杂多酸引发四氢呋喃聚合反应Ⅴ.生长链浓度与链生长速率常数的测定

采用改进的酚钠法及端羟基测定法对环氧乙烷促进的低浓度磷钨杂多酸引发的四氢呋喃聚合反应过程中生长链浓度的测定表明 ,杂多酸分子中的三个质子均参与了引发反应 ,各引发一个聚合链 .采用醋酸酐为促进剂时杂多酸引发四氢呋喃聚合反应生长链浓度测定的结果也证明了这一点 .由此测得在 0℃和 2 0℃时四氢呋喃聚合反应链增长表观速率常数分别为 3 78× 10 -3 和 1 98× 10 -2 L·mol-1·s-1,这与四氢呋喃按离子型生长链增长时的反应速率常数相近 .说明PW12

卵巢癌组织中长链非编码RNA生长阻滞特异性抑制物5、微小RNA-205的表达及意义

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性抑制物5(GAS5)、微小RNA-205(miR-205)在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法前瞻性收集2019年1月至2020年6月收治的初诊卵巢癌患者于术中取其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>2cm);采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA GAS5、miR-205表达情况;问卷调查法统计患者临床病理资料;术后随访2年(截止时间至2022年6月),统计患者生存时间。比较癌组织和癌旁组织lncRNA GAS5、miR-205表达,并采用Pearson相关分析lncRNA GAS5与miR-205的关系;以癌组织lncRNA GAS5、miR-205表达的中位数将卵巢癌患者分为lncRNA GAS5与miR-205高表达组和低表达组,比较不同病理特征卵巢癌患者lncRNA GAS5、miR-205高表达、低表达情况;比较不同lncRNA GAS5、miR-205表达情况的卵巢癌患者生存时间。结果共82例卵巢癌患者纳入本次研究,其中2例失访,最终80例患者进入本次研究。卵巢癌组织lncRNA GAS5相对表达量小于癌旁正常组织,miR-205相对表达量大于癌旁正常组织(P<0.05);Pearson相关分析显示,卵巢癌组织中lncRNA GAS5相对表达量与miR-205相对表达量呈负相关(r=-0.606,P<0.001)。lncRNA GAS5高表达45例,低表达35例;miR-205高表达40例,低表达40例。Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中lncRNA GAS5低表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中miR-205高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05)。lncRNA GAS5低表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.50±0.89)个月,低于高表达患者(23.89±0.09)个月(χ2=5.150,P=0.023)。miR-205高表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.71±0.79)个月,低于低表达患者(23.98±0.03)个月(χ2=6.337,P=0.012)。结论lncRNA GAS5、miR-205在卵巢癌组织表达存在一定的差异,其中lncRNA GAS5低表达,miR-205高表达,并影响卵巢癌患者的临床病理特征和预后。

lncRNA HAGLR促卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化的机制研究

目的研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用。方法培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组)。然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组)。qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达。CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性。Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力。细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力。TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡。结果与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05)。与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05)。与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05)。结论lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT。

“经验链+生长点”视角下幼儿园角色游戏深度学习的策略——以“童乐小镇”角色游戏为例

角色游戏的深度学习是一种基于理解的学习,是指儿童在角色游戏中以高阶思维的发展和游戏问题的解决为目标,以整合的经验,积极主动地、批判性地认识新的知识和思想,并将它们融入原有的认知结构中,且能将已有的知识迁移到新的情境中的一种学习。以“童乐小镇”角色游戏为例,介绍了“经验链+生长点”视角下的角色游戏深度学习的策略:以问题为中心,构建角色游戏“经验链”;以思维导图为线索,抓住角色游戏“生长点”。以此推进角色游戏的深度学习。

“经验链+生长点”视角下幼儿园角色游戏促进幼儿深度学习的策略研究

“经验链+生长点”是一种以幼儿为主体,以其兴趣、需求和潜能为导向,以其经验为基础,以其生长点为目标的教育理念。角色游戏是幼儿园教育中具有重要价值的活动形式之一,它可以激发幼儿的想象力和创造力,培养幼儿的社会性和自主性,从而促进幼儿的深度学习。因此,文章基于“经验链+生长点”视角探析幼儿园角色游戏促进深度学习的策略,优先分析幼儿园角色游戏特点与深度学习理论内涵,之后依据“经验链+生长点”视角探析幼儿园角色游戏促进深度学习的实践举措,提出通过创设生动的情境、链接幼儿已有的经验、从幼儿身心发展现状出发,组织角色游戏活动的举措。希望为幼儿园教师提供一些参考和启示,从而更好地实施“经验链+生长点”视角下的幼儿园角色游戏教育,促进幼儿深度学习的发展。

血小板衍生生长因子-B链及受体-α链在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)及受体α链(PDGFR-α)与非小细胞肺癌发生发展的关系。方法采用免疫组化LSAB法检测PDGF-B、PDGFR-α在85例非小细胞肺癌原发灶以及20例正常支气管黏膜中的表达。结果 PDGF-B在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞浆和/或细胞核中表达,PDGFR-α主要在NSCLC细胞浆中表达,个别在细胞核表达;与正常支气管粘膜组织相比,PDGF-B、PDGFR-α在NSCLC均过度表达(P<0.05);高分化腺癌组PDGFR-α阳性表达率明显高于低分化腺癌组(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ期肺癌组PDGF-B阳性表达率明显高于Ⅰ期肺癌组(P<0.05)。结论 PDGF-B/PDGFR-α自分泌刺激环在NSCLC的发生中可能起重要作用;PDGFR-α阳性表达与肺腺癌分化呈正相关;PDGF-B的阳性表达与肺腺癌、鳞癌临床分期呈正相关。

血小板衍生生长因子B链在pN0期非小细胞肺癌中的表达及与淋巴结微转移的关系

目的探讨血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)在pN0期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与淋巴结微转移关系。方法采用免疫组化链霉菌蛋白生物素(LSAB)法检测PDGF-B在50例pN0期的NSCLC患者原发灶(152枚淋巴结)及22例癌旁组织中的表达,通过细胞角质蛋白(CK)抗体为标志物来检测pN0期NSCLC的淋巴结微转移情况。结果pN0期NSCLC组织中PDGF-B的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);50例pN0期NSCLC患者中16例患者检测存在微转移;152枚淋巴结中,CK表达阳性率为18.42%(28/152);pN0期NSCLC患者淋巴结微转移与临床分型有关,ⅠB期和ⅡB期NSCLC患者的淋巴结微转移发生率较高(P均<0.05)。结论以CK细胞角质蛋白抗体为标志物检测pN0期NSCLC淋巴结微转移情况及pN0期NSCLC中PDGF-B与淋巴结微转移的关系可准确NSCLC的分期,为早期NSCLC患者的个体化治疗提供理论依据,并显著提高患者的长期生存率。

血小板源生长因子B链基因上游序列HMGI结合区的初步鉴定

目的:观察转录结构因子高迁移率蛋白I(HMGI)与血小板源生长因子B链(PDGF-B)基因上游序列的结合并初步鉴定HMGI的结合序列。方法:应用凝胶迁移率改变法(EMSA)观察重组人HMGI蛋白与PDGF-B基因上游-1758/+43bp片段的结合,并逐步确定与其结合的AT富含序列。结果:重组人HMGI蛋白能较特异地与PDGF-B链基因上游-1758/+43bp片段结合,分离到的两个HMGI结合片段,-1393/-1181bp和-190/+43bp,均含有AT富含序列TTTATAAA(-1333/-1326bp,-1314/-1307bp和-30/23bp)。HMGI能与含TT-TATAAA的合成寡核苷酸结合,并能促进转录因子NF-κB与拼接于旁侧的PDGF-B基因的切应力反应元件结合。结论:HMGI在体外能与PDGF-B链基因上游的TTTATAAA序列结合,可能参与PDGF-B基因的转录调控。

动脉硬化闭塞症患者股动脉粥样硬化斑块中血小板源生长因子A链的表达

目的探讨血小板源生长因子A链与动脉硬化闭塞症发生的关系。方法应用免疫组织化学技术测定31例动脉硬化闭塞症患者股动脉动脉粥样硬化斑块中血小板源生长因子A链的表达。结果HE染色显示动脉硬化闭塞症患者动脉壁内膜不完整甚至缺失,平滑肌层细胞紊乱,其内有大量泡沫细胞堆积。正常人动脉壁结构完整,内膜光滑,内皮下无脂质沉积,平滑肌层细胞排列整齐。免疫组织化学检测结果发现动脉硬化闭塞症患者动脉壁动脉粥样硬化斑块内细胞胞浆中血小板源生长因子A链呈强阳性表达,而正常人动脉壁中血小板源生长因子A链仅在中膜有微量表达。结论动脉硬化闭塞症患者动脉壁动脉粥样硬化斑块中血小板源生长因子A链表达增高与动脉硬化闭塞症的发生有关。

人肝细胞生长因子β链在E.coli中的表达、纯化及活性测定

目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转化大肠杆菌,筛选rhHGF-β的高效表达菌株。对rhHGF-β进行粗纯化,透析复性后MTT法检测生物活性。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组克隆的酶切结果与设计一致。目的 蛋白的表达量占全菌蛋白的30％,粗纯化后纯度达90％,复性产物能刺激大鼠肝细胞的增殖。结论 建立了rhHGF-β的表达体系,获得了具有生物活性的rhHGF-β,为进一步大量制备和研究HGF的生物学功能提供了重要的实验数据。

重组人肝细胞生长因子β链体外生物学活性的测定

目的 建立一种稳定灵敏的方法用于检测重组人肝细胞生长因子β链 (rhHGF β)对原代培养成年大鼠肝细胞的增生作用。方法 利用噻唑蓝 (MTT)比色方法在多种实验条件下对rhHGF β进行生物学活性检测。结果 对于体外原代培养成年大鼠肝细胞 ,rhHGF β可刺激肝细胞的增生 ,且有剂量依赖效应。 结论 确定了原代培养肝细胞检测rhHGF

牛初乳短链胰岛素样生长因子-1对多柔比星肾病大鼠胰岛素样生长因子-1的影响

目的研究牛初乳短链胰岛素样生长因子-1(BctIGF-1)对肾病大鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响,为治疗肾病综合征(NS)提供理论依据。方法将30只周龄相同、体质量相近的雌性SD大鼠随机分为对照组、肾病组、BctIGF-1治疗组;实验第6周末杀鼠,采用放射免疫法测定其血清与尿IGF-1水平,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)测定其肝、肾组织IGF-1 mRNA表达,采用考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白排泄量。结果BctIGF-1治疗组24h尿蛋白及病理积分均低于肾病组(P<0.05,0.01);肾病大鼠血清IGF-1水平明显低于BctIGF-1治疗组(P<0.05),尿IGF-1排泄量明显高于BctIGF-1治疗组(P<0.01);各组大鼠肝组织IGF-1 mRNA表达差异无显著性;肾组织IGF-1mRNA表达由高至低依次为对照组、BctIGF-1治疗组、肾病组,BctIGF-1治疗与对照组比较差异无显著性,但BctIGF-1治疗与对照组IGF-1 mRNA表达均显著高于肾病组(P<0.01,0.05)。结论BctIGF-1可有效降低肾病大鼠尿蛋白,减轻肾脏病理损伤,其机制可能是通过增加其血清游离IGF-1水平、促进肾局部IGF-1mRNA表达来实现。

循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

人参皂苷Rh2调节转化生长因子β活化的长链非编码RNA对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨人参皂苷Rh2(G-Rh2)调控转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞(SHG-44、A172、Ln229、U87、U251)的LncRNA-ATB水平。培养U251细胞,将细胞分为si-NC组(阴性对照)和si-ATB组(干扰LncRNA-ATB),采用CCK-8、Transwell小室实验和划痕实验分别评价细胞增殖、迁移和侵袭能力。不同浓度G-Rh2处理U251细胞以计算G-Rh2的半数抑制浓度(IC_(50))值。将细胞分为对照组、G-Rh2组(20μg/ml G-Rh2)和G-Rh2+ATB组(20μg/ml G-Rh2+过表达LncRNA-ATB),检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-9和Snail的水平。结果LncRNA-ATB在胶质瘤细胞的水平低于NHA细胞(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ATB组U251细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制(P<0.05)。G-Rh2的IC_(50)值为20.992μg/ml,并能够抑制U251细胞中LncRNA-ATB的表达(P<0.05)。G-Rh2组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力低于对照组;G-Rh2+ATB组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力明显高于G-Rh2组。G-Rh2组MMP-9和Snail的水平低于对照组(P<0.05),G-Rh2+ATB组MMP-9和Snai水平高于G-Rh2组(P<0.05)。结论干扰LncRNA-ATB表达抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭过程,G-Rh2可能下调LncRNA-ATB表达来抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭,发挥抗肿瘤功效。

被转化生长因子β活化的长链非编码RNA对人淋巴瘤Raji细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡和周期的影响及其潜在机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA-ATB短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和miR-200c模拟物(miR-200c mimics)效果,以及LncR NA-ATB、miR-200c和鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)的表达;噻唑蓝(MTT)法检测沉默LncRNA-ATB对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测LncR NA-ATB对Raji细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因(Luciferase)实验检测KRAS是否为miR-200c的直接靶基因。结果 LncR NA-ATB-shRNA可有效沉默Raji细胞中LncRNAATB的表达,沉默LncRNA-ATB的表达可抑制Raji细胞的增殖能力,促进Raji细胞的凋亡能力,并使Raji细胞的周期阻滞于G_1期。进一步研究显示LncRNA-ATB可作为ceRNA与miR-200c竞争性地调控miR-200c直接靶分子KRAS的表达而促进肿瘤细胞增殖。结论LncRNA-ATB可通过上调KRAS的表达而在淋巴瘤细胞的增殖、凋亡和周期过程中发挥着重要的作用。

子痫前期患者胎盘组织中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5表达水平及临床意义

目的检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2018年6月至2020年5月在监利市人民医院行剖宫产的50例非重度PE患者(非重度PE组)、50例重度PE患者(重度PE组)及50例正常妊娠孕妇(对照组)作为研究对象。分娩后收集胎盘组织,检测胎盘组织螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积;实时荧光定量聚合酶链反应法检测胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平;Pearson法分析PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5水平与螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积的相关性。结果与对照组比较,非重度PE组、重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平均升高,螺旋动脉管腔面积均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与非重度PE组比较,重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平升高,螺旋动脉管腔面积降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平与螺旋动脉管壁厚度存在正相关(r=0.485,P=0.000),与螺旋动脉管腔面积存在负相关(r=-0.614,P=0.000)。结论PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5高表达,可能通过影响螺旋动脉灌注影响PE的发生发展,对其水平进行检测有助于临床判断PE患者病情。

联合检测被转化生长因子b激活的长链非编码RNA和糖链抗原19-9对胰腺癌的诊断和预后价值

目的探讨联合检测被转化生长因子b激活的长链非编码(lncRNA-ATB)和糖链抗原19-9(CA19-9)在胰腺癌诊断和预后评估中的价值。方法选取2012年4月至2014年7月在安阳市人民医院肝胆外科接受手术治疗的胰腺癌病人103例(观察组)、良性疾病150例(良性组)以及同期健康体检者150例(健康组)。分别检测三组研究对象血清lncRNA-ATB的表达和CA19-9水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析lncRNA-ATB和CA19-9对胰腺癌的诊断价值,采用比例风险(COX)回归模型分析影响胰腺癌病人预后的独立危险因素。结果观察组lncRNA-ATB和CA19-9水平[lncRNA-ATB(4.03±1.35),CA19-9:89.02±24.63)U/mL]均显著高于良性组[lncRNA-ATB(2.76±0.84),CA19-9(58.74±18.62)U/mL]和健康组[lncRNA-ATB(1.68±0.43),CA19-9(16.93±6.31)U/mL,均P<0.05],良性组lncRNA-ATB和CA19-9水平显著高于健康组(P<0.05)。ROC曲线显示,血清lncRNA-ATB、CA19-9以及两者联合的曲线下面积(AUC)分别为0.833(95%CI:0.793~0.868,P<0.001)、0.765(95%CI:0.720~0.805,P<0.001)、0.884(95%CI:0.849~0.914,P<0.001)。其中,两者联合检测与lncRNA-ATB及CA19-9的AUC差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,lncRNA-ATB与CA19-9呈显著正相关(r=0.307,P<0.001)。COX回归分析显示较高血清lncRNA-ATB[OR(95%CI):1.11(1.04~1.17)]相对表达量是影响胰腺癌病人术后生存的独立危险因素。结论血清lncRNA-ATB和CA19-9在胰腺癌病人中表达显著上调,两者联合检测对胰腺癌的诊断效能更佳,是胰腺癌早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。

长链非编码RNA生长抑制特异因子5调控微小RNA-137对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)调控微小RNA(miR)-137对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法实验分为对照(control)组、Aβ组、Aβ+si-NC组、Aβ+siGAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组,每组10只。Y迷宫法检测大鼠学习记忆力;实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-qPCR)检测海马CAI区GAS5、miR-137水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测海马CAI区B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白水平;尼氏染色观察神经元形态;Tunel染色观察大鼠神经元凋亡情况;双荧光素酶鉴定miR-137与GAS5的靶向关系。结果与对照组相比,Aβ组、Aβ+si-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05);分别与Aβ组、Aβ+si-NC组相比,Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率降低(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平升高(P<0.05);分别与Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组相比,Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组海马CAI区GAS5mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05)。经验证,miR-137与GAS5之间存在靶位点。结论干扰GAS5可上调miR-137从而保护Aβ诱导的大鼠海马神经元损伤,缓解神经元凋亡过程;而进一步下调miR-137可逆转上述过程。