功能性消化不良大鼠中枢及外周胃动素相关肽胃饥饿素(Ghrelin)及其受体生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、电针组,每组10只。除正常组外均采用多因素干预法造模,造模成功后分别给予电针足三里及西药对照治疗4周,测定大鼠胃内残留率及小肠推进率,Western blot法测定大鼠下丘脑与胃窦的Ghrelin及GHSR-1a的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠胃窦与下丘脑的Ghrelin、GHSR-1a的表达及小肠推进率均明显降低(P<0.01),胃内残留率明显升高(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠下丘脑与胃窦的Ghrelin及GHSR-1a的表达及小肠推进率均明显升高(P<0.05或P<0.01),胃内残留率明显降低(P<0.05),且电针组与药物组无显著差异(P>0.05)。结论电针可以升高中枢及外周Ghrelin及GHSR-1a的表达水平,调节胃肠道活动,这可能是电针治疗功能性消化不良的作用机制。

重组腺病毒携带的人GHS-R1a基因在人胚肾293细胞中的表达(英文)

目的构建携带GHS-R1a基因的重组腺病毒,为转基因做准备。方法采用PCR法扩增GHS-R1a基因片段,随后亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,形成重组质粒pAdTrack-CMV-GHS-R1a。线性化的pAdTrack-CMV-GHS-R1a和腺病毒骨架质粒pAdEasy1在感受态大肠杆菌BJ5183内同源重组。将线性化重组质粒pAdGHS-R1a转染进HEK293细胞,并用激光共聚焦显微镜、RT-PCR和Western blot技术检测绿色荧光蛋白及GHS-R1a的表达。结果重组质粒pAdGHS-R1a经Pac I酶切后得到一个大于30kb的大片段和一个4.5 kb的小片段,证明重组腺病毒质粒pAdGHS-R1a构建成功。Ad-GHS-R1a转染293细胞后24h能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-PCR和Westernblot均证实GHS-R1a基因能在293细胞中有效表达。结论携带GHS-R1a基因的重组腺病毒构建成功,为进一步研究GHS-R1a的功能提供了基础。

生长激素作用通路、调控机制及生物学活性测定研究进展

生长激素是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的1种单一肽链的蛋白质激素,是人出生后促生长最重要的激素。生长激素通过与细胞表面特异性受体结合,激活非受体酪氨酸激酶JAK2及Src家族激酶的下游信号通路发挥生物学效应。深入了解生长激素作用机制是其生物学活性测定研究的基础。本文综述了近年来生长激素相关研究进展,包括生长激素与受体作用机制,生长激素与受体结合后激活的STATs、PI3K-Akt和MEK-Erk等信号通路,以及生长激素作用通路调控机制,并对生长激素活性测定方法研究进行了总结和展望,以期为生长激素药物生物学活性质量控制研究提供参考。

Ghrelin对糖尿病小鼠胃排空的影响及机制

目的:探讨ghrelin对糖尿病小鼠胃排空的影响及其作用机制.方法:采用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,用灌食phenol red的方法研究糖尿病小鼠胃排空的改变,并观察注射不同剂量ghrelin(50,100和200μg/kg)对糖尿病小鼠胃动力的影响.糖尿病小鼠胃底环形平滑肌条安置在恒温灌流肌槽中并用SMUP-E生物信号处理系统记录肌条的自发收缩活动,观察不同浓度ghrelin(0.1,1和10μmol/L)对肌条自发收缩活动的影响,并研究其作用机制.结果:糖尿病小鼠的胃排空率显著低于正常小鼠的胃排空率(22.90%±1.42% vs 28.10%±1.28%,P<0.05).ghrelin能显著提高糖尿病小鼠的胃排空,具有明显的量效关系.Ghrelin在0.1,1和10μmol/L均能显著增加糖尿病小鼠离体胃底环形平滑肌肌条的自发收缩幅度(1.11±0.03,1.22±0.02,1.36±0.04 vs 1.00,均P<0.05),而atropine和L-NAME均能抑制ghrelin增加糖尿病小鼠肌条自发收缩幅度的效应.结论:Ghrelin能提高糖尿病小鼠的胃排空能力,作用机制可能是通过肌间丛神经系统的硝基能神经和胆碱能神经上的受体而起作用.

胃饥饿素:生物学特征及对动物采食量的调控

胃饥饿素又称作生长激素释放肽,最初是在大鼠的胃内被发现的,它是生长激素促分泌素受体1A(GHSR-1A)的一种内源性配体。在下丘脑弓形核(ARC)及室旁核(PVN)高度表达GHSR-1A的区域,胃饥饿素结合GHSR-1A后,产生一系列生物学效应。本文综述了胃饥饿素的生物学特征及功能、对动物采食量调控的机制、影响胃饥饿素基因表达调控的因素和反馈抑制以及前景展望。

TSHR,ki-67,TTF-1,Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达和意义

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)、增殖细胞相关核抗原指数(ki-67)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在单纯甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)以及正常甲状腺组织中的表达及意义。方法选取2018年9月~2019年6月在我院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的患者,包括单纯甲状腺乳头状癌16例、桥本氏病合并甲状腺乳头状癌24例,结节性甲状腺肿32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR,TTF-1,Pax-8,ki-67的免疫组织化学染色。显微镜下观察染色结果,TSHR判读采用Tanaka定量积分法,ki-67,TTF-1,Pax-8判读方法参见文献。应用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析,有序多分类变量采用Wilcoxon秩和检验。结果 TSHR与TTF-1在PTC组中的表达低于在NG组(P=0.000,P=0.002)中的表达,且与是否同时患有HT无关(P=0.537,P=0.556);ki-67在PTC组中的表达显著高于在NG组中的表达(P=0.000),且有淋巴结转移的PTC中,ki-67的表达更高(P=0.004),与是否患有HT无关(P=0.285);Pax-8的表达在各组中无显著差异。结论 TSHR与TTF-1在PTC中的表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,ki-67在PTC中的表达高于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无显著差异。