应用real-time PCR定量检测果园葡萄霜霉病菌潜伏侵染

为明确葡萄霜霉病菌潜伏侵染阶段的菌量与病害发生的关系,本研究对贺兰山东麓宁夏立兰酒庄酿酒葡萄园3个试验样地进行采样调查,分析3个样地检测的分子病情指数(MDI)与果园田间调查的病情指数(DI)的相关性。结果表明,宁夏立兰酒庄酿酒葡萄园3个样地的MDI和DI呈极显著相关,3个样地的MDI均与采样后15 d的DI拟合性最高;当MDI值为0.0035~0.1841时,采样后12 d葡萄霜霉病在果园零星发生。MDI大于0.0035时,可作为当地酿酒葡萄霜霉病防治预警指标。

葡萄白粉病菌潜伏侵染量Real-time PCR检测方法建立

根据葡萄EF1-α基因序列设计引物F-g-6/R-g-6,根据葡萄白粉菌细胞色素P450基因序列设计特异性引物F-P450-Un/R-Un,分别建立葡萄叶片和葡萄白粉菌的real-time PCR检测方法,用于计算分子病情指数。结果表明:使用real-time PCR方法对酿酒葡萄‘赤霞珠’叶片DNA和葡萄白粉菌DNA测定的灵敏度分别为10^(-2)和10^(-5) ng·μL^(-1),分别是常规PCR的100倍和1 000倍。同时建立葡萄叶片DNA和白粉菌DNA各自的标准曲线,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.99637和0.99564。利用建立的real-time PCR检测方法对葡萄尚未发病的30个田间样品进行检测,共检测到22个样品中含有葡萄白粉菌,其分子病情指数与18d后的田间病情指数极显著相关(相关系数为0.916)。建立的葡萄白粉菌潜伏侵染量real-timePCR分子检测体系,能够为葡萄白粉病的早期诊断和监测预警提供理论支持。