GHR基因多态性与鸡生长、屠体性状的相关性分析

鸡的生长轴上,GH(生长激素)作为调节动物生长的重要激素,具有促进生长的功能。GH通过结合靶细胞表面的GHR(生长激素受体),形成GHR传导信号进入细胞产生生理功能。因此,GHR基因是GH调节细胞生理功能的关键基因。为了解GHR基因多态性与肉鸡生长、屠体性状的关联,本试验以“杏花鸡×隐性白洛克鸡”F2代资源群作为试验材料,通过PCR扩增和直接测序方法对GHR基因外显子的多态性进行检测,在第10外显子区域中发现2个SNP位点:A1514T和G1595A。关联分析结果显示,A1514T与鸡的活重、胸重、腿重、翅膀重、屠体重、胸肌剪切力等多个与生长和肉质相关的性状显著关联,G1595A与鸡的活重、腿肉重、屠体重、腿肌肉色、腿肌剪切力、胸肌剪切力、腿肌pH值和腿肌电导率等多个性状显著相关。生物信息学分析表明,2个SNPs属于同义突变,其可能导致GHR mRNA二级结构改变,还将导致GHR mRNA翻译过程中选择使用频率更低的密码子,从而可能影响GHR mRNA的翻译效率,进而影响GHR蛋白含量。综上所述,鸡GHR基因第10外显子上的2个同义突变可影响肉鸡生长和屠体性状。

生长激素受体及其基因研究进展

生长激素(growthhormone,GH)参与动物的生长、发育等代谢过程.GH发挥生理作用,首先是与靶细胞膜表面的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合,启动细胞内信号传导,促进胰岛素样生长因子(Insulin_like growth factor,IGF_I)的表达,再通过血液循环到达生物体局部组织,促进细胞的代谢过程.GHR是一种特异、高效的膜蛋白.GHR对GH的功能发挥有重要的影响,其在细胞内的表达量对生长激素发挥作用有重要影响,从而影响了生物器官组织的生理功能.就生长激素受体及生长激素受体基因的研究进展进行综述.

建鲤生长激素受体基因分离、转录子多态性以及组织表达特性

使用PCR、RT-PCR和RACE方法分离克隆了建鲤基因组内的4个jlGHRs基因,同源性分析和系统树表明它们两两分属于鱼类GHR1和GHR2,命名为jlGHR1a、jlGHR1b;jlGHR2a、jlGHR2b。jlGHR1s和jlGHR2s的两个旁系同源基因间氨基酸差异分别为5%和11%,但功能保守区FGVFS基序、Box1、Box2基本一致,jlGHR1s和jlGHR2s氨基酸差异为41%。jlGHRs和斑马鱼GHRs基因结构相同,在阅读框内存在7个内含子,两旁系同源基因间内含子长度或序列存在差异。jlGHR1s、jlGHR2s与不同鱼类GHR1、GHR2同源性高低与传统分类地位一致。实验过程中发现建鲤肝脏存在jlGHRs的多种转录子,包括丢失了外显子4的jlGHR1b'、保留了内含子3的jlGHR2a'、丢失了部分外显子8的jlGHR2as。实时定量RT-PCR组织表达结果显示4个jlGHRs在脑、肝、心、头肾、肾、肠、脾、肌肉各组织中均有表达,但表达量差异明显,其中肌肉组织中4个基因表达量均最高,脑中4个基因的表达水平相当,其余各组织中jlGHR2b的表达量均最高。从多转录子和较低表达量推测jlGHR2a所受的选择压力低于jlGHR2b。鲤鱼基因组内分离到GHR1、GHR2的两个旁系同源基因在功能基因方面证实了鲤鱼体内存在两套基因,表明鲤鱼是研究同源基因变异分化的好材料,也为今后正确查找jlGHRs基因上的SNP位点奠定了基础。

猪胃组织中生长激素受体基因表达的发育性变化及品种特点

用相对定量RT PCR的方法研究二花脸猪 (Erhualian)和大白猪 (1argeWhite)胃组织中生长激素受体 (GHr)mR NA发育性变化并进行品种间比较。分别于出生当天、3、2 0、30、4 5、90、12 0和 180日龄随机选取纯种大白猪公猪和二花脸公猪各 4头宰杀并采样 ,同时记录胃重和体重。研究结果表明 :出生时胃组织中GHrmRNA水平较高 ,3日龄时显著下调 (P <0 0 5 ) ;二花脸猪胃组织中GHrmRNA水平在断奶时 (45日龄 )达到高峰 ,随后显著下降 (P <0 0 5 ) ,至 90日龄后维持相对稳定。大白猪公猪在 90日龄时胃组织中GHrmRNA水平达到高峰 ,并维持在较高水平 ;从出生到断奶 ,二花脸猪胃组织GHrmRNA水平高于大白猪 ,2 0日龄时差异显著 (P <0 0 5 ) ;90日龄至 180日龄期间二花脸猪胃组织GHrmRNA水平低于大白猪 ,90日龄时差异显著 (P <0 0 5 )。胃重相对于体重的变化模式和胃组织GHrmRNA水平的发育变化呈中等强度正直线相关 ,相关系数为r=0 5 4 (P <0 0 5 )。以上结果提示 :(1)猪胃组织中GHr基因表达有特定的发育模式 ,并且呈现显著的品种间差异 ;(2 )GH直接作用于胃组织并调节胃的生长 ,GH是否直接参与胃的功能性发育调节 。

大熊猫生长激素受体(GHR)cDNA的克隆与序列分析

根据已报道的若干物种GHR基因cDNA序列设计引物 ,利用RT -PCR技术首次从大熊猫肝脏组织总RNA中扩增出GHR基因编码区全长cDNA序列 ,克隆于pGEM R○-T载体后进行测序和序列分析。结果表明 ,大熊猫GHR的ORF为 1917bp ,编码 6 38个氨基酸的前体蛋白 ,由 18个氨基酸的信号肽和 6 2 0个氨基酸的成熟肽组成 ,与人、狗、猪GHR结构相似 ,大熊猫GHR成熟肽由 2 4 6个氨基酸的胞外区、 2 4个氨基酸的跨膜区和 35 0个氨基酸的胞内区组成 ,并具GHR的特征性结构。序列相似性比较显示 ,大熊猫GHR与哺乳类GHR具有 6 9%～ 93%的高序列相似性 ,与爬行类和鸟类的序列相似性也达到 6 0 % ,而与鱼类的序列相似性较低 ,仅为 30 %左右。与其它哺乳动物GHR相比 。

牛生长激素受体基因遗传变异研究

以南阳牛、南阳牛、中国西门塔尔牛为试验动物,利用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术研究了GHR基因上第8外显子、第9外显子、5’端、第3外显子的遗传变异。结果表明在GHR基因第8外显子、5’端既没发现PCR-SSCP多态,又没发现HaeⅢ、HindⅢ、PstⅠ、SpeⅠ、MspⅠ、RsaI酶切多态;在GHR基因第9外显子、第3外显子也没检测到PCR-SSCP多态。

二花脸猪与大白猪肝脏生长激素受体基因表达的发育性变化

选刚出生的雄性纯种二花脸猪和雄性纯种大白猪各 2 8头 ,前者按中国地方猪种饲养标准饲养 ,后者按美国NRC标准饲养。测定不同发育阶段平均日增重 (BWG) ,并分别于 0、3、2 0、30、90、12 0、180日龄宰杀取样 ,用相对定量RT PCR方法 ,以 18SrRNA作内标 ,测肝脏生长激素受体 (GHR)mRNA丰度。结果发现 ,(1)从出生到 180日龄大白猪体重和BWG均显著高于二花脸猪。 (2 )大白猪和二花脸猪肝脏GHR基因表达发育性变化趋势相同 ,肝脏中GHR基因表达在出生时较低 ,随后表达逐渐增加 ,12 0日龄时达峰值 ,随后维持在较高水平 ,其发育性变化与BWG显著相关 (二花脸猪R =0 .6 8,P <0 .0 1,大白猪R =0 .96 ,P <0 .0 1)。双因子分析表明 ,大白猪肝脏GHR的表达极显著高于二花脸猪 (P <0 .0 1) ,其中从初生到 30日龄品种间差异不明显 ,在 90日龄到 180日龄大白猪肝脏GHR表达明显高于二花脸猪。提示 ,肝脏中GHR基因表达具有显著的年龄依赖性和明显的品种特征 ,肝脏中GHR基因表达对动物的生长有重要影响。

生长激素受体基因表达的研究进展

生长激素(growth hormone,GH)在促进动物生长、发育等代谢过程中起着重要作用。长期以来人们在研究动物生长发育机制及其调控时,主要着眼于提高生长激素水平。然而GH必须与靶器官上生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合,由GHR介导将信号传入细胞内才能发挥作用。大量研究结果显示,动物生长速度与GH水平并不完全平行,但与肝脏GHR呈明显正相关。生长快的肉鸡血液中GH和垂体GH mRNA水平比生长慢的蛋鸡低,而肝脏GHR水平比蛋鸡高;患侏儒症动物血液中GH浓度却比正常动物高,而GHR胞外部分缺失或功能不全。可见GHR基因表达对动物生长发育调控起着至关重要的作用。

生长激素与生长激素受体基因的表达

在动物生长轴中,GH是调控动物生长发育的核心激素,它具有促生长作用。但GH发挥生理作用的第一步是与靶细胞膜表面的GH受体(GHR)结合,由GHR介导将信号传入细胞内从而产生一系列生理效应。在生理激素浓度下,GH与GHR以1/2相结合。在超生理激素浓度下,激素饱和了所有的受体分子形成1/1的复合物,阻止了受体二聚化和信息传递。当GH水平提高而GHR基因表达没改善时,不仅GH的作用不能完全发挥,而且可能因为GH过剩而产生负反馈调节,影响其他生理功能。这可能是某些促生长激素轴功能的添加剂在使用一段时间后效果减弱的原因之一。因此,在直接或间接提高GH水平的同时,应该提高GHR基因表达水平,才能最大限度发挥GH的作用。促进GHR基因表达有促进动物生长发育和发展的趋势,可使畜禽生产性能在较高水平的情况下再上新台阶。

雄尼罗罗非鱼肝脏2种生长激素受体基因表达的发育性变化

选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰度。结果表明,30～110日龄,雄鱼特定生长率呈不断上升趋势,至80～110日龄达到最高,之后开始下降;雄鱼肝脏中2种GHR基因表达的发育性变化趋势不相同,30～110日龄,GHR1mRNA表达逐渐上升,110日龄达到最高,随后开始下降,其发育性变化与特定生长率显著正相关(R=0.96,P<0.01);GHR2mRNA表达在60日龄达到最高,80日龄急剧下降,之后又缓慢上升,其发育性变化与特定生长率无相关性。提示尼罗罗非鱼生长激素可能主要通过与肝脏中GHR1受体的结合启动其促生长机制,肝脏中GHR1mRNA表达具有显著的年龄依赖性,其表达对尼罗罗非鱼的生长有重要影响。

性连锁矮小鸡生长激素受体基因位点多态性分析

本研究通过构建鸡基因文库克隆了鸡生长激素受体基因，用克隆的基因片段作探针，分析正常鸡和性连锁矮小鸡在生长激素受体基因位点的多态性。

半滑舌鳎生长激素及其受体基因的原核表达

根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSGHR1-2质粒在70 kD处发现诱导的蛋白条带,其表达量分别占细胞蛋白总量的37.6%和20.2%;而构建的pGEX-6P-1-CSGH重组质粒和含有GHR-Ⅰ基因跨膜区的重组质粒(pET-32a-CSGHR1-1、pET-32a-CSGHR1-2和pGEX-6P-1-CSGHR1-1)均未获得表达产物。由此可见,半滑舌鳎GHR-Ⅰ基因的跨膜区可能影响其在大肠杆菌中的表达。研究结果为实现半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ制剂的开发及应用于养殖生产实践奠定基础。

江苏汉族人生长激素受体基因多态性研究

为了解生长激素受体(GHR)基因多态性在江苏汉族人群中的分布,通过多重PCR及PCR-RFLP的方法对269例江苏地区正常汉族人进行GHR基因3个位点的多态性分析,并与文献中报道的其它种族和地区的人群进行比较分析.结果显示江苏地区汉族正常人群中GHR基因型以fl/fl、I/L、P/P发生频率最高,这种分布在男女之间没有差异,与其它地区汉族人比较没有明显差异,与日本人差异也不明显,而与法国、俄罗斯人差异明显.研究表明,GHR基因3个位点多态性在不同种族之间分布存在着明显的差异,这种差异有可能是导致不同种族间人体测量学差异及对一些疾病的易感性及对药物的反应性不同的因素之一.

五指山小型猪生长激素及其受体基因的克隆与序列分析

动物生长发育调控是一个高度复杂而精细的生理过程，受多种因素如神经、体液、遗传、营养及环境等的影响。其中，动物神经内分泌生长轴各因子（激素、受体、结合蛋白等）及其基因对动物的生长发育起着关键的作用。正常情况下，下丘脑接受体内外的信息，生长激素释放激素（growth hormone releasing hormone，GHRH）和生长抑素（somatostatin，SS），调节垂体生长激素（growth hormone，GH）的分泌，GH通过与生长激素结合蛋白（growth hormone binding protein，GHBP）结合而运输，与靶器官上的生长激素受体（growth hormone receptor，GHR）结合，促使类胰岛素生长因子（insulin—like growth factors，IGFs）的产生并进入血液循环，IGFs再通过其结合蛋白（insulin—likeg rowth factor binding protein，1GFBP）转运到全身组织细胞，促使组织细胞的生长与分化。五指山猪（Wuzhishan Pig，WZSP）是一种原产于中国海南省山区的小型猪。五指山猪成年体重仅为35kg，是正常猪体重的15％～30％，是一种频临灭绝的珍稀物种。五指山猪具有以下特征：体型小，性成熟早，肉质好，耐近交和遗传稳定。为了开发和应用这一珍稀猪种的遗传资源，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所从1989年就已经开始对五指山猪进行近交系培育，现在已经获得五指山猪近交系18代（近交系数为0．974），但五指山猪的矮小机理至今不明。为了探讨五指山猪矮小的分子机理，对五指山猪生长激素及其受体基因进行了克隆和序列分析。从纯种近交16代五指山猪的垂体和肝组织提取总RNA，根据GenBank中猪生长激素及其受体基因的序列（登录号分别为X53325，NM214254）设计特异性引物，对五指山猪生长激素及其受体基因进行扩增，然后对PCR产物进行回收、克隆测序。测序结果表明，五指山猪生长激素基因开放阅读框长651bp，编码216个氨基酸，其中包含26个氨基酸的信号肽；生长激素受体基因编码区编码639个氨基酸，其中包含18个氨基酸的信号肽。运用生物学软件DNAssist2．2将五指山猪和普通猪的生长激素基因编码区进行比对发现，五指山猪生长激素基因的编码区有4个突变：26号位置发生C→T突变，该突变导致缬氨酸代替丙氨酸；65号位置发生G→A突变，该突变导致谷氨酰胺替换精氨酸；114号位置发生T→C突变，252号位置发生A→G突变，但是这两个突变都未引起所编码氨基酸的变化。五指山猪和普通猪生长激素受体基因比对发现，1143号位置的G→T突变引起天冬氨酸替换谷氨酸；1225号位置的G→T突变导致丝氨酸替换丙氨酸；1666号位置C→G突变导致缬氨酸替换亮氨酸；1739号位置C→G突变导致丙氨酸被甘氨酸所代替；1801号位置G→A突变导致缬氨酸被异亮氨酸代替；1248号位置G→A突变，1287号位置G→A突变和1827号位置G→C突变均为同义突变，未引起相应编码氨基酸的变化。五指山猪生长激素基因有两处氨基酸替换，这两处替换发生在信号肽区，对成熟蛋白的结构和功能没有影响，但是有可能会影响蛋白的运输。五指山猪生长激素受体基因突变都发生在生长激素受体的胞内结构域，这些突变可能改变生长激素受体的空间构像，从而对生长激素受体的胞内信号转导产生一定的影响，影响生长激素一生长激素受体一胰岛素样生长因子轴的信号级联，削弱生长激素的促生长作用。

二花脸猪和大白猪睾丸生长激素受体基因表达的发育性变化

随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P<0.05),之后在180日龄又再次上调;大白猪GHR mRNA相对表达量在出生当日最高,3日龄显著下降(P<0.05),随后直至180日龄维持在较低水平并相对恒定。总的来说,二花脸猪睾丸GHR mRNA相对表达量显著高于大白猪(P<0.05)。提示:不同品种猪睾丸GHR mRNA表达具有特定的发育模式,并可能与性成熟的早晚有关。

鹅生长激素受体基因克隆及其个体发育性表达研究

以籽鹅为实验材料,根据鸡生长激素受体(GHR)基因mRNA序列设计并合成引物,通过PCR技术克隆了鹅GHR基因,并利用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测籽鹅出壳到90日龄GHRmRNA在部分组织中的表达量变化。结果表明:鹅与鸡和鸭的GHR基因核苷酸序列同源性为97.1%和99.1%,氨基酸同源性均为99.1%。籽鹅肝组织中GHRmRNA表达水平在10到90日龄都较高,显著高于1日龄,以30日龄的表达量最高。30日龄GHRmRNA在肝脏等检测的组织中都有表达,但在肝脏和骨骼肌中的表达量高。肝组织中GHRmRNA表达量与日增重呈显著正相关(r=0.9116)。本实验结果揭示了生长期籽鹅组织中GHRmRNA表达水平的差异,为进一步研究生长轴相关基因对鹅生长及繁殖的调控作用奠定基础。

一个Laron综合征家系患者临床特点和生长激素受体基因突变分析(英文)

Laron综合征是一种常染色体隐性遗传病,生长激素受体(GHR)基因缺陷是导致Laron综合征的主要病因。Laron综合征主要临床特征为生后严重的生长落后伴特殊面容,血生化特点为高生长激素(GH)、低胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和低胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)。该研究报道一家系2例Laron综合征患者的临床特点及GHR基因突变。这两个病人为同胞姐弟。弟弟8岁,身高80.0cm(-8.2SDS),姐姐11岁,身高96.6cm(-6.8SDS)。他们出生体重和身长无特殊,自生后出现生长落后,身高明显落后于同龄正常儿童,并均呈现了典型Laron综合征外貌特征:身材矮、肥胖、前额突出、大眼睛、塌鼻梁、头发稀软。这两个病人空腹血清GH值均明显高于正常儿童,空腹血清IGF-I明显低于同年龄同性别正常儿童,血浆IGFBP-3和生长激素结合蛋白(GHBP)低于检测线。其中1例(8岁男孩)胰岛素和可乐定刺激后GH峰值大于350ng/mL,给予重组人生长激素治疗1年,身高由治疗前的80.0cm增加至83.3cm。GHR基因序列测定结果显示2例患者均存在外显子4上第65位氨基酸的纯合突变S65H(TCA→CCA),为新发现的突变。Laron综合征患者存在特殊的面貌特征,结合血GH、IGF-I、IGFBP-3和GHBP测定可以明确诊断。GHR基因外显子4上S65H突变可能是这两位Laron综合征患者的致病原因。

Laron综合征家系患者生长激素受体基因突变分析

目的研究Laron综合征患者的临床特点及生长激素受体(GHR)的基因突变。方法对一家系中2例表现为身材明显落后的患儿进行研究,分别进行体格测量和GH-IGF-I轴功能测定。提取外周血白细胞基因组DNA,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增GHR基因第2～9外显子及其两侧的侧翼序列,直接进行测序,将所测结果与正常人GHR基因序列进行对比,确定突变位点和突变类型。对突变基因均经2次测定证实。结果2例患儿自出生后身长明显落后于同龄儿童,呈现Laron综合征的独特面貌,空腹血清GH值均明显高于正常儿童。空腹血清IGF-I明显低于同年龄同性别正常儿童。血浆IGFBP-3和GHBP低于检测线。GHR基因序列测定结果显示2例患儿均存在外显子4上第65为氨基酸的纯合突变S65H,为新发现突变。结论Laron综合征患者存在典型的面貌特征,结合血GH、IGF-I、IGFBP-3和GHBP测定可以明确诊断。GHR基因外显子4上S65H突变可能是该Laron综合征患者的致病原因。[临床儿科杂志,2007,25(12):971-973]

鹅生长激素受体基因荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中鹅生长激素受体(GHR)基因序列设计合成了引物和探针,对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估,建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,由pMD-18T-GHR所构建的标准曲线线性关系良好,建立的GHR基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强(可以检测出低于10个拷贝/μl的样品),准确可靠。籽鹅和莱茵鹅GHRmRNA出壳到90日龄生长过程中肝脏中的表达量不同,30日龄不同组织的表达量各有变化特点。

荷斯坦母牛生长激素受体基因F279Y突变与产奶性状的关联分析

采用PIRA-PCR和RFLP法检测204头中国荷斯坦母牛生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)基因F279Y突变,并分析其与产奶性状的关系。结果在中国荷斯坦母牛中检测到GHR基因F279Y突变,3种基因型TT、TA和AA的频率分别为0.461、0.495和0.044,等位基因T和A的频率分别为0.708和0.292。分析表明,AA基因型个体305天产奶量显著高于TA和TT基因型(P<0.05);TT基因型个体乳脂率显著高于AA基因型个体(P<0.05),乳蛋白率极显著高于TA和AA基因型个体(P<0.01)。A等位基因对305天产奶量有正加性效应,显性度相对较高;而对其他4个乳成分性状有负加性效应,显性度相对较低。等位基因A具有提高产奶量的效应,等位基因T具有提高乳成分的效应。本研究初步表明F279Y突变可以用于中国荷斯坦牛产奶性状的标记辅助选择。