下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β表达对PC9肺腺癌细胞的影响

目的:探讨下调生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45β(growth arrest and DNA damage inducible protein 45β,GADD45β)表达对PC9肺腺癌细胞及吉非替尼敏感性的影响。方法:设计并合成GADD45β基因小干扰RNA(GADD45β-small interfering RNA,GADD45β-siRNA)序列,通过慢病毒介导将GADD45β-siRNA转入PC9肺腺癌细胞中,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western印迹检测转染前后PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA及蛋白水平,采用膜联蛋白V(annexin V)-别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)双染流式细胞法检测转染后细胞凋亡水平;通过流式细胞术检测转染后细胞内DNA含量,计算转染后细胞各周期时相百分率,分析转染对细胞生长周期的影响;通过计数克隆形成数检测RNA干扰对细胞成瘤能力的影响;采用MTT法检测PC9肺腺癌细胞的吉非替尼半数抑制浓度IC50。结果:筛选出5'-AAATCCACTTCACGCTCAT-3'为GADD45β基因RNA干扰的有效序列。转染GADD45β-siRNA 48 h后,qRT-PCR和Western印迹结果显示PC9肺腺癌细胞GADD45β的mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且成瘤克隆数明显减少(P<0.05);PC9肺腺癌细胞位于S期及G2/M期细胞增多(P<0.05),吉非替尼的IC50明显下降(P<0.05)。结论:PC9肺腺癌细胞转染GADD45β-siRNA后,能成功下调GADD45β基因的mRNA和蛋白表达;下调GADD45β表达可降低PC9肺腺癌细胞的克隆形成能力,促进细胞凋亡;下调GADD45β表达可明显提高PC9肺腺癌细胞对吉非替尼的敏感性。

生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α在心血管疾病中的研究进展

哺乳动物细胞受到DNA损伤刺激时,生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)可与多种生物大分子相互作用在细胞周期阻滞、DNA损伤修复、细胞增殖、凋亡等细胞应答反应中发挥重要的调控作用。GADD45α表达调控的信号通路与肿瘤、心血管疾病等多种疾病的发生、发展密切相关。阐明GADD45α的功能及其在疾病中的作用机制,有助于了解许多疾病的发病机制,为诊断及治疗提供新的靶点。

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α在肝再生及肝病中的研究进展

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α(GADD45α)是一种应激诱导蛋白,它可诱导Gadd45α基因的表达。GADD45α在再生肝及肝硬化、肝癌、肝衰竭等肝病中表达显著上调,与多种肝病发生发展及预后密切相关。GADD45α蛋白通过与其他蛋白相互作用,在调控细胞周期、维持基因组稳定、诱导细胞凋亡等方面发挥重要作用。以下我们综述了GADD45α与肝再生关系的研究进展,为进一步了解肝再生与肝脏疾病的发生机制以及治疗和预防肝病奠定基础。

深低温停循环手术早期核因子κB磷酸化增强并上调生长阻滞和DNA损伤基因45β(GADD45β)表达

目的研究深低温停循环(DHCA)术后早期海马神经元细胞内核因子κB(NF-κB)的表达变化及其分子水平调控。方法本研究通过建立DHCA和脑缺血再灌注损伤(CRI)大鼠模型,分别获得不同模型建立后0、6、12、24、48 h的大鼠海马组织样本,其中CRI组作为DHCA组损伤对照。采用实时定量PCR检测DHCA术后48 h内,NF-κB、生长阻滞和DNA损伤基因45β(GADD45β)的mRNA水平,Western blot法检测NF-κB、GADD45β的蛋白水平。使用荧光素酶报告基因法检测体外使用氧糖缺乏条件处理小鼠海马神经元HT-22细胞后,GADD45β表达与NF-κB表达以及磷酸化之间的关系。结果 CRI模型组24 h内NF-κB mRNA水平逐渐升高,至24 h达到峰值,随后下降。然而,DHCA模型组12 h内NF-κB mRNA水平变化不显著,至术后24 h时,升高至正常的2倍,随后逐渐降低。CRI和DHCA组中GADD45β的mRNA水平均逐渐升高,其中CRI组的变化更为显著,而DHCA组内GADD45β的mRNA水平仅为术后0 h对照组的2倍。CRI组织中NF-κB以及NF-κB磷酸化水平均显著升高,DHCA模型组NF-κB以及NF-κB磷酸化水平与正常对照组无显著性变化,而与CRI组相比显著降低。Western blot结果显示CRI组中GADD45β的蛋白水平在术后24 h内上升,DHCA组中GADD45β的蛋白水平在12 h时最高,24 h时与对照组相比无统计学意义。荧光素酶报告基因法证实抑制HT-22细胞NF-κB的活化,可降低GADD45β的水平。结论脑组织缺血再灌注过程中NF-κB磷酸化增强并增加GADD45β水平。

生长抑制和DNA损伤诱导基因45β在足细胞损伤中的作用及机制

目的:研究生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45B)在足细胞损伤中的作用及机制。方法:微分离37例肾活检证实的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者肾小球,qRT-PCR检测肾小球GADD45B基因表达,同时进行免疫组化检测GADD45B蛋白表达。进一步利用模式动物斑马鱼研究GADD45B基因功能,Podocin启动子驱动和UAS/GAL4系统构建足细胞上特异性表达GADD45B转基因斑马鱼,硝基还原酶/甲硝唑(NTR/MTZ)系统特异性诱导足细胞损伤,观察斑马鱼水肿发生率,定量检测蛋白尿及足细胞凋亡。结果:FSGS患者肾小球GADD45B基因和蛋白表达水平显著高于正常对照组,并与FSGS患者白尿、血白蛋白及血肌酐水平密切相关;斑马鱼研究结果显示,足细胞上高表达GADD45B能够显著加重MTZ诱导的足细胞损伤,GADD45Ba/b转基因鱼的水肿发生率和蛋白尿水平均显著高于野生型斑马鱼。活性caspase染色结果显示,GADD45B转基因鱼发生凋亡的足细胞数显著高于非转基因鱼。吗啉环寡聚核苷酸注射斑马鱼抑制GADD45B基因表达,则MTZ诱导的斑马鱼水肿发生率和蛋白尿水平显著降低。结论:高表达GADD45B显著加重足细胞受损,而抑制GADD45表达则能有效改善足细胞损伤,提示其可作为治疗足细胞损伤药物靶点。

ATM失活诱导GADD45α依赖的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】探究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶失活诱导神经元凋亡的具体分子机制。【方法】体外成熟7 d的小脑颗粒神经元(CGNs)分别用含25 mmol/L KCl(25 K)培养基、5 mmol/L KCl(5 K)培养基和含ATM特异性抑制剂(Ku55933,10μmol/L;Ku60019,15μmol/L)的25 K培养基后进行免疫印迹检测ATM、Caspase3、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平或培养8 h后进行Hoechst染色分析。在C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA,q-PCR和免疫印迹验证其干扰效率。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染ATM特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。体外成熟7 d的CGNs用含ATM特异性抑制剂的25 K培养基培养8 h后进行全转录组测序、差异表达基因鉴定和通路富集分析。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染GADD45α特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h,用含15μmol/L Ku6的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理8 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。【结果】与25 K组相比,5 K处理组和ATM特异性抑制剂处理组的CGNs ATM蛋白表达降低、Cleaved Caspase-3蛋白表达增加、细胞核固缩率增加。C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA后有效降低ATM和GADD45α的mRNA和蛋白的表达。与对照相比,CGNs转染ATM特异性siRNA后,细胞核固缩率升高。在Ku55933处理组中鉴定出835个基因表达上调,848个基因表达下调;在Ku60019处理组中鉴定出454个基因表达上调,314个基因表达下调;274个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同上调,179个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同下调,其中ATM下游靶标GADD45α表达上调;通路富集结果显示TNF信号通路、NF-κB信号通路和凋亡信号通路等被显著富集。与对照相比,抑制剂处理组和5K组GADD45α的mRNA和蛋白表达均升高。与对照相比,转染GADD45α特异性siRNA后用含15μmol/L Ku60019的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理后的CGNs细胞核固缩率降低。【结论】ATM活性降低诱导GADD45α依赖的神经元凋亡。

GADD45β在骨关节炎中的作用及其对MKK7/JNK途径的影响

目的探讨生长抑制和DNA损伤诱导基因45β(GADD45β)在骨关节炎(OA)发生发展中的作用及机制。方法将大鼠软骨细胞分为对照组、IL-1β组、NC-OE+IL-1β组、GADD45βOE+IL-1β组、NC-sh+IL-1β组和GADD45βsh+IL-1β组。除对照组之外,其他组细胞均采用10 ng/mL的IL-1β处理24 h。采用MTT法和TUNEL法检测软骨细胞增殖和凋亡。将SD大鼠分为假手术组、OA组、NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组,每组12只。假手术组大鼠只进行假手术操作,其他组大鼠均为前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法诱导的OA模型大鼠。假手术组和OA组大鼠关节腔内注射磷酸盐缓冲液,NC-OE+OA组和GADD45βOE+OA组大鼠关节腔内分别注射NC-OE和GADD45βOE慢病毒,每周注射1次,共4周。采用番红O-固绿染色观察大鼠软骨降解并进行OARSI评分,采用TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测GADD45β、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平。采用Western blot检测GADD45β、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)、p-MKK-7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2/3和p-JNK1/2/3的蛋白水平。结果与对照组比较,IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,GADD45βOE+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均升高,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3和MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均降低,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,GADD45βsh+IL-1β组软骨细胞的GADD45βmRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力和Bcl-2 mRNA水平均降低,TUNEL阳性率以及Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与假手术组比较,OA组大鼠的GADD45β的mRNA和蛋白水平降低,Bcl-2 mRNA水平降低,OARSI评分和TUNEL阳性率均升高,Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均升高,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与OA组和NC-OE+OA组比较,GADD45βOE+OA组大鼠的GADD45β的mRNA和蛋白水平升高,Bcl-2 mRNA水平升高,OARSI评分和TUNEL阳性率均降低,Bax、MMP3、MMP13、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平均降低,MKK-7和JNK1/2/3的相对磷酸化水平降低(P<0.05)。结论GADD45β在OA中下调,上调GADD45β可能通过抑制MKK7/JNK途径抑制OA进展。

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。

丙型肝炎病毒抑制DNA损伤修复相关基因生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45α的表达

目的,探讨HCV感染对DNA损伤修复相关基因生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45仅（GADD45α）表达的影响。方法建立全基因HCVJFH1感染的Huh7．5．1细胞模型。用相对荧光定量PCR和Westernblot分别检测HCVJFHl感染和未感染的Huh7．5．1细胞中GADD45仅mRNA和蛋白质的表达水平。组间数据比较用单因素方差分析。结果HCVJFHl感染的Huh7．5．1细胞内有HCVRNA高水平复制及HCVNS5A蛋白质和核心蛋白的表达。与未感染Huh7．5．1细胞相比，HCVJFH1感染72h的细胞内GADD450α mRNA和蛋白质相对表达量均明显降低，分别为0．57±0．09比1．00±0．11和0．28±0．03比1．00±0．07，差异均有统计学意义（F值分别为75．407和560．04，P值均〈0．01）。结论HCV下调GADD45α的转录和蛋白质表达，影响DNA损伤修复，这可能是HCV感染致肝癌发生的机制之一。

小鼠卵泡发育不同阶段Egr-1、Gadd45α蛋白表达及相互关系

目的:探讨Egr-1、Gadd45α在小鼠卵泡发育不同阶段的表达及其相互关系。方法:选择不同发育阶段的昆明种小鼠卵巢,用免疫组化法检测不同发育阶段卵泡中Egr-1、Gadd45α蛋白的表达。结果:Egr-1、Gadd45α蛋白在卵泡不同发育阶段的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,而且随卵泡发育表达增强。卵泡不同发育阶段中卵母细胞及颗粒细胞中Egr-1、Gadd45α蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。闭锁卵泡Egr-1、Gadd45α蛋白表达强烈,其表达强度明显高于各级生长卵泡。黄体及间质中亦有Egr-1、Gadd45α表达。同时Egr-1、Gadd45α在各级卵母细胞的表达有较强的相关性(rs=0.993,P<0.05)。结论:卵泡发育不同阶段Egr-1、Gadd45α均有表达,在卵泡发育后期和闭锁卵泡中强表达。提示Egr-1、Gadd45α在卵泡生长发育及闭锁过程中可能起重要的调控作用。

Gadd45α mRNA和蛋白在子痫前期胎盘组织中表达及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响

目的分析生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)蛋白和mRNA在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达情况及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响。方法回顾性选取咸宁市中心医院收治的40例PE胎盘组织为病例组,30例正常胎盘组织为对照组。通过免疫印迹法对两组Gadd45α蛋白表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对两组Gadd45αmRNA的相对表达量进行检测。对滋养细胞HTR8/Svneo进行培养,以转染阴性对照的siRNA为对照siRNA组,转染Gadd45α的siRNA为Gadd45α-siRNA组。在转染Gadd45α的siRNA后对滋养细胞侵袭数量和侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMPs)的表达水平进行检测。结果相比对照组,病例组Gadd45α蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Gadd45αmRNA的相对表达量明显上调(P<0.01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Gadd45αmRNA的相对表达量亦显著下调(P<0.01)。随着转染siRNA时间的增加,对照siRNA组与Gadd45α-siRNA组细胞侵袭数量明显增多(P<0.05);相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组同时间点滋养细胞HTR8/Svneo侵袭数量明显增多(P<0.01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo侵袭相关分子MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达水平均显著升高(P<0.05)。结论Gadd45α高表达于PE胎盘组织,而通过阻滞滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达水平可诱导细胞侵袭,提高侵袭相关分子MMPs的表达量。

扇贝多肽对H_2O_2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。

GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌组织中的蛋白表达及意义

目的探讨GADD45β和survivin基因在人原发性肝癌(HCC)组织中的蛋白表达及意义。方法收集不同分化程度的HCC组织标本68例,正常肝组织标本20例,采用免疫组化S-P法检测GADD45β和survivin基因的蛋白表达。结果 GADD45β基因与survivin基因在HCC组织中的蛋白表达率分别为38.24%(26/68)和75.00%(51/68),两者的表达均与HCC的病理分化程度、临床分期有关(P<0.05),survivin基因的表达还与门脉癌栓有关(P<0.05)。随着survivin基因在HCC组织中蛋白表达率的升高,GADD45β基因蛋白表达强度明显下降,两者的表达呈负相关(r=-0.454,P<0.05)。结论 GADD45β基因在HCC发生发展中起抑制作用,GADD45β基因表达缺失是HCC发生发展的重要因素之一;survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用。联合检测GADD45β基因和survivin基因的蛋白表达有助于判断HCC的恶性程度和HCC患者的预后。

STIP1调控EGR1表达并促进胃癌细胞DNA损伤修复

目的探讨应激诱导磷酸化蛋白1(STIP1)表达对于胃癌化疗抵抗的影响,并进一步探讨其潜在机制。方法构建STIP1过表达及敲低胃癌细胞系后,应用CCK-8、单克隆形成等实验检测胃癌细胞对5-氟尿嘧啶及顺铂、奥沙利铂的敏感性;并对过表达STIP1的胃癌细胞系进行RNA测序并验证获得STIP1所调控的下游分子及信号通路;最后应用免疫荧光、免疫印迹等方法检测STIP1对胃癌细胞化疗抵抗的影响是否依赖于其下游分子。结果STIP1过表达可显著增强胃癌细胞对于5-氟尿嘧啶及顺铂、奥沙利铂等细胞毒性药物的抵抗作用;并可促进化疗抵抗相关基因的表达;RNA表达谱测序发现STIP1可能促进重组修复相关信号通路的活化,而免疫印迹及qPCR等检测证实STIP1过表达可促进该通路相关基因的表达;免疫荧光检测进一步证实STIP1表达可影响5-氟尿嘧啶诱导的DNA损伤的重组修复能力;而应用重组修复抑制剂干预胃癌细胞后。免疫荧光检测获得STIP1表达对于5-氟尿嘧啶所诱导的胃癌细胞DNA损伤的影响主要是通过影响其同源重组修复途径。对于其下游机制的探索,通过生物信息学分析、免疫印迹、qPCR及免疫荧光,证实STIP1可调控EGR1表达进一步影响5-氟尿嘧啶所诱导的DNA损伤重组修复。结论STIP1调控EGR1表达影响胃癌细胞DNA损伤修复,进而促进其化疗抵抗。

低浓度葫芦素-I诱导胃癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡及其机制研究

背景:葫芦素-I通过抑制STAT3信号通路在多种恶性肿瘤中发挥强大的抗癌作用,但其在胃癌中是否同样具有抗癌作用及其作用机制,目前仍不清楚。目的:通过体外实验评估低浓度葫芦素-I对人胃癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响并初步探讨其可能作用机制。方法:以低浓度葫芦素-I处理人胃腺癌细胞株AGS和HGC-27,采用CCK-8试验和集落形成试验评估其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期转换相关蛋白表达以及caspase-3/PARP细胞凋亡途径、STAT3、GADD45α和JNK/p38 MAPK信号通路激活情况。结果:低浓度葫芦素-I可在不抑制STAT3信号通路的情况下发挥强大的胃癌细胞生长抑制作用,此作用是通过诱导细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡实现的。机制研究发现葫芦素-I可通过上调GADD45α和激活JNK/p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡,发挥抗胃癌作用。结论:本研究揭示了葫芦素-I抗胃癌作用的新机制,证明葫芦素-I是一个具有临床应用前景的化疗药物。

广西巴马地区人群血清中锰超氧化物歧化酶及人类生长阻滞和DNA损伤诱导45α mRNA表达水平的研究

目的了解广西巴马地区人群血清锰超氧化物歧化酶（Mn SOD）、人类生长阻滞和DNA损伤诱导45α（GADD45α）m RNA表达水平与家庭聚集性长寿现象的关系。方法于2011年,随机选择广西巴马地区有3~4代直系亲属的家庭成员289人,其中,长寿家族史组193人,男98人,女95人,年龄为（68.15±24.63）岁;无长寿家族史组96人,男53人,女43人,年龄为（54.09±22.83）岁。在长寿家族史组中,长寿组68人,男16人,女52人,年龄为（93.71±3.48）岁;长寿后代组125人,男82人,女43人,年龄为（54.24±19.49）岁。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测血清Mn SOD、GADD45αm RNA的表达水平。结果各组人群血清Mn SOD m RNA的表达水平间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。长寿家族史组及长寿组、长寿后代组人群血清GADD45αm RNA的表达水平均高于无长寿家族史组,且长寿家族史组女性血清GADD45αm RNA的表达水平高于无长寿家族史组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Mn SOD、GADD45αm RNA的表达水平可能与广西巴马地区长寿家庭聚集性现象有关。

GADD45β蛋白抑制ALV-J在DF-1细胞中的复制

生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45β(growth arrest and DNA damage 45β,GADD45β)参与多种细胞信号通路,在病毒感染过程中发挥重要作用,但在禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)感染中研究较少。本研究中,用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF-1细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测GADD45β表达水平。此外,在过表达GADD45β和干扰GADD45β的情况下,通过Western blot、间接免疫荧光试验和ELISA检测GADD45β对ALV-J复制的影响。结果表明,ALV-J感染DF-1细胞能显著上调GADD45β表达水平(P<0.05)。过表达GADD45β后,ALV-J的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),荧光信号强度也明显低于对照组。然而,干扰GADD45β后,ALV-J的复制水平显著上调(P<0.05),说明GADD45β可以抑制ALV-J病毒复制。本研究首次发现GADD45β具有抑制ALV-J病毒复制的功能,为抗ALV-J的研究提供了新的思路和理论基础。

GADD45α、CXCL14蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床特征的关系

目的探讨生长停滞DNA损伤可诱导蛋白α(GADD45α)、趋化因子CXCL14蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床特征的关系。方法收集术后胃癌组织标本60例(胃癌组)及其对应的癌旁组织标本60例(对照组),采用免疫组化染色法检测两组标本中的GADD45α、CXCL14蛋白表达情况,并分析GADD45α、CXCL14蛋白与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移的关系。结果胃癌组标本的GADD45α、CXCL14蛋白阳性表达率分别为71.67%、78.33%,均明显高于对照组标本的30.00%、36.67%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、发生淋巴结转移的胃癌组织的GADD45α蛋白阳性表达率均高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、未发生淋巴结转移的胃癌组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同肿瘤分化程度、浸润深度的胃癌组织的GADD45α蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。低分化、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的胃癌组织的CXCL14蛋白阳性表达率均高于高中分化、浸润深度为T1+T2、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期的胃癌组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05);是否发生淋巴结转移的胃癌组织的CXCL14蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论胃癌组织中GADD45α、CXCL14蛋白表达上调,并且与患者临床特征具有一定的关系。

3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲对不同p53状态肝癌细胞中生长抑制及DNA损伤诱导基因45β的诱导差异及其机制

目的 探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲（Triapine）对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β（GADD45β）诱导差异及其调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B＋p53；体外合成GADD45β近端6个启动子序列群（-618 ～-314）,构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B＋p53；以实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）比较Triapine对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异；进一步比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；并通过半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3的表达变化测定细胞凋亡的发生和发展.结果 Triapine对Hep3B中GADD45诱导并不明显,Hep3B＋p53对Triapine敏感性明显增加,2.5、5.0μmol/L剂量下GADD45/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）比值分别为0.0425和0.0704,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示Triapine作用Hep3B＋p53后的启动子核因子（NF）-κB（-618/＋6）和E2F-1（-470/＋6）活性较Hep3B明显增强约1.3倍和0.7倍.Triapine能够更加明显地抑制Hep3B ＋p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,5μmol/L Triapine对Hep3B ＋p53DNA合成的抑制率为40.89％,对细胞克隆形成能力的抑制率达到68.16％,与Hep3B比较差异有统计学意义（P＜0.05）.Triapine作用后Hep3B＋p53的Caspase-3能迅速激活,活性高峰提前出现于6h.结论 p53在核糖核苷酸还原酶抑制剂化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导中具有重要作用,其作用机制可能是增强转录调节因子的表达水平.