基于SSR分子标记的‘粤秀3号’黄瓜杂交种子纯度及真实性鉴定

【目的】‘粤秀3号’黄瓜具有生长势强、产量高、抗病及抗逆性强的特点,是华南地区推广面积较多的品种,本研究以期为其建立一套快速、准确、有效的种子纯度鉴定方法。【方法】利用200对SSR引物,根据杂种带为父母本互补带型的原则,对‘粤秀3号’黄瓜及其亲本进行特异性SSR标记物的筛选。将种子纯度鉴定结果与田间生物学鉴定结果进行比较,鉴定所筛选SSR引物的准确性。选取‘中农108’‘园丰6号’‘津绿5号’‘中农8号’‘津研四号’5个黄瓜品种种子及其他49份黄瓜种质材料,与‘粤秀3号’黄瓜品种同时检测,对所筛选的SSR引物特异性进行鉴定。【结果】从200对引物中筛选出符合父母带间成互补带要求的两对SSR引物(3B-10和2B-41)。3B-10引物经PCR扩增后产生160 bp的母本特异条带(P1-A)及190 bp的父本特异条带(P2-B),测序比对这两条特异性条带,发现P2-B在49~79 bp处比P1-A多了5个6碱基的简单重复序列。2B-41引物经PCR扩增后产生218 bp的母本特异条带(P1-C)和206 bp的父本特异条带(P2-D),经测序比对后发现,与P2-D相比,P1-C在120~131 bp处有12个碱基的缺失。表明两对SSR引物均可有效区分‘粤秀3号’杂交种子及其父母本,可快速准确地鉴定‘粤秀3号’黄瓜种子纯度。此外,两对SSR引物的种子纯度鉴定结果均与田间生物学鉴定结果一致。两对引物均可有效区分‘粤秀3号’黄瓜种子与‘中农108’‘园丰6号’‘津绿5号’‘中农8号’‘津研四号’5个黄瓜品种种子及其他49份黄瓜种质资源。但3B-10在49份种质资源中多态性较高,故SSR标记2B-41更适用于‘粤秀3号’的真实性鉴定。【结论】3B-10和2B-41两对SSR引物可快速、准确、有效地对‘粤秀3号’杂交种子纯度进行鉴定,鉴定操作较简单、成本较低,可替代传统杂交种子纯度鉴定的方法,其商业应用价值极高。