δ差异显示筛选武定乌骨鸡“乌色”性状相关基因

“乌色”是乌骨鸡的一个主要性状 ,乌骨鸡的经济价值与药用价值关键在于乌骨鸡的“乌色”性状。为筛选与乌骨鸡“乌色”性状可能相关的基因 ,应用δ差异显示方法 ,系统比较全同胞武定乌骨鸡与非乌骨鸡的基因表达情况 ,回收、再扩增与纯化差异片段 ,并通过Northernblot验证、克隆和测序后 ,获得 2 9个ESTs。序列分析结果表明 ,有 8个ESTs分别与鸡已知基因骨骼肌 β原肌球蛋白基因 (A17)、贲门肌球蛋白碱轻链基因 (B5 7)、插入激活ras致癌基因 (A36 )、fra 2致癌基因 (B36 )、16SrRNA基因 (A35 )及线粒体基因组序列 (D36、C39和D9)同源 ,序列相似性分别为 97%、10 0 %、98%、98%、98%、99%、99%和 97%。 5个ESTs分别与其他生物已知基因同源 ,它们是人TTN基因转录本变异novex 2 (B5 3)、人磷酸葡糖变位酶 5基因 (B10 9)、人信号识别物 5 4kD基因 (B2 0 )、人与鼠核糖核酸酶 /血管形成抑制因子基因 (C2 6、D31) ,差异片段与它们的序列相似性分别为 82 %、82 %、87%、99%和 99% ,这些基因在鸡中还没被克隆。 13个ESTs属于新基因片段 ,其中 9个与数据库中ESTs序列相似性较高 ,4个属于全新基因片段 ,在数据库中没有与它们序列相似性较高的ESTs。选择 16条差异片段 ,根据测序结果设计特异性引物 ,利用 12个随机?